TOME I

à leur tour de la neutralisation in vitro du venin à la neutralisation in vivo et à la nature chimique du phénomène.

Cette même année 1898, Camus et GLey d’une part, Kossez de l’autre, étudient à ce point de vue le sérum d’Anguille, les premiers en faisant varier les doses de sérum venimeux, les quantités de sérum immunisant restant les mêmes, le deuxième, au contraire, faisant varier les quantités de sérum immunisant pour une quantité fixe de sérum venimeux.

Dans les deux cas, les résultats ont été les mêmes et ont montré qu'il y a un rapport simple, ou du moins constant, entre les doses de toxine et d’antitoxine qui se neutralisent.

Remarque. — PERRONCITO, en 1910, a constaté que le sérum de lapins ou de cobayes, qui ont été immunisés contre le sérum d’Anguille, devient toxique à la dose de r cc. 5 pour les animaux de la même espèce qui le reçoivent dans les veines, alors que cette même dose provenant d'animaux neufs est inoffensive, et alors qu'il a acquis des propriétés antitoxiques vis-à-vis de l’ichthyotoxine.

Propriété antihémolytique. — II est facile de vérifier en prélevant du sang chez des animaux immunisés et en séparant aussitôt le plasma par centrifugation, que ce liquide est parfaitement limpide et ne contient aucune trace d’hémoglobine, alors que c’est tout le contraire qui se produit chez les animaux qui reçoivent pour la première fois du sérum d'Anguille.

De plus, in vitro, on peut constater que les globules de ces animaux immunisés résistent à l’action dissolvante du sérum d’anguille, même quand il n’est dilué qu’à 1 pour 100.

Enfin, leur sérum, ou leur plasma, protège les globules du sang d’un autre animal non immunisé.

Ce qu'il y a de particulier, et ce en quoi le sérum des animaux immunisés diffère du sérum d’Anguille, c’est que le chauffage à 58° pendant 15 minutes, ne lui fait pas perdre la propriété protectrice qu'il a acquise : il reste antihémolysant.

Ainsi, d’une part, le sang des animaux immunisés a acquis une résistance très grande au sérum d’Anguille : les globules du lapin, par exemple, animal très sensible, sont devenus aussi résistants que ceux du hérisson, animal réfractaire ; d’autre part, le sérum a acquis une propriété nouvelle, celle de protéger les globules des espèces sensibles contre l’action dissolvante du sérum d’Anguille.

Comment a-t-il acquis cette propriété antiglobulicide ?

D’après les recherches de MM. Cauus et GzLey, parmi toutes les substances qui sont capables de créer l’immunité globale par leur injection dans l'organisme d’un animal, seul le sérum des animaux immunisés par le sérum d’Anguille, chauffé ou non, possède des propriétés antiglobulicides, et il faut encore pour cela que la vaccination aït été pratiquée pendant assez longtemps et avec d’assez grandes quantités de sérum.

Mais il est à remarquer que dans les cas où l’immunité est produite sous l'influence du sérum chauffé (non toxique par conséquent), la quantité d’antitoxine formée est moindre que dans ceux où elle est produite par le sérum entier ; il y a en un mot une moindre réaction de l'organisme.

Quoiqu'il en soit, il y a spécificité dans la production de la substance antiglobulicide, car la vaccination avec des substances différentes, même avec un autre sérum globulicide, comme le sérum de chien, ou avec un sérum antivenimeux, ne la produit pas.

Le fait que l’antihémolysine peut apparaître après l'injection du sérum d’Anguille chauffé (non globulicide), montre que si la toxine peut exalter la réaction de l’organisme, elle n’est du moins pas nécessaire à la production de l’antitoxine correspondante, ce qui est très important au point de vue du mécanisme par lequel s’acquiert l’état d’inmunité active.

Mais cet état tient-il à une résistance acquise par les globules ou à une propriété acquise par le plasma qui les baigne? Comment se comportent les globules et le plasma vis-à-vis du sérum d’Anguille ?

Dans le cas où l’immunisation a été faite avec du sérum d’Anguille chauffé, on constate que les globules soigneusement débarrassés par des lavages successifs de tout le plasma qui les imprègne sont aussi sensibles au sérum d’Anguille que ceux des animaux témoins ; ils n’ont donc pas acquis de résistance particulière à l’hémolysine de ce sérum ; si dans le sang des animaux immunisés qu’on soumet à une nouvelle injection de sérum d’Anguille ils résistent, il faut donc admettre qu'ils sont protégés par l’antihémolysine formée au cours de l’immunisation.

L'immunité est due dans ce cas aux qualités acquises par les humeurs et plus exactement par le plasma sanguin ; cette immunité est dite humorale, par opposition à l’immunité naturelle que nous avons vu être, chez le hérisson, et autres animaux réfractaires, due à la résistance des globules, et qui est dite cytologique.

Mais la neutralisation d’une toxine par l’antitoxine spécifique, qui constitue l’immunité humorale, toujours assez limitée et assez peu durable comme effets, ne pourrait-elle être renforcée par l’immunité cellulaire, et peut-on artificiellement augmenter la résistance des cellules, notamment des globules ?

Des expériences ont été faites dans cette voie par MM. Camus et GLEy, qui ont constaté que chez des sujets fortement immunisés, avec le sérum d’Anguille non chauffé par exemple, les globules sont plus résistants que ceux des animaux moyennement vaccinés.

C’est aussi une des idées maîtresses du mémoire de Temisrovica : « Il se passe pendant l’immunisation contre le sérum d’Anguille, dit l’auteur, certaines modifications dans les globules rouges qui ont pour conséquence un surcroît de stabilité ; cependant, il faut ajouter que les modifications

dont il est question ne sont nullement parallèles à l’antitoxicité du sang ;

loin de là, elles la remplacent au moment où cette antitoxicité baisse en cédant la place à une immunité pour ainsi dire cellulaire. »

Mais il n’est pas encore prouvé que la substitution de l’immunité cytologique à l’immunité humorale puisse être obtenue intégralement ; il peut y avoir accroissement de la seconde par la production secondaire de la première et cela constitue déjà un fait important.

Propriété immunisante. — Le sérum des vaccinés ne les protège pas seulement contre l’action du sérum toxique ; il est capable aussi de conférer aux animaux auxquels on l’inocule une immunité passive, qui résulte de son pouvoir antitoxique général : C’est ainsi que MM. HénicourT et Ricner ont les premiers montré que le mélange in vitro de sérum d’Anguille et de sérum antitoxique peut être impunément injecté dans les veines du lapin.

C. Maczrerr, d'autre part, a vu que le sérum de lapin immunisé, injecté dans le péritoine protège le cobaye contre les effets de l’injection intra-péritonéale de sérum d’Anguille. Il y à dans cette action un parallélisme marqué avec les propriétés du sérum des animaux immunisés contre le venin des Serpents, et que MM. Héricourr et Ricxer ont bien fait ressortir.

Réactions entre la toxine du sérum d’Anguille et son antitoxine

Tomisrovircx a tiré de ses recherches sur le sérum d’Anguille et le sérum antivenimeux correspondant des conclusions qui sont intéressantes au point de vue des phénomènes qui se produisent dans le sang des animaux après les injections de sérum toxique.

1° Ces injections déterminent une diminution notable des leucocytes chez les animaux neufs ; elles n’ont pas d’action ou produisent au contraire une augmentation chez les animaux immunisés.

2° En mélangeant le sérum d’Anguille avec une antitoxine forte on obtient un trouble et un précipité atoxique semblable à celui observé par Kraus dans les cultures filtrées de microbes. Ce précipité insoluble dans l’eau, les sels neutres et les carbonates alcalins, se dissout facilement dans les alcalis et les acides. Sa formation est comparable à la coagulation d’une substance dans le sérum toxique ou antitoxique.

3° Le volume du précipité est ordinairement en rapport avec la valeur de l’antitoxine. Sa formation est empêchée par le chauffage de l’antitoxine à 70° pendant 30 m., de même que par le chauffage du sérum d’Anguille à 80°. Déjà le chauffage à 58° de l’un ou de l’autre, diminue la propriété de donner un précipité par leur mélange. La formation de ce précipité doit être distinguée de la neutralisation de la toxine par l’antitoxine ; le précipité peut seulement entraîner la toxine.

4° La propriété coagulante ou précipitante n’est pas directement liée

à l'antitoxine, car on rencontre des sérums antitoxiques qui n’ont aucun pouvoir précipitant.

5° Les sérums antitoxiques acquièrent très tôt la propriété d’agglutiner les globules rouges des animaux dont le sang ou le sérum a servi à les produire ; cette propriété augmente au cours de l’immunisation. La température qui détruit cette propriété correspond à celle qui empêche l’agglutination des microbes.

6° La propriété d’agglutiner les globules rouges est indépendante de la propriété coagulante et peut être très prononcée dans les sérums qui ne coagulent pas la « toxine » correspondante ; elle n’est pas causée par la coagulation des substances dissoutes dans la parüe liquide ainsi qu’on pourrait le croire d’après les recherches de KrausE et de Nicozre.

Substances actives du sérum d’Anguille

Les faits et les particularités que nous a révélés l’étude physiologique du sérum d’Anguille, militent les uns en faveur de l’unicité de l’ichthyotoxine, les autres en faveur de l’existence dans le sérum de plusieurs substances actives, toxiques et antitoxiques. Résumons-les brièvement, en ce qui concerne d’abord l’ichthyotoxine :

1° Nous avons vu que chez la plupart des animaux réiractaires à l’action toxique du sérum d’Anguille : Hérisson, Pigeon, Batraciens, etc... les globules résistent aussi à l’action hémolytique ; mais ces deux sortes de résistance ne sont pas invariablement liées l’une à l’autre : le chat et !a

marmotte animaux très sensibles à l’action toxique du sérum, ont des globules aussi résistants que ceux des animaux réfractaires ;

2° Le sérum d’Anguille, chauffé à 58° pendant 15 minutes perd à la fois ses actions toxique et globulicide. Toutefois, l’action toxique ne disparaît pas intégralement dans ces conditions, car elle se révèle encore quand on emploie une forte dose de sérum. Ce fait a été mis en évidence par E. Gzey. D'autre part, les variations du pouvoir toxique ne suivent pas exactement celles du pouvoir hémolytique ; c’est ainsi que des sérums assez toxiques sont quelquefois peu hémolytiques ; mais quand le sérum est normalement hémolytique, il est d'ordinaire très toxique. Enfin, la dialyse du sérum ou des extraits de tissus d’Anguille traités préalablement par broyage ou digestion tryptique, laisse passer des substances toxiques et retient les substances hémolytiques.

Les propriétés toxique et hémolylique varient ainsi comme si elles étaient dues à des substances distinctes dont l'élaboration n’est pas influencée de la même manière par les mêmes causes.

Outre l’ichthyotoxine et l’hémolysine, le sérum d’Anguille contient une substance phlogogène ou cytotoxique, qui agit localement sur les tissus et produit de l’œdème et des abcès par nécrose. Il contient également une substance antitoxique et vaccinante qui agit contre le venin de Vipère aussi bien que contre son action propre.

Sérum de Murène

En 1885, À. Mosso a signalé la toxicité du sang de la Murène hèléne (Murœna helena Lin); mais ses travaux ultérieurs ont surtout porté sur le sérum d’Anguille. La même constatation a été faite à diverses reprises dans les laboratoires maritimes ; puis l’étude systématique en a été entreprise en 1917, au laboratoire de l’Institut océanographique de Monaco par KoPpAczEWskt.

Propriétés du sérum

L'auteur obtient le sérum par ponction du bulbe aortique après avoir ligaturé celui-ci sur sa partie étroite : un sujet de 2 kg fournit environ 19 cc. de sérum jaunâtre et opalescent, de grande toxicité, car il suffit de o Cc.r inoculé dans les veines du cobaye pour foudroyer un sujet adulte de 300 à 500 gr. D’après les divers essais de l’auteur cette toxicité est assez constante.

La densité est de 1,o192 à 27° c. Desséché dans le vide à cette température, il donne un résidu sec de 8,41 pour 100, dont 0,34 pour 100 de cendres.

Agents modificateurs de la toxicicité sérique

Vieillissement. — Le sérum de Murène conservé à l’abri de la lumière et en ampoules scellées ne perd que lentement sa toxicité ; celle-ci persiste encore intacte au bout de 20 jours ; au bout de 30 jours, la dose primitivement mortelle pour le cobaye en permet la survie.

Lumière. — La toxicité est atténuée par l’exposition directe aux rayons solaires. Les rayons ultra-violets de grande longueur d'onde n’ont aucune action sur la toxicité du sérum après un temps d’exposition de 4 h. 30 m. Par contre les rayons ultra-violets de courte longueur d’onde possèdent des propriétés destructives très nettes. L’irradiation pendant 90 M. par ces rayons abolit d’une manière complète la toxicité du sérum.

L'action des rayons X, prolongée pendant 60 minutes, s’est montrée complètement nulle.

Chaleur. — Le chauffage à 56° pendant 15 minutes fait perdre au sérum son pouvoir hémolytique ; mais la toxicité ne commence à diminuer qu'entre 60 et 65° ; elle disparaît complètement à 75°.

La congélation est sans effet sur la toxicité.

Dessiccation. — Elle n’a aucune influence sur la toxicité, de même que l’absorption par les poudres inertes (noir animal, kaolin).

Dialyse. — La portion du sérum qui passe à la dialyse n’est pas toxique ; la toxicité de la portion qui reste dans le dialyseur a diminué,