MILIEU FAVORABLE
milieux organiques sont infiniment supérieurs, et actuellement nous nous en servons à l'exclusion de tous autres. à
On peut se servir indifféremment de liquide d’ascite ou de sérum.
L'ascite présente l'avantage de pouvoir êlre indéfiniment conservée en tubes stériles.
Le sérum permet d'examiner rapidement et à la fois, pour un même malade, l’activité et le pouvoir leucoactivant. Le même tube {sérum normal, leucocytes normaux) sertalors de témoin pour les deux recherches.
Qu'il s'agisse de sérum ou d’ascite, il faut ajouter un anti-coagulant qui empêche la coagulation de la goutte de sang contenant les leucocytes.
Nous noùs sommes arrêtés au.sérum artificiel citraté dont voici la formule :
GnlorunetderSodIUNES RS CEA ET 0) Gitraler de SOU RE ER EN LG) Pautdis lé RE RM EN LETE qi. pour 1.000 or.
Ce sérum très sensiblement isotonique ne gêne en
rien la phagocytose.
On le répartit en tubes qu'on stérilise de façon à éviter d'infecter d’un seul coup la totalité du liquide. Dans chacune de nos expériences, le milieu se trouve ainsi toujours le même, à savoir :
Liquide organique (sérum, ascite). . | ee : : âà 10 gouttes Sérumiartificiel<elipaté. nm. 5. | ET ap Précisons maintenant la technique de chaque recherché:
PE LS ET Cl ph AUS Ÿ LATINE nn
F | 1° Activité des leucocytes du sang (').
On emploie des pipettes effilées bouchées à leur extrémité conformément au schéma cicontre. Le mieux est de se servir d’ampoules à injections de 1 centimètre cube que l’on coupe par le milieu à l’aide d’une scie à verre.
Chaque moitié constitue une pipette toute faite
du diamètre et de la contenance convenables.
On réalise alors les mélanges suivants :
Pipette À :
Sérum normal ou ascite. .
1 Sérum artificiel citraté.
Émulsion de levures . . . . . . . 4 goutte San nor Al (LE NOIR ENS RIER NTE 4 goutte fine
âà 10 gouttes
Pipeite Br
Sérum normal ou ascite.
Sérum artificiel citraté.
Émulsion:de lévures AVE MUTUEL E 4 goutte S'anerdérlatn alterne TR 4 goutte fine
àaà 10 gouttes
On brasse soigneusement.
On porte à l’étuve à 37° pendant une demi-heure. On centrifuge pendant sept à dix minutes.
Le culot vient se rassembler dans la partie inférieure
1. AcHARD et Foix, l’Activité leucocytaire. C. R. Soc. Biol. 28 novembre 1908, p. 51.
AcnarD, Vitalité, résistance et activité des. globules blancs dans les maladies. Sem. méd., 3 novembre 1909.
OUR Fr
Lu À
{ragile du culot.
effilée de la pipette qui prend l’aspect conforme au
schéma ci-contre. La partie inférieure de ce culot est uniquement formée de globules rouges. À la partie supérieure se rassemblent les globules blancs en une pellicule mince et très mobile.
On décante donc à la pipette avec beaucoup de
précaution de façon à ne pas agiter cette partie
On laisse au-dessus environ un tiers de cenlüimètre de liquide.
Alors d’un trait léger de scie à verre, on détache la partie inférieure du eulot, puis par l’orifice supérieur, on souffle le restant sur une lame.
On mélange un peu sur la lame, puis on étale comme une préparation ordinaire de sang (‘).
Les leucocytes viennent tous dans la partie terminale à bords frangés de l’étalement. C’est 1à qu'il faudra les numérer. On colore à l’hématéine-éosine après coloration des levures par la méthode de Gram, au bleu polychrome Unna en différenciant par l’alcool absolu, au Giemsa dilué, au
4. N. B. — Nous cmployons depuis quelque temps avec succès la technique suivante qui donne des préparations où la répartition des leucocytes est plus régulière et partant la lecture plus facile.
On aspire dans une pipette tout le culot globules rouges et blancs, on mélange sur la lame, on étale avec l'extrémité de la pipette comme pour un culot quelconque de l’exsudat.
On obtient ainsi une préparation épaisse que l’on fixe une à deux secondes par l'acide chromique à 1 p. 100. On lave alors dans l’eau additionnée d'un peu d'acide acétique. Les globules rouges sont dissous, les blancs restent fixés ainsi que les levures.
Leishmann. Toutes ces colorations donnent des pré-, parations faciles à lire.
On compte alors d'une part 100 polynucléaires, de l’autre les levures qu'ils ont englobées. Dans certaines préparations où les polynucléaires sont rares, par suite d’une centrifugation mal faite où d” un décantage malheureux, on pourra se contenter de 50 polynucléaires. Mais ceci constitue un minimum. Au-dessous, on court le risque d’avoir un résultat erroné.
Le rapport:
Levures incluses
"©" — donne l'activité brute variable avec l’émulsion, Polynucléaires
le temps, etc.
Le rapport
Activité des globules de la malade
PS REED UE SR RE US eu ’activité rela- Activité des globules normaux témoins GOOM
tive, seul chiffre intéressant.
Supposons pour fixer les idées que 100 leucocytes d’une malade aient englobé 120 levures. On aura:
Levures «2120 20 ,
Polynucléaires 100 1,20 activité brute.
Si, dans les mêmes conditions, 100 leucocytes normaux ont englobé 80 levures, on aura:
Levures 80 DEC VRLS Police e 0 100 0,80 activité normale.
Et pour l’activité proprement dite :
Activité des leucocytes de la malade __ 1,20 Activité des leucocytes normaux 0,80
TT
C'est un calcul analogue à celui dont on se sert pour calculer le pouvoir opsonisant du sérum.
On peut se demander pourquoi nous ne faisons porter notre calcul que sur les polynucléaires et non sur la totalité des leucocytes. C’est que l’activité des divers types de leucocytes varie dans de très fortes proportions, comme nous le verrons plus loin.
Or les mononucléaires ne se trouvent plus dès lors sur la préparation dans la proportion réelle de la formule leucocytaire.
Il s'ensuit que l’on peut trouver sur une préparation 60 p. 100 de lymphocytes d'activité sensiblement nulle alors qu’une lame provenant du même sang n'en renfermera que 20 p. 100. On serait ainsi conduit à calculer la réussite de la centrifugation plutôt que l’activité réelle des leucocytes.
Il faut donc s’en tenir aux seuls polynucléaires principaux agents de la phagocytose.
2° Activité des cellules d'exsudat.
On peut déterminer par le même procédé l’activité phagoeytaire d’autres cellules que les leucocytes du sang. Nous avons été conduit ainsi à rechercher l’activité des leucocytes d’exsudat:
Dans les pleurésies ;
Les ascites;
Les méningites ;
Les arthrites ;
Le pus.
La recherche se fait toujours en deux tubes. Nous n'insisterons pas sur le tube témoin dont la teneur est identique à celle de la pipette témoin dans la recherche de l’activité leucocytaire sanguine, à savoir:
Sérum normal ouascite. 74 . . .) 4
à FER : à 40 gouttes Sérum artificiel citraté. ) Émulsion de leyures. } : .. 1. 1 goutte Sang normal témoin) ere OEUNE 1 goutte fine
Pour le tube contenant les cellules d’exsudat, la technique est analogue mais‘non identique.
En effet :
1° L'absence de globules rouges rendant inutile l'emploi de pipettes spéciales, on se servira d’un tube à centrifuger ordinaire.
2° Il est nécessaire de préparer une émulsion convenable de cellules d’exsudat. Pour cela, le mieux est de recevoir l’exsudat dans un tube contenant du sérum artificiel citraté, lequel évite la coagulation. Cette précaution est inutile pour les liquides ne coagulant pas, tel que le liquide céphalo-rachidien.
On centrifuge, on décante et l’on dilue le culot, en s’aidant au besoin de l’hématimètre de facon à avoir une émulsion dont la teneur en cellules actives sait comparable à celle du sang en leucocytes. Parmi les cellules actives, 1l faut ranger les leucocytes polynucléaires, les grands mononucléaires, les cellules endothéliales et les macrophages que l’on trouve dans certains épanchements sanglants. Lés lymphocytes doivent, malgré quelques rares exceptions, être tenus pour inactifs. |
a pu POUVOIR LEUCO-ACTIVANT DU Meentie
ANS En définitif, ôn Fabee Pre un lube à centrifuger rdinairele mélange suivant : |
er normal ou ascite. à Le is eu artificiel citraté . à RRAARBOUtLeS | 1 goutte MANSouttern
Pa “Où porte une tee FATAL l'étuve à Fe ou centri- | luge, on décante, on étale comme pour unepréparation ordinaire et l’on numère comme pour le sang.
3 CNE du pouvoir durs -activant du sérum.
1 La recherche du pouvoir leuco-activant du sérum se fait en réalisant les OUR suivants :
à Pipelte A:
Sérum normal (témoin) :
Sérum artificiel citraté. ER a Émulsion de levures. ne ss CE 1 goutte Sanatbimal at ELA oc ai 4 goutte fine
| 44 10 gouttes
Sérum de la malade. .
Sérum artificiel citraté.
Mimulsion,de levhres leur: * 4 goutte
Sang normal. . . 1 SN OR NE TE goutte fine
+ äà 10 gouttes
On procède ensuite comme pour la recherche de à l D its et le rapport de la phagocytose dans la | pipette B (sérum de la malade) à la phagocytose dans
la pipette A {sérum normal) donne le pouvoir leucoactivant du sérum.
Supposons par exemple que dans la pipette de sérum normal, 100 leucocytes aient phagocyté 150 levures et que dans la pipette.du sérum de la malade, 100 leucocytes aient phagocyté 50 levures, A
Le pouvoir leuco-activant brut du sérum normal Sera :
150 levures
100 leucocytes — 200
Le pouvoir leuco-activant brut du sérum de la ma-
lade sera :
50 levures
100 Jeucocytes is
et le pouvoir leuco-activant relatif, seule valeur intéressante, sera :
Pouvoir leuco-activant du sérum de la malade Pouvoir leuco-activant du sérum normal Fr Prius Nous avons déjà montré comment ce pouvoir leucoactivant se différenciait du pouvoir opsonisant, ce dernier étant spécifique et antimicrobien; le pouvoir leuco-. activant non spécifique et stimulant l’activité des phagocytes (stimulines de Metchnikoff). Récemment, cependant, quelques auteurs ont fait des recherches d'index opsoniques en dehors de toute idée de spécificité. Une telle conception de l’opsonisation se rapproche évidemment de notre conception du pouvoir leuco-activant. :
4° Recherche du pouvoir leuco-activant des humeurs.
On procède exactement comme pour les sérums, on réalise les mélanges suivants :
Pipeite À:
Sérum normal. .
Sérum artificiel citraté. äà 10 gouttes
Émulsion de levures. . . . . . . 1 goutte SADÉPOLIN I NE DE RMS ES RU A 1 goutte fine Pipette B :
Humeur à examiner. .
à Pa : ; 4 10 gouttes Sérum artificiel citraté. 8
Émulsion. de levures MA.) 104: 1 goutte
SATÉÉLOCMNA IAE Te MOTTE er. 1 goutte fine Pipette B : : :
TETE donne le pouvoir leuco-activant de l’humeur
à examiner.
On peut rechercher ainsi le pouvoir leuco-activant des humeurs normales (humeur aqueuse, liquide céphalo-rachidien) et des humeurs pathologiques (pleurésies, ascites, œdèmes).
5. Recherches combinées de l’activité leucocytaire et du pouvoir leuco-activant du sérum.
L2 Dans la majorité des cas, il y a intérêt à suivre à la fois chez un sujet donné l’activité leucocytaire et le pouvoir leuco-activant du sérum.
mOn peut. le Ne de façon simple et Re en sant les mélanges suivants : 1
- Pipette À (témoin) :
Sérum normal . . . . . .. La id AR Sérum artificiel citraté . . 2°. : | a Émulsion de levures. . . : . . 1 goutte SanS norte EN PTS AP DRAP 1 goutte fine.
| Pipele B (activité) :
Sérum normal Sérum artificiel citraté à
Émulsion de levures . . ! . . . È 1 goutte Sang dela" malade. 40,200 1 goutte fine
HR {aa 10 gouttes
Pipette C (pouvoir leuco-activant) :
Sérum de la malalade Sérum artificiel citraté Émulsiôn dede vures AT Le ONE goutte PE S ane HOT MA SN MEN Ar À goutte fine
dr | äà 10 gouttes U
Le rapport :
Pipette B Activité pathologique
Sn — d l'activité leuco Re Pipette À Activité normale ue RS Nues SAGE L'er
Le rapport ;
Pipette C __ Pouvoir leuco-activant pense pere AE Pouvoir leuco-activant normal | voir leuco- activant du sérum - RCE
donne le pou
Telle est notre méthode, méthode simple, aisée. el 5
RECHERCHES COMBINÉES DES PROPRIÉTÉS LEUCOUYTAIRES ol
rapide, nécessitant un outillage peu compliqué (quelques pipettes, du sérum artificiel citraté, du liquide d'ascite ou du sérum normal). Voici les résultats qu'elle nous a permis d'obtenir !).
1. Acxarp et Forx,.C. R. Soc. Biol., 5 décembre 1908 et 12 juin
CHABITRE "IT
Tout leucocyte est susceptible d’être actif.
Metchnikoff autrefois, refusait la phagocytose aux lymphocytes, mais cette proposition pour être globalement exacte ne l’est pas cependant tout à fait; et nous avons fréquemment rencontré dans nos préparations des lymphocytes ayant phagocyté.
Toutefois, la faculté d’englobement, pour être commune aux diverses sortes de leucocytes, ne leur appartient pas à un égal degré. Nous avons déjà dit que c'est pour cette raison que, par activité leucocytaire,
nous entendons l’activité des seuls leucocytes polynu-
cléaires, principaux agents de la phagocytose. Il-est
cependant important de connaître la valeur propre des autres éléments, et c’est pourquoi dans cette première partie nous envisagerons successivement :
1° L'activité leucocytaire globale, c'est-à-dire des polynucléaires etses variations, suivant les conditions extérieures de température et de milieu ;
> L'activité des ‘différentes espèces de leucocytes,
pers Pate “ sang normal RTE no rrate pot pe pathologique.
| L'activité leucocytaire normale est Singuliérement ix Ke pourvu que l’on se place dans des conditions identiques de milieu, de température et de dilution de la 4 substance phagocytable. Voici à titre d’exemple une série de chiffres donnés par des sujets normaux dans des conditions identiques *
4 Leucocytes normaur : dans une émulsion très riche D” liquide d' ascite)
Sujet normal.
Sciatique légère.
Vieillard Pithiatique " __ Sujet normal.
Arthrite chronique 7% Sciatique légère + Sujet normal.
MiCes chiffres représentent naturellement des activités leucocy-
es brutes, € ‘est-à- dire le rapport levures sur leucocytes; il
+ agit, dans tous les cas, soit de leucocytes normaux dans le sérum
normal, soit de leucocytes normaux dans le liquide de Fleig (actijé 1 PES | DTA
Aortite :ChrOnIqUeS Lee. LU MARNITENMERENE VEINES Sujet:normal ee ET RER 0,50 Hémiplégie ancienne. © : - + + «1? 0,58 Süjetinormale nt Re MEN A TAN 0,50 Hémiplégie ancienne: *. . ::. . . .. « . 0,50 Etc.
Leucocyte normaux, dans une émulsion moyenne :- (milieu : sérum normal)
Hémiplégie ancienne. LU UT SP OI Sujet normale 7408 NEPAL ACER Sciatique légère 4x URL PAU ONE Sue tinonmal Re RO MRC TRS
Leucocytes normaux : dans le liquide de Fleig, émulsion extrêmement riche.
Sciatique légère Sec D NE MARNE TeTETEE D 00
Sujet -HOobMa be tte) NAT ES TRE 0,78 ais SR UE A RTE A D 0 er AU Jeunemère et APPRIS AR ER RE 020 Set normal4-7r "12m EEE EP PERTE 0ESS
— Le APRES DE a ET SNA M ONE ee OA OU) Éumbago ira eme PR NERO PithiIAIQUé JET ALL, PR ne RSR AUS Etc.
Ces chiffres répondent à des examens pratiqués à des jours différents, les conditions de température, de temps et de milieu restant seules exactement fixes .
La phagocytose en milieu organique était arrêtée au bout d'une demi-heure, au bout d'une heure seulement dans le liquide de Fleig.
1, AcHARD et Foix, loc. cit.
