УТ. — ACTION DE LA TRYPSINE SUR LES TÉGUMENTS

Dans un flacon a, à large ouverture et fermé à l'émeri, on met en présence, dans de l'eau thymolée : des cuticules bien blanches,

du ferment trypsine et quelques gouttes d'une solution de carbonate de soude à 2 p. 1000.

Un deuxiéme flacon b, témoin, renferme le méme poids de cuticules, la méme quantité d'alcali et le méme volume d'eau thymolee.

Les deux flacons sont placés àl'étuve,à la temperature constante de 379 C.

П est indispensable de produire ces digestions artificielles dans un milieu antiseptique : on sait qu un certain nombre de microorganismes sécrétent des ferments protéolytiques. Le chloroforme, le toluene, l'acide cyanhydrique, le naphtol, le phénol ordinaire, le thymol maintiennent la stérilité du milieu et n'entravent pas l'action fermentaire (1).

Résultat. — Au bout de six heures, la digestion des cuticules est fort avancée ; elle est complète au bout de 8 heures d'étuve. Le flacon témoin n'a pas varié ; les téguments sont intacts. Dans 5 expériences sucessives, la trypsine a digéré les enveloppes dans un temps variant de 6 à 8 heures.

Examen du liquide de digestion

La liqueur est filtrée, puis portée à l'ébullition ; on obtient un léger coagulum ; on filtre à nouveau et, dans le filtrat limpide, les peptones sont recherchées à l'aide des réactifs suivants : Piuret, Esbach, Tamret, acide trichloroacétique. Toutes les réactions sont nettement positives, les précipités obtenus, à froid, par la solution d'acide picrique (EsBACH), le réactif si sensible de TANRET, l'acide trichloroacétique se dissolvent, en partie, à chaud. Par le refroidissement de la liqueur chaude filtrée, on obtient, à nouveau, de légers précipités par le refroidissement.

IL résulte de ce qui précede que les produits de digestion renferment des peptones.

Mais la coagulation de la liqueur, à l'ébullition, nous indique la présence, а côté des peptones, de certainesalbumines (la solution de peptones ne coagule pas par la chaleur).

Dans un liquide de digestion trypsique, on recherche directement

4) A. GAUTIER, Leçons de Chimie biologique, p. 545.

les albumines dans le filtrat à l'aide des réactifs suivants : Biuret, Tanret, Esbach, acide trichloroacétique, Мот, xanthoprotéique, Adamkiewicz, alcool, acide azotique.

Toutes ces réactions sont positives, et notamment celles du Millon, du biuret, xanthoprotéique, d Adamkiewicz, sont fortement accusées. ў

L'addition d'eau de Brome, par gouttes, dans la liqueur de digestion décéle la présence du tryptophane (ou protéine chromogene). On sait que le fryptophane se produit dans la dislocation moléculaire avancée de l'albumine sous l'influence de la trvpsine, à côté des bases hexoniques de KossEL (lysine, histidine, arginine) et des acides amides : leucine. tyrosine.

Il existe donc, à cóté des peptones, des substances albuminoides dans la liqueur de digestion, et les cuticules renferment des albumines riches en tyrosine et en tryptophane.

On a recherché le point de coagulation des albumines solubles produites, en méme temps que les peptones, par l'action hydrolysante de la trypsine sur les cuticules : le liquide coagule d 70° С.

Dans une autre série d'expériences, nous avons constaté que le liquide de digestion précipite, à froid, par l'alcool, l'acide acétique (le précipité est insoluble dans un excès de réactif), l'acide chlorhydrique (le précipité est également insoluble dans un exces de réactif), l'acide azotique (abondant précipité insoluble dans un excés d'acide). Or, les mucines précipitent également par l'alcool et par l'acide acétique, à froid, et ce dernier précipité est aussi insoluble dans un excés de réactif. Le produit de digestion présente donc deux caractères distinctifs des mucines ; mais, avec ces derniers corps, les précipités obtenus par les acides chlorhydrique et azotique sont solubles dans un exces d'acide. Néanmoins, pour étre rigoureux, nous devions rechercher la présence des mucines dans le liquide de digestion trypsigue.

A cet effet, la liqueur est traitée par de l'eau acétique jusqu au maximum de précipitation.

Le précipité est jeté sur un filtre, puis lavé a plusieurs reprises a l'eau acétique.

Une partie du précipité est calcinée avec de l'azotate de sodium et du carbonate de sodium purs; le résidu est repris par de l'acide azotigue et une solution concentrée de molybdate d'ammoniaque :

dard ce

on obtient un précipité jaune ; d’où présence de phosphore L'autre partie du précipité est hydrolysée, au bain-marie bouillant, avec de l'acide chlorhydrique 2 °/о: on n'obtient pas de sucre réducteur (recherche avec la liqueur de FEHLING, après neutralisation et alcalinisation de la liqueur). Or, les mucines ne renferment pas de phosphore et sont dédoublées, parla chaleur en présence des acides minéraux étendus, еп albuminoides eten sucre réducteur. La liqueur provenant de la digestion des cuticules parla trypsine ne renferme donc pas de mucines.

De l'ensemble de toutes les expériences précédentes, il résulte que les cuticules de Sclerostomum eguinum se caractérisent par les trois propriétés essentielles suivantes :

1° Grande solubilité dans l'oxyde de cuivre ammoniacal ;

2o Résistance à l'action de l'acide sulfurique concentré ;

3° Facile digestion par la trypsine.

De plus, ces cuticules ne donnent pas, à l'hydrolyse, de la glucosamine, ni de l'acide acétique. Elles ne renferment donc pas de chitine. Les cuticules duVer étant aisément digérées parla trypsine, il est infiniment probable que la résistance du parasite vivant, à l'action des enzymes digestives dans le tube intestinal, est due à l'existenced'uneantikinase, d'une antisensibilisatrice physiologique (1). On sait que les parasites peuvent subsister plusieurs jours, in vitro, dans des milieux renfermant des ferments protéolytiques. En 1878, Léon FRÉDERICQ a constaté le fait chez l'Ascaris marginata du Chien placé dans une solution de suc pancréatique. A ce sujet, M. le Professeur agrégé Ввомрт nous a fait part de ses observations personnelles : la trichime vivante n'est pas attaquée par le sue gastrique.

Enfin, nous avons fréquemment observé la présence du Bothriocephalus punctatus daus les tubes pyloriques du Cottus bubalis ; or, nous avons établi que ces organes sécrétaient de la trypsine (2).

Recherche directe des albumines dans les cuticules. — Les cuticules bien blanches ont été réparties dans quatre petits tubes à essai :

(1) A. DasrnE et Srassano, Existence d'une antikinase chez les parasites intestinaux, C. В. Soc. Biol., 21 janvier 1903.

(2 Th. Bowpouy, Du role du tube pylorique dans la digestion chez les Téléostéens, These, Ecole sup. de Pharmacic, p. 33.

Loop a

Dans le 1er, on verse du Réactif de Millon ;

Dans le 2°, de la lessive de potasse, puis quelques gouttes d'une solution de sulfate de cuivre étendue ;

Dans le 35, de l'acide azotique ;

Dans le 4°, de l'acide acétique et de l'acide sulfurique.

Au bout de 3 heures de contact, les téguments sont colorés.

Dans le 1°" tube, en rouge-cerise (réaction de Милом) ; Dans le 2° tube, en violet foncé (réaction du biuret) ; Dans le 3° tube, en jaune (réaction xanthoprotéique) ; Dans le 4° tube, en rose-violet (réaction d'ADAMKIEWICZ).

Conclusion.— Les téguments du Sclerostomum equinum ne renferment pas de chitine; ils sont constitués par des albumines complexes riches en tyrosine et en tryptophane. М