II. — Préparation des Helminthes
Cette préparation varie suivant qu*on a affaire aux Cestodes, aux
(1) Lactophénol de Amann : glycérine 2, eau distillée 1, acide phénique cristaliisé 1, acide lactique i.
[È) Faire fondre au bain-marie ou mieux à Tautoclaye: gélatine 2, eau 6, glycérine 7.
Trématodes, aux Némathelmintlies ou aux œufs de ces divers para* sites.
CESTODES
1® Conservation en collection.
a. — Recueillir les Vers avec précaution, dans un vase renfermant de la solution physiologique.
b. — Pour les tuer en extension, ajouter peu à peu du formol à 5 pour 100.
c. — Conserver définitivement dans le formol à o pour 100.
2« Fixation. — Les Cestodes entiers ou par fragments, destinés à être montés en préparations microscopiques, doivent être fixés par compression entre deux lames porte-objet.
Placer le fragment sur une lame^ mettre de chaque côté une bande de papier buvard puis recouvrir d'une seconde lame. Serrer les lames aux deux extrémités au moyen de plusieurs tours de fil et plonger ce petit appareil dans un fixateur histologique (1). Au bout de quelques heures, l'animal est parfaitement aplati et définitivement fixé sous cette forme.
3® Montage.
A. — A LA GÉLATINE GLYCÉRINÉB.
1** Laver la pièce à l'eau.
2** Éclaircir par un séjour dans le lactophénol de Amann.
3** Disposer la pièce sur une lame, la recouvrir de gélatine glycérinée fondue, puis d'une lamelle que l'on maintient appliquée au moyen d'un poids, jusqu'à solidification de la gélatine.
B. — Au BAUME (procédé de choix).
l*» Déshydi^atation, — Après le lavage qui suit la fixation, plonger les fragments dans Talcool à 90^^ puis dans l'alcool absolu.
i^ Éclaircissement, — Au sortir de l'alcool absolu, les pièces sont transportées dans Je xylol où elles doivent devenir parfaitement transparentes. S'il y a la moindre opacité, c'est que la déshydratation est insuffisante : il faut alors un nouveau passage par l'alcool absolu.
3** Montage, — a. — Préparer une lame au milieu de laquelle on met une grosse goutte de baume.
(i' Alcool-formol additionné de 5 pour lûO d'acide acéUque ou sublimé acétique qui nécessite un lavage soigneux à l'alcool iodé (cf. ci-dessus Technique his^ tologique).
//. — Sortir la pièce du xylol et la déposer dans la goutte de baume.
c, — Recouvrir d'une lamelle et ajouter, si besoin en est, de nouvelles gouttes de baume pour remplir l'espace compris entre la lame et la lamelle.
\'' ("OLORATION.
1^ coloration des Ceslodes est assez difficile et ne réussit que sur des échantillons parfaitement fixés. On peut colorer par deux méthodes : à Thématéine ou au carmin.
a. — Coloration à Ihématéine,
i"" I^ver les fragments à l'eau distillée.
2^ Colorer de cinq à dix minutes (ou plus) dans la solution d'hématéine qui a servi à colorer les coupes.
3** Effectuer le virage comme pour les coupes; il est inutile de colorer à l'éosine.
4° Déshydrater, éclaircir et monter au baume comme il a été dît plus haut.
b. — Coloration au carmin.
Le meilleur carmin est le carmin chlorhydrique (1).
l" Laver à l'alcool à 90^
2^ Colorer quelques heures dans un petit tube bouché au liège renfermant du carmin chlorhydrique.
3*' Laver à l'alcool à 90<».
i'' Si la coloration est trop forte, différencier dans de l'alcool à 90" additionné de I pour 100 d'acide chlorhydrique (alcool chlorhydrique).
;V Déshydrater, éclaircir et monter au baume comme plus haut.
