COMPORTE AVEC LES CELLULES VIVANTES

Le rouge neutre ou rouge de toluylène est un chlorhydrate de diméthylamidotoluphénacétine.

Il a été découvert par Von Witt en 1879 et introduit dans la technique histologique par Ehrlich, assez longtemps après, en 1894.

Cet auteur a le premier signalé la propriété que possède cette substance colorante de teindre les éléments cellulaires vivants.

Le rouge neutre est une poudre brun noirâtre facilement soluble dans l'eau.

La coloration du mélange est très variable suivant que le milieu est acide ou alcalin.

A doses très faibles, le rouge neutre ne donne dans l'eau distillée qu'une couleur rouge légère tirant un peu sur le violet. Cette coloration tire au rose si l’on acidifie légèrement la solution par l'addition d'acides minéraux ou organiques, elle devient rouge brun si le milieu présente au contraire une faible alcanité. Ehrlich avait depuis longtemps attiré l’attention sur ces modifications très nettes de coloration des solutions de rouge neutre suivant la réaction acide ou alcaline de ces solutions. Il avait indiqué que les traces d’alcalis que contient l’eau de puits, et même l'acide carbonique de l'air, influent sur le changement de couleur du rouge neutre.

Himmel a repris ces expériences et les a complétées. Cet auteur fait jouer en effet un rôle capital à la réaction

se

acide ou alcaline du milieu pour expliquer le mécanisme de la coloration vitale par le rouge neutre. Il a montré qu'une solution très diluée de neutralroth dans du sérum alcalin restait incolore, tandis qu’une semblable solution acidifiée se colorait en rouge intense.

Il en conclut que « l’on peut obtenir même avec des « solutions faibles de neutralroth une coloration rouge « intense si les substances colorantes ont un degré « suffisant d’acidité 5. Au cours de recherches faites sur les cellules de différents fruits, il a pu se convaincre « qu'avec la même quantité de couleur la coloration « des cellules végétales et du liquide ambiant était plus « intense dans les cas où l'acidité du fruit est plus « prononcée. »

Cette propriété du rouge neutre était à mettre en particulière évidence. Etudions maintenant de plus près l’action de ce colorant vis-à-vis des cellules vivantes.

Galeotti, dans une revue critique « sur la colorabilité des cellules vivantes » a rassemblé les faits observés avant lui. Des observations antérieures et de ses propres expériences il conclut que les parties vraiment vivantes de la cellule (noyau, protoplasma) résistent à la coloration tant que persiste la survie cellulaire.

Seuls fixent la couleur les « grains de sécrétion » et « toutes les autres formations qui ne prennent pas une « part active aux fonctions de la cellule s.

Les conclusions de Galeotti sont actuellement admises de tous. |

Aussi le rouge neutre a-t-il été particulièrement employé pour décéler certains produits d'élaboration cellulaire.

Regaud et Policard l'ont appliqué à la mise en évidence des processus d'élimination dans le tube urinaire des ophidiens.

Tout récemment M. le professeur Renaut montrait que le rouge neutre décèle, dans les cellules du cartilage xiphoïdien de la grenouille, des grains de ségrégation auxquels il attribue le rôle probable de réserves nutritives.

Dans les mémoires qu'il a consacrés à l'étude du pus blennorrhagique par le rouge neutre, Plato résume ainsi le résultat de ses observations.

« Les substances qui se colorent à l’intérieur des leucocytes sont des matières albuminoïdes englobées, telles que : microorganismes, hématies, spermatozoïdes, produits de désagrégation cellulaire. s

Nous venons de voir ce que met en évidence dans les cellules vivantes le rouge neutre. On a poussé plus avant l'observation, et des faits très intéressants ont été observés qui permettent de comprendre le mécanisme intime de l’action de ce colorant. Nous allons décrire brièvement les faits acquis et les hypothèses auxquelles ils ont servi de fondement.

Au cours d’expiriences nombreuses et rigoureusement conduites, Himmel, étudiant les leucocytes, a vu que dans les conditions de vitalité ordinaire de la cellule, tout corps englobé par elle se colore. Nous donnerons un rapide aperçu des faits observés par cet auteur.

Il provoque, chezle cobaye, une leucocytose expérimentale par injection intrapéritonéale de bouillon stérilisé. Pour obtenir la phagocytose, il introduisait dans le

os

péritoine ou mettait en contact avec les cellules de l'exsudat péritonéal des substances très diverses : fragments de talc, de coton, microbes morts ou virulents.

L'exsudat péritonéal est ensuite mélangé avec une solution faible de rouge neutre.

Dans tous les cas où la cellu'e avait conservé une vitalité normale Himmel a vu les corps phagocytés, organiques ou non, se colorer d'une façon très intense par le rouge neutre.

Toutes les conditions qui altèrent ou diminuent la vitalité de la cellule englobante influent sur la coloration des substances englobées.

Si l'on détruit par la quinine les propriétés phagocytaires des leucocytes, on peut voir que la coloration ne s'effectue pas à l'intérieur de ces leucocytes.

L'effet est le même que l’on fasse agir une température élevée, un sérum altérant ou même si l’on emprunte les leucocytes à un animal affaibli. Dans tous ces cas les propriétés phagocytaires et oxydantes des leucocytes sont diminuées.

Plato avait déjà attiré l'attention sur des faits analogues, et fait la remarque que dans des cellules d’une vitalité faible, la coloration des corps étrangers intraprotoplasmiques est de peu de durée.

L'atteinte à la vitalité cellulaire peut être produite par l’action sur la cellule des substances qu'elle a phagocytées.

Himmel à vu la décoloration des préparations se produire plus rapidement quand les globules blancs se sont chargés de microbes très virulents.

Il a même observé que si le nombre des bacilles

is —

englobés « est considérable et leur action toxique sur la cellule très prononcée, il n’y a pas de coloration s.

Nous venons d'étudier les conditions qui font varier la coloration par le neutralroth. Cette coloration paraît dépendre bien moins de la nature du corps englobé que du degré de vitalité de la cellule englobante.

Un dernier point est encore à étudier et nous en aurons fini avec l’action du rouge neutre. Quelle est l'origine de la coloration ?

Plato invoque un phénomène de condensation. Les substances albuminoïdes incluses dans le leucocyte absorbent une plus grande quantité de colorant et l'oxydent.

Mais cette explication n'est plus valable quand le corps étranger est de nature anorganique comme les fragments de talc qui n'absorbent pas la couleur (Himmel). L’explication donnée par Himmel est beaucoup plus plausible.

« Si le talc englobé se colore, c’est que chaque fragment est entouré d'une zone de sécrétion acide produite panmiemlencocyte LO’éstejustéementecette#zoneracide autour du fragment de talc qui se colore fortement par le rouge neutre, présent dans la cellule. Le granuloplasme seul semble posséder des propriétés oxydantes. Il va sans dire que si la substance englobée par les phagocytes se laisse imprégner par la sécrétion acide qui l'entoure, l'intensité de la coloration sera augmentée. »

« Le leucocyte vivant, qui possède une légère réaction alcaline, ne se teinte pas par le rouge neutre», mais « une fois mort il n'élabore plus de sécrétion acide, alors apparaissent des phénomènes de diffusion à l’inté-

rieur même du leucocyte et la réaction naturellement alcaline de la cellule neutralise le milieu acide autour de l'inclusion qui $se décolore ».

Regaud et Policard, dans leurs études sur le rein des ophidiens, avaient conclu que la coloration des grains dépend de la cellule qui les élabore. « La colorabilité du rouge neutre est une propriété non point du condensateur tout entier, mais d’une nappe fluide qui l’entoure et l'imbibe dans la vacuole protoplasmique où il est étroitement logé. C'est cette nappe élaboratrice des grains de ségrégation, et non ces derniers une fois fait, qui fixe le rouge neutre.»

Nous connaissons maintenant les propriétés du rouge neutre. Quels sont les résultats que donne son application à l'étude du pus blennorrhagique ?