CHAPITRE, II

Réaction du neutral-roth.

Généralités.

Notre but n’est pas de faire une étude complète de cette réaction, mais d'en donner les notions permettant de comprendre le point de vue. auquel nous nous sommes placé.

L'emploi de milieux au neutral-roth ou rouge neutre (1), pour la recherche du coli-bacille est dû à Rothberger. « Le coli réduit cette matière colorante ; il fait virer la coloration rouge rubis des milieux qui en renferment en donnant rapidement une fluorescence verte ou même une coloration jaune canari avec des reflets fluorescents. » (Macé).

Mais Rothberger lui-même remarqua, qu'outre le colibacille, certains anaérobies, le b. du tétanos, le b. de l’œdème malin, donnaient la réaction fluorescente. D’après Rochaïix, certains microbes du purin d’écurie et de l’urine la donneraient aussi. Cette question a été très étudiée ces derniers temps, au sujet de la recherche du coli-bacille dans les eaux de boisson, et les auteurs, en particulier Lacomme, aboutissent aux conclusions suivantes :

(1), Le neutral-roth serait au point de vue chimique du chlorhydrate de diméthyldiamido-phénacétine. (Sicre).

1° Seul le coli-bacille peut faire virer le neutral-roth en moins de vingt-quatre heures ; 2° Une autre propriété, la production de bulles gazeuses à la surface des tubes en expérience, est caractéristique de ce même bacille.

Etudiant ensuite le mécanisme de la réaction, Rochaix et Dufourt font du virage du neutral-roth, appréciable par transparence, une propriété constante des microbes de Ja fermentation ammoniacale, ce qui est conforme aux résullats obtenus avec les microbes qu'ils ont étudiés, ceux du purin et de l’urine qui font fermenter l’urée et produisent par conséquent de l’ammoniaque. Mais, disent-ils, la fluorescence verte, visible par réflexion, n'est pas susceptible d'explication. z

Guerbel a repris la question, et, dans une expérience du plus haut intérêt, car elle reproduit in vitro la réaction phase par phase, il attire l'attention sur un fait que n’ont pas signalé les auteurs avant lui: le retour à la couleur primitive des tubes de culture de coli ayant au préalable Wiré avec fluorescence et production de gaz. C’est cette nouvelle propriété que nous avons spécialement étudiée dans son mécanisme. Mais auparavant, nous jugeons utile de reproduire in extenso l'expérience de Guerbet, car elle a été le point de départ de nos recherches.

Expérience de Guerbet. (1) Technique

« Mettre dans un tube à essai:

PAU Rene er Ac A RE, 2 10 ces.

Solution de rouge neutre à 0,25 %.. X gouttes. Linaille de iziac Ah MERE RER ENS quelques décigrammes . Acide acétique ou lactique : X gouttes.

(1) Guerbet. Comptes-Rendus de la Société de biologie 1911, page 515. (Travaux du laboratoire de bactériologie de l'Ecole de médecine de Rouen).

On tiédit le mélange: un dégagement d'hydrogène apparail. En continuant à chauffer, on voit que la coloration de rouge rubis devient rouge pelure d’oignon. Au cours de ces réactions, apparaît visible par réflexion une fluorescence qui s'accentue à mesure que la réduction du rouge neutre s’avance, el qui atteint son maximum quand la liqueur est devenue teinte pelure d’oignon. À ce moment, on décante la liqueur pour la séparer du zinc et on ajoute goutte à goutte de l’ammoniaque pure ou de la polasse normale. Sous l’influence de l’alcali, la leinte rouge brique fait peu à peu place à une teinte orangée, puis à une teinte Jaune canari, quand l’alcali est en excès. La fluorescence augmente jusqu'à ce que l’excès d’alcali dissolve le précipité gélatineux d'oxyde de zinc. La réaction du rouge neutre est alors complète: par transparence jaune canari, par réflexion fluorescence verdâtre. On peut aussi revenir en arrière dans la réaction, c’està-dire passer du jaune canari fluorescent à la teinte primitive du rouge neutre, comme cela se produit dans les tubes de bouillon de Savage abandonnés depuis longtemps à l'éluve. En ajoutant une dizaine de gouttes d'acide acétique et une goutte d'eau oxygénée, ou simplement quelques gouttes d'acide nitrique, on neutralise l'alcalinité et alors la fluorescence disparait après la coloration Jaune canari qui redevient groseille.

Et l’auteur termine par les conclusions suivantes:

« 1° La fluorescence est due au phénomène de réduction et au trouble de la culture ;

» 20 La teinte jaune canari est due à l’'ammoniaque produit dans les cultures ; |

» 3° Dans la réaction inverse (vieilles cultures au rouge neutre), la teinte jaune canari disparaît à mesure que le milieu devient plus acide (formation d'acide lactique aux dépens du glucose dans les bouillons de Savage). Il s’y joint l’oxydation de l’oxygène de l'air, car l'acidité à elle seule serait incapable de faire revenir la teinte rubis du rouge neutre. »

Cette expérience est très simple à faire. Nous l'avons reproduite facilement, en observant les diverses phases décrites par l’auteur. En somme, le mécanisme du virage est bien celui donné par Rochaix et Dufourt: l’alcalinité du milieu, sous l'influence de l’'ammoniaque que produit le microbe en réduisant la matière albuminoïde. La fluorescence aurait la même origine, mais dépendrait directement du trouble causé dans le milieu par les gaz qui se dégagent dans cette fermentation. Enfin, l'acidité créée par l'attaque du glucose ramènerait à la coloration rouge groseille primilive, les milieux en expérience. Ce dernier point étant bien établi, nous pouvons maintenant exposer nos recherches.

Voyons d’abord quelle est la composition des milieux au neutral-roth, généralement employés. Comme milieux liquides, le bouillon de Savage, qui est classique, comprend :

1° Bouillon de viande, 500cc3, auquel on ajoute:

PeplonenDefreSnes. 278 10 gr.

SCT RE RE Te ER 10 gr Glicose Ra ee Se re 2 gr. 50

2° 5cc3 de la solution suivante :

BOUSCENEUITE ASP ES 5 grammes.

Eau: ASIE RES Re 100 cc3.

Le tout est stérilisé en même temps.

Lacomme, pour l'analyse des eaux, prépare ses milieux de la façon suivante :

1° Solution de neutral-roth saturée à chaud, filtrer, sté-

riliser et se servir de la solution à froid (solution 1) ;

20 Bouillon avec:

HAS BARRE AUCUNE 1.000 gr Peptone: de Wbitteirrts 100 gr.

HACOS er USA RL QUS LAURS 100 gr.

SÉLE sta on eu e 50 gr.