JL. —- CULTURES EN MILIEU LIQUIDE

Les conditions expérimentales sont les suivantes : des tubes contenant 10 cm* d’eau peptonée sont ensemencés avec des quantités connues et variables de bactéries et reçoivent en même temps des quantités variables de phages.

Des tubes témoins reçoivent les mêmes quantités de bactéries que les précédents. D’autres témoins servent à vérifier la stérilité des préparations de phages.

Quand il y a stérilisation, on ne voit se développer aucune culture, même après plusieurs jours, et un ensemencement sur gélose reste stérile. Les pousses bien visibles, même suivies de lyse partielle ou apparemment totale, ne donnent jamais de stérilisation in vitro. Quand il n’y a pas stérilisation, l’apparition d’une culture visible se fait tôt ou tard, soit en même temps que dans la culture témoin, soit avec ur: retard de quelques heures à plusieurs jours, soit avant la culture témoin.

Les phages peuvent donc avoir une action stérilisante, retardatrice ou accélératrice.

L'action du phage dépend de la race et du mode de

nel

préparation de celui-ci, et de sa concentration. De plus, on peut modifier cette action en mélangeant plusieurs races de phages. Nous allons étudier successivement ces trois points.

a) Influence de la race et du mode de préparation du phage

Tous les essais ont été faits avec 1 em° de Iysat dans 10 cm° d’eau peptonée.

Nous allons envisager successivement les essais faits avec les phages D 4 et T5 préparés sur différentes souches et accessoirement avec d’autres phages. Tous ces essais ont été effectués sur la souche IT.

1° Phage D 4/2, titre : 1,92 X 10° par cm'.

La stérilisation de 200 germes par ce phage n’est pas rare, mais elle est inconstante. Pour les quantités de germes supérieures, elle est exceptionnelle, et le retard dans la pousse par rapport au témoin est souvent pratiquement nul.

2° Phage D 4/1, titre : 3 X 10° par cmi.

Il n’y à jamais eu de stérilisation, quel que soit le nombre de germes, tout au plus observe-t-on un léger retard.

3° Phages D 5/1 et D 5/2.

Ces deux phages n’ont, eux aussi, aucune action stéri-

lisante.

4° Phage T-5/0, titre : 4,5 X 105 par cm.

Ce phage a stérilisé toujours définitivement 2.000 germes. Pour 20.000, 200.000 et 2 millions de germes, nous avons observé tantôt des stérilisations définitives, tantôt pas de stérilisation, avec le plus souvent un retard plus où moins grand dans la pousse de la culture.

5° Phage T5/2, titre : 1,6 X 105 par cm.

Ce phage a une action analogue au précédent, son effet

stérilisant semble cependant moins fréquent.

6° Phage T 5/1, titre : 1,2 X 107 par ém*.

Ce phage ne donne pas de stérilisation et provoque seule-

ment un léger retard dans la pousse des cultures.

PSE

Un certain nombre de faits intéressants ont été observés. L'action varie, toutes choses égales d’ailleurs, suivant le phage utilisé et pour le même phage suivant la souche avec laquelle il a été préparé.

L'action stérilisante est assez rare. Elle a surtout été observée avec le phage T 5, plus rarement avec D 4, jamais avec D5. Encore faut-il que les phages soient en grand excès et les bactéries peu nombreuses.

En outre, elle n’est pas constante pour des conditions expérimentales identiques. Par exemple, si on ensemence en même temps une vingtaine de tubes avec 20.000 bactéries et 1 em° de la même préparation de T 5, on constate une stérilisation dans une partie des tubes seulement.

L'action retardatrice a été très souvent observée, elle est parfois très importante, de l’ordre de quarante-huit heures, ce qui fait croire d’abord, dans certains cas, à une stérilisation totale.

Après quelques jours d’étuve, à la fin de l’expérience, les tubes contenant le phage sont, suivant les cas, plus clairs ou moins clairs que les tubes témoins.

Enfin, les germes qui ont poussé dans les tubes qui ont reçu le phage sont, en fin d’expérience, habituellement résistants à ce phage. Il y a pourtant des exceptions.

Etant donné qu’il y a toujours un excès de phages par rapport aux germes, on aurait pu penser que la stérilisation serait complète s’il ne se trouvait aucun résistant parmi les germes ensemencés.

Or, on observe que la stérilisation est possible, mais inconstante, en utilisant, avec la même quantité du même phage, des quantités de germes de la même culture qui sont entre elles dans le rapport de 1 à 100.

Il n’est donc pas possible que la stérilisation dépende uniquement de l’absence de bactéries résistantes.

I faut donc penser que l’action du phage sur les bactéries sensibles n’est pas le seul facteur qui intervienne dans le phénomène de la stérilisation,

b) Influence de la concentration du phage

La concentration du phage et les proportions phagesgermes ont une influence certaine sur la stérilisation et sur le retard de la pousse des cultures. Nous avons choisi pour faire nos essais les deux phages nous donnant des stérilisations assez fréquentes :

le T5/0, titre : 45 X 10° par cm:

ete 15/2; titre.: 1,6 X° 105 par cm:.

Nous avons utilisé les quantités suivantes de germes de la souche II : 2.000, 20.000, 200.000 et 2 millions. Le phage a été mis en contact dans des tubes de 10 em* d’eau peptonée avec chaque quantité de germes à raison de 1 cm° de lysat pur, 1 em* dilué au 1/10 et 1 em° au 1/100°. Les tubes sont laissés à l’étuve à 37°. Nous allons mentionner les résultats dans deux tableaux pour T 5/2 et T 5/0, en mentionnant les pousses plus ou moins visibles par les signes suivants

1° Phage T 5/2

DRE D voue 16h. | 23h. | 40h. | 88h.

de germes de phage | | . … 2.000 | 1 cm° 0 0 0 0 | 2.000 | 1 em° au 1/10° 0 () 0 () 2:000 tic al (0e (2 l- sea HEC 20.000 | 1cm ae t0 Lee MAN 20.000 | 1 cm° au 1/10° 2e Def RUE Dr + + SHARE 20.000 ! 1 cm° à 10° en QE ARE 200.000 : 1 cm + {) AA LE 2 200.000 | 1 em° au 1/10° Re ET Ole ARTS) 200.000 |: 1 cm à 10 | 0 Le DAME NEE RE 2.000.000 1 em’ LEO LHELLE TETE 2.000.000 |: 1 cm° au 1/10) ++ A ere ACCUSE 2.000.000 |! 1 cm* à 10 + HR EU LE L++ÆT +++

Le phage pur et au 1/10° stérilise 2.000 germes; employé à la dilution 10 ?, il retarde la pousse mais ne stérilise pas. Avec 2.000 et 200.000 germes, il y a une légère pousse puis une lyse suivie de repousse. Avec 200.000 germes et le phage à 107*, la pousse est retardée, suivie d’une lyse puis d'une repousse.

Nous essaierons d'interpréter ces faits dans le chapitre suivant, consacré à l’étude de Pévolution des cultures.

2° Phage T 5/0

Nous voyons, d’après les deux expériences précédentes, que la nécessité d’une grande concentration de phage et d'une faible quantité de bactéries est évidente pour obtenir une stérilisation in vitro.

- Pour le phage T 5/0, par exemple :

A la dose de 1 em’, il stérilise 2.000 et 20.000 germes et retarde la pousse avec 200.000 et 2 millions;

A la dose de 1/2 em, il stérilise 2.000 germes et retarde la pousse de 20.000, 200.000 et 2 millions;

Éd