CHAPITRE II

Action de la Lysocithine préparée avec les venins de Cobra (Naja tripudians Merr.) et de Vipère (Vipera aspis Merr.), sur le Streptocoque.

Au cours de l’étude des formes hypertrophiées du Streplocoque, précédemment décrites, notre attention s’est particulièrement fixée sur le corps, généralement central, que présente ce germe. Toujours plus intensément colorable par les colorants nucléaires, ce corps donne à première vue l'impression d’un noyau. Nous avons essayé de le différencier et de le libérer des autres portions de la cellule microbienne en faisant agir sur des cultures liquides du Streplocoque une solution de Lysocithine, préparée en partant

des venins de Cobra et de Vipère.

Historique de la Lysocithine.

P. Kyes [47] fut le premier en 1903 à démontrer

que le facteur complémentaire nécessaire à la produc-

tion de l'hémolyse des globules rouges par le Venin de Cobra est la lécithine. Il se forme une substance nouvelle : le cobra-lécithide hémolytique. L’hémolyse est empêchée par la cholestérine.

C. Delezenne et S. Ledebt [21], en 1911, approfondirent la question et provoquèrent la formation d'une substance hémolytique en faisant agir le venin de Cobra sur le sérum de cheval et sur le vitellus de l'œuf.

En 1914, S. Ledebt [49] étudia en détails les propriétés de cette substance hémolytique qu’elle appela : « Lysocithine ».

C. Delezenne et E. Fourneau [20|, la même année, définirent sa composition chimique : c’est l’anhydride de l’éther palmito-glycérophosphorique de la choline, mélangé d’un peu d’éther stéarique.

Il est intéressant de noter que Fourneau et Page ont préparé synthétiquement une série d’éthers de la choline, parents de la Lysocithine, dont le pouvoir hémolytique est à peine inférieur à celui de la Lysocithine.

En 1932, G. Belfanti et C. Arnaudi [6] ont obtenu de la Lysocithine en faisant agir une diastase isolée

du pancréas sur la lécithine du pancréas.

Préparation de la Lysocithine.

Quel qu’ait été le venin que nous ayions employé, la même technique fermentaire fut suivie, pour pré-

parer la Lysocithine correspondante. Nous nous

ho

sommes inspiré d'une part des recherches de Mlle S. Ledebt, et, d'autre part, de l'étude due à E. Rousseau, de la résistance à 70° de la phosphodiastase du venin de Cobra.

La technique de la préparation est la suivante : trois vitellus d'œufs, renfermant environ 3 gr. de lécithine, sont délayés au mortier dans 150 cm® de sérum physiologique stérile. L’émulsion, additionnée de XX gouttes de toluène, pour empêcher le développement de germes exogènes au cours de la fermentation, reçoit o gr. o2 de venin de Cobra ou de Vipère, préalablement dissous dans 5 cm? de sérum stérile. Cette émulsion est ensuite exactement maintenue à + 50° pendant trois heures.

Au cours de cette action thermique, la phosphodiastase du venin hydrolyse la lécithine du vitellus en donnant de la Lysocithine.

Une dessiccation de l’émulsion au bain-marie à + 809, sous vide réduit, suit aussitôt l’opération fermentaire précédente, puis la masse plastique obtenue, jaune, coupée en fines lanières, est mise pendant douze heures au contact de 100 cm° d’acétone anhyÿdre, qui dissout l'huile du vitellus, le cholestérol et la lécithine qui a échappé à lhydrolyse.

On décante l’acétone, les lanières sont séchées à l'air, pulvérisées finement et la poudre obtenue est mise une seconde fois au contact de 100 em° d’acétone anhydre.

Ce deuxième épuisement acétonique étant terminé,

la poudre sèche de vitellus d'œuf est glissée dans une

cartouche en cellulose disposée dans une ampoule cylindrique à décantation, et épuisée par de lalcool à 96° à la température de + 409, jusqu'à ce qu'une goutte de ce solvant, déposée sur une lame flambée, n'abandonne plus rien à l'évaporation.

Toutes les fractions d’alcool d’épuisement sont réunies, filtrées, concentrées à 4o cm° dans le vide. Ce liquide est trouble ; il s’éclaircit complètement quand, en dehors du vide, on le chauffe à + 60° environ. La Lysocithine est en effet plus soluble dans lPalcool chaud que froid. Le liquide alcoolique chaud, légèrement jaune, est versé par fractions successives dans un mélange de : 300 cm* d’acétone anhydre, 200 cm d’éther anhydre.

Il se forme un floculat neigeux de Lysocithine qu’on recueille, reprend une seconde fois par 4o cm? à bo cm d'alcool fort (à + 60°) et qu’on verse enfin dans le mélange d’acétone et d’éther. Le flacon est placé vingt-quatre heures à la glacière dont le froid aide au rassemblement du précipité de Lysocithine, On recueille celui-ci sur un double filtre, lequel est placé finalement dans le vide afin de débarrasser la Lysocithine amorphe, mais pure, de toutes «traces d’acétone et d’éther.

La Lysocithine amorphe se présente sous un aspect cireux, ferme ; elle se dissout facilement dans l’eau à chaud (+ 500-6o0), mais, par le refroidissement, la

solution se trouble.

DT; pe Rendement pondéral.

Venin de Cobra de haut degré neuroloxique.

Le rendement en Lysocithine, avec 3 vitellus d'œufs, oscille entre 91 et 98 du poids de la lécithine de ces jaunes.

Venin de Vipère.

Employé en mêmes proportions avec 3 vitellus d'œufs, toutes conditions fermentaires étant iden-

tiques pour les deux venins, le rendement a été de

Action biophysique de la Lysocithine (Hémolyse).

Ce phosphatide est un agent d'hémolyse puissant, puisqu'il suffit de o mgr. 008 à o mgr. or de Lysocithine pour provoquer l’hémolyse (1 à 3 minutes) de 1 cm$ de globules de cheval à 5 %,.

Cette action lytique est d’abord précédée de l'union immédiate de la Lysocithine avec le cholestérol hématique, cellulaire, molécule à molécule, en donnant un complexe indifférent (Lysocithine + cholestérol).

Ainsi que l'ont étudié Delezenne et Fourneau, l’association de ces deux substances donne naissance au complexe indifférent précité qui est dépourvu d'action hémolytique et cytolytique mais qui présente cette particularité de retenir l’eau avec la plus grande

énergie.

Ces auteurs pensent que c'est à cette hygrophilie que doit être rapportée l’action si puissante de la Lysocithine. En s’unissant au cholestérol des globules rouges, la Lysocithine augmenterait le coefficient d’imbibition de ces éléments dans des proportions telles qu'il y aurait une diffusion du contenu protoplasmique àu dehors par suite de l’éclatement de la membrane cellulaire.

En résumé, au cours de l’hémolyse par la Lysocithine, une réaction, biochimique d’abord, se traduit par la formation d’un complexe indifférent, inactif :Lysocithine + cholestérol). Elle est suivie d’une action biophysique qui, à son tour, provoque l’éclatement de l’enveloppe des hématies. Ces deux actions biophysique et biochimique sont presque simul-

tanées.

Action cytolvtique de la Lysocithine,

Mlle S. Ledebt écrit dans sa thèse : « Injectée aux animaux, la Lysocithine pure (exempte de toute trace de protéine) ne provoque la formation d’aucun anti- COrPS :

«En injection sous-cutanée, elle est atoxique et ne détermine que des phénomènes locaux (œædèmes, escharres, nécrose du tissu cellulaire) qui sont dus à son action cyltolytique générale.

« La Lysocithine, ajoute l'auteur, n’est pas un poison exclusivement hémolytique, elle agit, à des degrés variables, sur la plupart des éléments cellulaires :

c'est une cytolysine au sens le plus large du mot.

por

Elle détruit les leucocytes, les cellules épithéliales, les cellules des tissus ou des organes. Mise au contact, in vitro, avec les éléments cellulaires du foie, du cerveau, du rein, elle les altère profondément et si la dose employée est suffisante, elle les dissout totale-

ment, comme elle dissout les hématies ».

En ce qui concerne plus particulièrement les leucocytes, E. Rousseau, qui poursuit, au Laboratoire du Professeur Lutz, des études hématologiques sur les néoplasies humaines, nous à montré que si l’action de la Lysocithine s'exerce instantanément sur l’enveloppe des polynucléaires (cholestérol), par contre leur noyau, libéré, résiste, pendant un temps plus ou moins long, à l’action du phosphatide ; c’est une question de temps et de dose.

Depuis l’époque (1914) à laquelle parut la thèse de Mlle S. Ledebt, d’autres recherches sont venues con-

firmer le pouvoir cytolytique de la lysocithine.

Tout d’abord A. Calmette, A. Saenz et E. Costil (13) ont recherché les eflets cytolytiques exercés par le venin de Cobra dans l’adénocarcinome des souris. En injectant ce venin à quarante-huit heures d'intervalle, à doses infra-mortelles, dans des adénocarcinomes de la grosseur d’une noix, siégeant à la mamelle de la souris, la tumeur, à partir du seizième jour de la greffe, s’est affaissée, ramollie, s’est enfin ulcérée en laissant échapper. par ponction, un Hquide Jaune, amicrobien, constitué, à l'examen microsco-

pique par des placards de substance nécrosée enser-

ZAOÛRE

rant des cellules à l’état de dégénérescence hyaline très altérées.

De leur côté, C. Taguet et E. Rousseau [79|, en injectant du Venin de Cobra (10 à 15 UÜ. S.) à la baseet autour d’épithéliomas du sein, en des endroits espacés, n’ont obtenu ni la régression, ni la fonte tumorale, mais des effets lytiques qui étaient localisés à chaque pertuis d'injection, d’où s’écoulait une sérosité jaune, amicrobienne, renfermant des cellules cancéreuses très altérées. L'action cytolytique, au cours de ces essais thérapeutiques, s’est toujours localisée au trajet des injections, par suite de l’impossibilité à laquelle se sont heurtés ces auteurs de pouvoir faire diffuser la solution de venin au travers de toute la masse tumorale, en raison de sa nature fibro-plastique.

Enfin, Guerrini [27], au cours de recherches sur les Lysocithines, a montré qu'à la suite d’injections internes, il y avait production d’hémorragies, car la

Lysocithine détruit la paroi des capillaires.

Ce sont les expériences de E. Rousseau, faisant agir la Lysocithine sur les leucocytes, qui ont été à l'origine de nos recherches sur l’action cytolytique possible de cette même substance sur le Sireplocoque

hypertrophié.