PURIFICATION PAR LE SO,(NHL

Nous avons entrepris de concentrer les phages par le SO,(NH.), et essayé de voir si l’on peut, en même temps, se débarrasser de la toxine.

Technique. — Le lysat, après alcalinisation à pH 7,8 par CO,Na, cristallisé et centrifugation, est traité par CaCL à 4 p. 100 et centrifugé à nouveau. Après cette première purification, nous avons employé le SO,(NH,); à trois doses différentes :

a) Avec 25 g. p. 100 de SO,(NH,):, le précipité étant repris par 1/10° du volume initial d’eau physiologique, la

proportion des phages est de 2 dans le surnageant pour 3 dans le précipité; |

b) Avec 40 g. p. 100 de SO,(NH.,), la proportion, dans les mêmes conditions, est de 1 dans le surnageant pour 4 dans le précipité;

c) Avec SO,(NH,), à saturation, la proportion est de 1 dans le surnageant pour 5 dans le précipité.

C’est donc par le SO,(NH,); à saturation que l’on précipite le plus complètement les phages.

Signalons que, dans ces deux dernières conditions, le précipité, après centrifugation, reste en surface à cause de la densité du milieu; nous décantons, dans ce cas, le liquide clair à la pipette.

Nous avons effectué nos expériences avec le SO,(NH.); à saturation. Le lysat, après la première purification par le phosphate de calcium (1), est traité par SO.(NH.), jusqu’à léger excès. On centrifuge dix minutes et on décante le liquide clair. Celui-ci est dialysé pendant douze heures sous légère pression, contre eau distillée, puis on lui fait subir une précipitation par l’alcool à — 15°. Le précipité est repris par 1/10° de son volume de solution tampon de pH 6,8 après lavage à l’éther. On injecte quatre souris avec ce liquide : deux reçoivent 1 cem°, et deux 1/2 cm. Les quatre souris meurent en quinze minutes. La toxine est donc restée dans le liquide clair. Le précipité dû au SO.(NH.), est à son tour repris par 1/10° du volume initial de solution. tampon de pH 68 et, après centrifugation pour éliminer les impuretés, on dialyse douze heures sous pression contre eau distillée. Quatre souris sont injectées avec ce liquide : deux reçoivent 1 cm*; et deux 2 cm°. Lesïquatre souris survivent.

Nous pouvons donc conclure qu’en traitant un lysat par le SO,(NH,), à saturation, on peut, d’une part, concentrer les phages dans une proportion de 1 à 5 et, d’autre part, se

(1) Suivant la technique de R, WaHL et de ses collaborateurs [25].

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débarrasser de la toxine qui, n'étant pas entraînée dans le précipité, reste dans le liquide clair. Malgré ces avantages, ce procédé nécessite un grand nombre de manipulations assez délicates, c’est pourquoi nous avons eSSAvÉ d'autres méthodes.