TOME II

lytique que Kyes considère comme un composé chimique défini, et auquel il donne le nom de venin-lecithide (lecithid-venom).

Il a préparé des venins-lécithides avec les divers venins dont il a pu disposer, et le premier des complexes qu'il ait obtenus est le Cobralécithide.

La lécithine serait donc d’après Kyes, la substance du sérum qui active le venin, jouant le rôle de complément dans la théorie d'Enriren et MorGenroru, qu'adopte Kyes, ou bien d'’alexine dans la théorie de Borper ; mais une alexine plus résistante à la chaleur que celle qui agit dans l’hématolyse par les sérums.

Le venin correspond à l’ambocepteur (théorie d'Exrricn) ou à la sensibilisatrice (théorie de Borper).

Venin et lécithine forment ainsi, suivant Kyes, un couple hémolytique, et leur combinaison représente l’hématolysine du venin.

L'hématolyse produite par le venin-lécithide présente les mêmes caractères généraux, soit que l’on emploie l’une ou l’autre substance pour produire l’hémolysine ; mais, caractère distinctif, quand la lécithine a été employée comme activant, l’hémolyse est plus rapide et se produit même à la température de zéro ; en outre, elle n’est pas influencée par le sérum antivenimeux.

Préparation du Cobra-lécithide. Kyes l’obtient en mélangeant une solution aqueuse de venin de Cobra avec une solution chloroformique de lécithine. Il se dépose des cristaux microscopiques, qui donnent rapidement une poudre amorphe et blanchâtre, qui est le Cobra-lécithide ou Cobralysine.

Propriétés du Cobra-lécithide. Ce composé est presque atoxique ; son action hémolytique est très rapide, presque instantanée, et s'exerce sur les globules lavés de toutes les espèces animales, à toutes les tempéralures, même à zéro.

Le Cobra-lécithide résiste pendant 30 minutes à la température de 100° (MorGENROTH) ; ce qui explique d’après CALMETTE, que le sérum des animaux qui ont été vaccinés par le venin de Cobra, préalablement porté à 72°, est néanmoins antihémolytique.

Il est soluble dans l’eau, l’alcool, le chloroforme, le toluène. Ses solutions aqueuses précipitent à la longue, mais sans perdre leur pouvoir hémolytique.

Il est insoluble dans l’éther et l’acétone.

L'acide chlorhydrique en solution aqueuse à 3 % augmente la résistance du Cobra-lécithide à l’ébullition (Kyes et Sacs). Si l’action est prolongée pendant 24 heures, l’hémolysine subit une altération légère (FLexNer et Nocucmi).

Son action n'est pas neutralisée par le sérum antivenimeux correspondant.

Action empéchante de la cholestérine sur le Cobra-lécithide. Kyes a montré que la cholestérine est un puissant antagoniste du Cobra-léci-

HÉMATOLYSINES ET AGGLUTININES 627

thide ; elle en empêche et en arrête l’action hémolytique. Dans le complexe venin-lécithide, elle détermine un précipité, et le liquide surnageant a perdu tout pouvoir hémolytique, mais il reste neurotoxique, fait qui établit l'indépendance de l’hémolysine et de la neurotoxine du venin.

En 1909, ABDERHALDEN et Le Cour font des recherches étendues sur le mécanisme de la propriété inhibitrice de la cholestérine dans l’hémo lyse par le venin-lécithide.

Ils emploient d’une part les cholestérines de diverses provenances (calculs biliaires, jaune d’œuf, huile de radis), de ses dérivés : (chlorure, acétate, benzoate de cholestérine, cholestène, cholesteron, etc...), et d’autre part des composés divers de protéines, essayant de localiser le radical dont dépend la propriété antihémolytique de la cholestérine.

Ces substances sont d’abord essayées au point de vue de leur action antihémolytique propre. Elles ont toutes une réaction acide dans une solution qui contient la quantité d’alcool méthylique suffisante pour les maintenir dissoutes. L'’acidité est alors neutralisée par une partie de NaOH normale pour 9 de solution ; et la quantité de soude ainsi employée est insuffisante à elle seule pour produire l’hémolvyse. Les auteurs constatent que la cholestérine du jaune d'œuf, après neutralisation, devient un peu hémolytique.

Les auteurs opèrent de la manière suivante : ils emploient o cc. 1 d’une solution de venin de Cobra à 0,005 pour 100 ; o cc. 1 d’une solution de lécithine à 0,05 pour 100 ; r cc. d’une suspension à 5 pour 100 de globules (de cheval et de chèvre) en solution saline isotonique à 8 pour 100 d'alcool méthylique. Ils diminuent les quantités des solutions de cholestérine et ajoutent des dérivés variés. La concentration des solutions de cholestérine et de ses dérivés était de 0,02 pour 100, et les auteurs en ajoutaient 1 cc. ou moins aux divers mélanges.

Les résultats obtenus montrent que les cholestérines des calculs biliaires et des jaunes d’œuf ont un pouvoir antihémolytique marqué et presque égal, car elles peuvent empêcher l’hémolyse déjà à la dose de o cc. 19 ; à la dose de 1 cc., elles exercent une légère inhibition.

La substance cholestérinique retirée de l’huile de radis n’a pas cette propriété, non plus que le cholesteron ni les chlorure, acétate et benzoate de cholestérine ; le cholesteron-oxim est fortement inhibiteur. Quant à l’effet de la neutralisation des cholestérines par NaOH, il est à peu près nul, sauf sur l’hémolyse qui se produit avec de plus fortes doses de cholestérines neutralisées, et qui est probablement due dans ces conditions à la dissociation des alcalis.

Toutes les autres substances chimiques essayées sont restées sans effet relativement à l’hémolyse par le venin-lécithide.

D'après ces résultats, ABDERHALDEN et Le Cour, considèrent que le groupe hydroxyle libre est indispensable à l’action antihémolytique de ces corps et que les doubles chaînes peuvent n'être pas complètement indifférentes.

En 1905, FLexxer et Nocucnr reprennent d’une manière détaillée l'étude des actions empêchantes de l’hémolyse par les venins. En ce qui concerne en particulier la cholestérine, ils montrent que son action empêchante s'exerce contre la lécithine et non contre le venin, comme le pensait Kyes. Ils constatent aussi que l’alcool méthylique en excès inhibe l’action empêchante de la cholestérine dans l’hémolyse par le veninlécithide.

En 1907, Ismizaxa montre l’action inhibitrice de la cholestérine sur l’hémolyse par le venin de Lachesis flavoviridis, mais pour cet auteur comme pour FLExNER et Nocucmi, cette action serait le résultat d’une combinaison directe avec la lécithine et non avec le venin.

Enfin, M. Decezenne et Mlle Lenegr, dans l'étude qu'ils font en 1912 des propriétés de la substance hémolytique extraite du sérum et du vitellus, sous l’action catalytique des venins, substance qu'ils appellent lysocithine, constatent que la cholestérine se combine molécule à molécule avec ce produit pour donner un corps nouveau, qui ne possède aucun pouvoir hémolytique.

La cholestérine n’exerce donc son action empêchante que dans les cas où l’hémolysine est un dérivé de la lécithine : venin-lécithide (Kyes, FLexner et Nocucur), ou lysocithine (DELEZENNE et Lenegr) ; elle ne possède aucune action sur l’hémolysine produite par les couples venin-sérum ou venin-lipoïdes (FLExNEr et Nocucm).

Nocucur est d’accord avec Kyes pour reconnaître la lécithine comme principal complément du sérum ; beaucoup de sérums qui ne sont pas activants à l’état frais le deviennent quand on les chauffe au voisinage de leur point de coagulation : « dans ces conditions, dit Nocucui, il n’y a pas de doute que la lécithine soit libérée et n’active librement le venin ». Mais ce fait n’explique pas la propriété activante des sérums frais ; il suggère seulement l’idée que la lécithine peut dans certains sérums se trouver à un état où elle est inattaquable par le venin, tandis que dans les autres sérums elle serait libre, ou tout au moins libérée par le chauffage. Toutefois, cette interprétation est encore insuffisante à justifier la propriété activante d’un sérum, qui devient inactif quand on le chauffe à 56°, car la chaleur ne supprime pas l’activité de la lécithine ; celle-ci active très rapidement, quelle que soit la façon dont elle est introduite dans un sérum. D'autre part, les sérums contiennent des quantités de lécithine peu différentes les unes des autres, quelle que soit leur propriété activante.

Pour expliquer la raison pour laquelle la lécithine du sérum de chien est activante, alors que celle du sérum de bœuf ne l’est pas, Nocucat montre que cette lécithine est entièrement inactivante quand elle est combinée à l’albumine et aux globulines du sérum ; de telles combinaisons existent dans tous les sérums, mais dans les sérums activants, il se trouve en outre un certain composé protéique de lécithine capable d'activer le venin. Ce composé reste en solution quand les globulines

HÉMATOLYSINES ET AGGLUTININES 629

sont précipitées par la dialyse, et il peut être précipité en saturant à moitié par le sulfate d’ammonium. Il est soluble dans l’eau, et n’est pas coagulable à l’ébullition en milieu neutre des sels alcalins ; Ca Cl n'’exerce sur lui aucune action inhibitrice ; l’alcool chaud, mais non l’éther, lui enlève beaucoup de lécithine.

Non seulement la lécithine en nature et celle du sérum se montre comme un puissant activateur des venins, mais elle manifeste encore cette propriété dans certaines substances dont elle fait partie, et qui ne sont pas hémolytiques par elles-mêmes, comme le lait, la bile, les globules rouges de certaines espèces.

2° Lipoides non phosphorés. — Outre la lécithine et ses composés, - quelques sérums (de cobaye, cheval, chat, porc, lapin, pigeon, oie, poule, homme), contiennent des activateurs dont l’action disparaît par le chauffage à 56°, prolongé pendant 30 minutes ; ils se distinguent de la lécithine par la lenteur de leur activation, et par l’action empêchante du chlorure de calcium sur cette activation.

L’éther ne peut séparer la lécithine de son mélange avec le sérum ; d’où un sérum qui contient des quantités appréciables de lécithine reste actif après séparation des principes extractifs solubles dans l’éther.

D'autre part, les activateurs des sérums, sensibles à la chaleur sont solubles dans l’éther, et après leur extraction les sérums ne sont plus activants.

D'après Nocucnr, ces activateurs solubles dañs l’éther consistent surtout en graisses non phosphorées (trioléine), en acides gras (ac. oléique) et en sels solubles d'acides gras. Is ne sont nettement hémolytiques qu'au contact du venin ; leur pouvoir activant disparaît à 56°, aussi bien que par leur mélange avec CaCP ; ils diffèrent donc notablement de la lécithine par leur mode d'activation.

Parmi celles qu'il a essayées, la trioléine et l’acide oléique sont les seules qui puissent soutenir la comparaison avec la lécithine.

La vitesse d'action de l’acide oléique et de la trioléine n’est pas sensiblement modifiée par le mélange avec le venin.

Contrairement à ce qui a lieu pour la lécithine, l’acide oléique et la trioléine rendent activants les sérums qui ne le sont pas par eux-mêmes.

L'’oléate de soude dissout en moins d’une heure la même quantité de globules que la lécithine.

Les oléates exaltent le pouvoir hémolysant du Cobra-lécithide (Dux- GERN et Coca). Le chlorure de calcium, qui n'influe pas sur l’hémolyse par le Cobra-lécithide, empêche celle par les lipoïdes (Nocuceur) ; au contraire, le citrate de soude, empêche l’hémolyse par le Cobra-lécithide, n’influe pas sur celle que produisent les lipoïdes ; mais l’action empéchante du citrate est inhibée par le chlorure de calcium.

Kves avait d’ailleurs distingué dans le sérum un activateur autre que la lécithine, et dont la cholestérine n'empêche pas le pouvoir activant.

Compléments contenus dans les globules rouges

En 1902, C. Paisazix, a montré que vis-à-vis du venin de Vipère aspic les globules rouges des différentes espèces animales n’ont pas la même résistance ; ceux du lapin sont plus résistants que ceux du chien. |

Kyes de son côté a observé (1902) que vis-à-vis du venin de Cobra on peut distinguer deux sortes d’hématies : 1° celles qui, après lavage dans NaCl, sont directement hémolysables par le venin, sans addition de sérum : (homme, cheval, chien, lapin, cobaye) ; 2° celles qui ne peuvent être hémolysées par aucune concentration de venin en l'absence de complément, sérum ou lécithine ; ce sont les globules de bœuf, de mouton : Lams y a ajouté ceux de chèvre.

Les globules les plus sensibles sont ceux du chien et du cobaye qui sont attaqués et dissous par une solution à 1/10.000 de venin ; ceux du cheval se dissolvent dans la solution au 1/1000.

Kyes admet pour expliquer la sensibilité des globules du premier groupe l'existence d’un endocomplément, dont il n'indique pas d’abord la nature. Mais en collaboration avec Sacus, il reprend ensuite la question, et montre que le stroma seul de l’hématie est hémolysant, et non le produit soluble et laqué qui s’en échappe par hydrolyse. L'alcool précipite cet activateur à l’état de substance protéique libre. Sa propriété activante correspond à celle de la lécithine, car elle reste active à la température de 62°, elle agit encore à zéro, et se montre inhibée par la cholestérine.

Bien que tous les globules contiennent des quantités à peu près équivalentes de lécithine, les globules sensibles en contiendraient le plus, et suffisamment pour donner lieu, au contact du venin, à la formation de Cobra-lécithide.

FLexner et Nocucni, qui se sont occupés aussi du même sujet, admettent l’existence de la lécithine comme activateur globulaire, et ils établissent en outre l'existence d’un second activateur qui appartiendrait au groupe des lipoïdes non phosphorés, comme dans les sérums. Les globules de chien les contiennent tous les deux ; la plupart des globules ne contiennent surtout que le second. À

Ces activateurs se comportent chacun à chacun comme leurs homologues du sérum. En particulier ceux du second groupe sont solubles dans l’éther ; CaCP leur enlève leur propriété activante.

Les auteurs séparent ce deuxième activateur globulaire et en établissent l'existence en faisant séjourner pendant 24 heures sur des globules de chien du sérum chauffé du même animal ; le sérum séparé ensuite par centrifugation se montre hémolysant pour les globules de cobaye, alors que le sérum chauffé n'ayant subi aucun contact, est inactif.

D'après les mêmes auteurs, l’alcool chaud peut dissoudre une certaine quantité de lécithine des sérums non activants et des globules non sensibles.

HÉMATOLYSINES ET AGGLUTININES 631

AMBOCEPTEURS HÉMOLYTIQUES CONTENUS DANS LES VENINS

Les expériences de FLexver et Nocucur les amènent à penser qu'il existe dans les venins deux sortes de corps intermédiaires qu’ils appellent isocomplémentophiles et hétérocomplémentophiles, suivant qu'ils montrent des affinités pour le complément du sérum de serpent ou d’autres espèces de sérum.

En admettani l’existence de ces groupes distincts, il est possible d’apprécier leurs quantités relatives dans un même venin ; dans le cas du venin de Crotale et des globules de cobaye, il y a 7 fois plus des premiers compléments que des seconds. Vis-à-vis des globules de chien, il y a 12 fois plus des seconds compléments que des premiers.

Duxcer et Coca reprennent en 1907 l’étude des constituants hémolytiques du venin de Cobra.

Pour mettre en évidence ces constituants, ils laissent au contact à 97° pendant 2 heures du venin de Cobra avec des globules lavés de bœuf, puis soumettent les globules centrifugés et le liquide surnageant à des actions hémolytiques, d’une part en se servant de lécithine, d’autre part en employant du sérum frais de cobaye ; or, les globules sont détruits, grâce au complément du sérum, mais non par la lécithine. Quant au liquide venimeux surnageant, il garde, par addition de lécithine, ses constituants hémolytiques, et dissout, après comme avant, les globules lavés de bœuf ; mais il perd ses compléments activateurs. Ainsi, le venin de Cobra contient deux constituants hémolytiques différents : l’un qui, au contact de la lécithine, provoque l’hémolyse par formation de Cobralécithide, sans pouvoir par lui seul se fixer sur les hématies de bœuf ; l’autre qui se fixe sur les hématies à la façon d’un ambocepteur typique, et qui, réactivé par l’alexine, détruit les globules.