CHAPITRE II

TECHNIQUE DE LA NUMÉRATION QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DES GLOBULES BLANCS

Quelque fastidieux que cela puisse paraître, nous croyons de première utilité de donner dans tous ses détails la technique à employer pour la numération des leucocytes, la moindre erreur pouvant, en matière de micrologie, créer un grand obstacle à l'observation des faits. Après quelques considérations rapidement esquissées sur les procédés diversement employés, nous exposerons la méthode à laquelle nous nous sommes arrêté et les modifications de précision que nous avons cru devoir apporter.

La numération exacte du nombre total des leucocytes offre une difficulté plus grande que celle des globules rouges, à cause de leur nombre relativement faible qui entraîne la multiplication des erreurs. De plus, les globules blancs se dissimulent parfois sous les hématies, lesquelles apportent ainsi une gène à leur observation. Aussi MM. Martel et Lyonnet avaient-ils songé à supprimer ces derniers éléments en les dissolvant par l'acide acétique dilué; mais en enlevant un obstacle, ils en avaient créé un autre. Le professeur Mayet a montré en effet que, sous l'influence de ce réactif, « le pro-

Loplasma des leucocytes devient si transparent qu'il en est parfois invisible, tandis que le noyau s’assombrit el se rétracte, modifiant ainsi sa forme ; de plus, n'étant plus retenus ni fixés pour ainsi dire au milieu des hématies, les globules blanes ont une tendance manifeste, dans le hiquide désormais fluide où ils nagent, à fuir et à s’'accumuler vers les bords de la préparation, ce qui devient un obstacle sérieux à leur dénombrement, car 1ls ne sont plus répartis uniformément », Mieux vant donc conserver les globules rouges; 1l suffit d'employer une méthode qui permette de les différencier nettement d'avec les leucocytes; le procédé de Regaud el Bargeon remplit ces desiderata.

On mélange le sang avec un sérum coloré au violet de gentiane qui agit sur les leucocytes seuls, les met- {ant ainsi en évidence au milieu des hématies. Le sérum de dilution le plus favorable à la conservation des éléments figurés est le suivant :

Phlorune/de AM. 20 2.27 000,06) . Sulfate de soude déshydraté . . . 1 à 1/2

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On ajoute le violet de gentiane jusqu’à ce que l’on ait obtenu une teinte foncée.

On peut se servir pour compter les globules blancs soit de l'appareil d'Hayem, soit de celui de Malassez. Nous avons rejeté ce dernier, car il nous semble défectueux à différents points de vuc; d’abord les traits gravés sur le carré deviennent invisibles lorsqu'ils sont recouverts par les éléments; ensuite l'usage les efface assez rapidement et les écaille, Nous nous sommes

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toujours servi de l’appareil d'Hayem, mais avons modifié la technique employée par l’auteur. Ce procédé en effet ne peut donner une grande précision, puisqu'on n'opère la numération que sur une dilution de 4 millimètres cubes de sang dans 500 de sérum.

Nous prenons 10 millimètres, afin de dénombrer sur un bien plus grand nombre de globules. Faisant avec la pipette capillaire deux prises jusqu'au trait 5, nous soufflons ensuite le sang aspiré dans le potel d'Hayem dans lequel nous avons versé auparavant les 5oo millimètres cubes de sérum et nous brassons le mélange avec la palette. On attend un moment afin de donner aux leucocytes le temps de se colorer, puis on porte une goutte du mélange sur la cupule de l’appareil; il faut quelques instants avant que ces globules aient gagné le fond de la goutte et soient tous au même point.

Pour arriver à une précision plus grande, nous faisons cent numérations sur la même préparation. Ce chiffre semblera peut être exagéré,mais la numération se fait avec une assez grande rapidité (dix minutes), lorsqu'on a acquis une certaine habitude. Il est important que la préparation puisse se déplacer d’un mouvement uniforme sur le carré que peintau fond de la cupule le petit appareil d'optique. Il faut éviter aussi de retomber sur les mêmes points ; c'est ce qui arrive lorsqu'on déplace la préparation avec la main.

Ces deux erreurs sont évitées par l’'adjonction au microscope d'une coulisse permettant de déplacer la préparation dans tous les plans. Nous nous sommes

servi de la surplatine à chariot mobile de Krauss, bien supérieure à la platine mobile.

Voici pour les détails de la méthode. Une fois les 100 numérations achevées, 1l faut faire lé petit calcul suivant pour arriver à en déduire le nombre de globules blanes contenus dans un millimètre cube.

Soit 115, par exemple, le nombre des leucocytes obtenu dans les 100 numérations, c'est-à-dire une moyenne de 1,15 pour chacune d'elles. Comme nous prenons » fois plus de sang que dans la méthode de Hayem, nous multüplions 1,15, le chiffre obtenu par 31.000, c’est-à-dire, 6.200, ce qui fait dans le cas pré- AT 10 sent 7.130.

7.130 est donc le nombre de leucocytes par mullimètre cube. Eh bien, ce n’est pas encore le chiffre rigoureux ; dans la plupart des cas, une cause d’erreur persiste encore qui fausse les résultats. Elle est due à ce que l’on ne compte pas toujours, comme on devrait, sur 1/12 de millimètre cube de dilution; il arrive souvent que le côté du carré peint sur la cupule n’a pas rigoureusement 1/5 de millimètre, ceci tient à un défaut dans la fabrication de l'appareil d'optique qui conserve une certaine mobilité, grandissant ou rapetissant le carré suivant son éloignement du point de réglage. Si on veut avoir de la précision dans les résultats, il importe donc de ne pas négliger ce détail : mails: il faut à l’aide du micromètre oculaire contrôler les dimensions du carré et opérer le calcul de correction.

Comme on le montre par la constatation de ces diver-

ses causes d'erreurs, on ne peut qu'avoir une confiance

relative dans les numérations quantitatives faites Jusqu'à ce jour.

Pour la numération qualitative des variétés de globules blancs, principalement des poly- et des mononucléaires, nous avons opéré comme il suit :

Après avoir porté sur une plaque de verre une goutte du sang à examiner, nous étalons ce sang rapidement sur Ja lamelle avec le bord mousse d’un ténotome ; nous n’usons Jamais du procédé ordinaire qui consiste à frotter l’une contre l’autre deux lamelles ; il est défectueux, car 1l déforme et écrase beaucoup de globules. On obtient d’ailleurs, avec la première méthode, un étalement suffisamment mince. Nous fixons ensuite au sublimé, en ayant soin de laver longtemps et à grande eau, puis la préparation est mise, pendant un quart d'heure, en contact avec une solution très foncée de bleu de méthylène.

Les poly-et les mononucléaires se distinguent avec

une grande netteté.