EXPÉRIENCES EN CULTURE DIRECTE
Des milieux contenant NO;,NH, et NO;K comme source d’azote, ne m'ont donné que des cultures peu florissantes, avec lesquelles la toxicité de l’acide et des ions H rendaient impossible toute expérimentation.
Le glycocolle, au contraire, s’est montré une source d’azote excellente, avec laquelle j’ai obtenu de belles cultures où le voile bien formé était sporulé dès le troisième jour dans les milieux lea moins acides et le quatrième dans les autres.
Au bout de 6 jours de culture, le mycélium secrète abondamment un pigment dont la couleur varie du jaune au brun suivant le pH du milieu. Ces pigments m'ont gêné pour le dosage de l’acide oxalique dans les vieilles cultures.
EXPÉRIENCE XXI (Tableau XXII, Figures 14, 15, 16, 17, 18)
Milieu de culture :
Olatede ANDRE nn ee 250 cc.
Glreccolle SM en ee 76-00 Constante minérale B ....,....... 90 cc.
Glucose re bre rence 90 g.
1e (0 PER AR Re OR Variable Pau. distlléen 22 200 qs 1000 cc.
Milieu ajusté à 4 pH différents : 3,27, 3,71, 4,70 et 5,68. Réparti à la dose de 25 cc.
or
TagLeau XXII
Aotpraliquenniliale 7.4... 140 mg.
Glucose initiale ta rs 1 g. 125 RME MR OR AE CN NT Variable DIS S PRET Re Variable
Sérié | pH j Dur. | pH Récolte ; Glucose, Ac. oxali |C'onsom. initial, en final | en mg. final que final mation jou. en my. en my. en my.
3 2,89 32 1011 137 > | 4 2,68 289 815 133 t I 8,27 | Le … 250 95 45 | ,89 4 88 62 ( oil 449 re 95,5 44,5 8 7,20 22 0 ? ?
3 3,42 32 ré) 137 3 4 4 189 706 124 16 II cr 5 6,12 433 SR D 109 31 6 6,93 490 a 109 31 t 7,64 431 0 114 26 8 7,66 393 0 ? ?
3 4,72 ur 853 138 2 4 5,36 358 420 132,5 1e ER 4,70 5 7,16 485 Traces 131 9 6 7,53 442 0 134 6 dl 7,86 402 0 157 3 8 8,28 386 0 ? ?
8 5,53 117 845 138,5 1,5 4 5,67 442 241 135 5 IV 9,68 5 6,12 457 + 135 5 6 7,58 420 0 137 3 st 7,53 421 0 140? 0?
Si l’on suit les variations du pH des cultures on constate tout d’abord une acidification au troisième jour suivie bientôt d’une alcalinisation assez intense pour atteindre dans les cas les plus favorables un pH de 8,28 au huitième jour. On ne constate cependant dans ces conditions qu’une protéolyse peu importante qui se manifeste lorsque le glucose a disparu.
léum en LUE S
poids du m 1 yce Co Le S
do È
3 4 5] 6 vi 21 lemps en fours
FIGURE 14. — Courbes de croissance sur un milieu avec acide oxalique en présence de glycocolle et de glucose 1 : pH initial 3,27 Il : pH initial 3,71 LES 470 NO 5768
Les courbes de consommation de l’acide oxalique dans les différentes séries (figures 14, 15, 16 et 17) montrent clairement que la consommation s’arrête lorsque le pH a dépassé la valeur 6-6, 2. Ce fait que l’on retrouve dans les quatre séries indique done que les ions oxalate neutres ne sont pas absorbables par le Penicillium glaucum, même lorsque le glucose a disparu. La consommation de l'acide n’apparaît qu'avec la présence dans le milieu des ions oxalate acide.
Mais, si les conclusions sont nettes à ce point de vue, il est impossible de préciser le rôle des molécules entières.
Dans les cultures de 7 jours on trouve une consommation d'acide nettement inférieure à celle correspondante au sixième jour. BACH en cultivant l’Aspergillus repens sur un milieu au glycocolle avait constaté une production tardive d’acide oxalique de neutralisation. Peut-être faut-il voir ici un phénomène analogue, à moins qu’il y aie, ce qui est possible, une erreur par excès dans le dosage de l’acide oxalique dûe aux pigments sécrétés par le mycélium.
lepips en}, 3 4 $ 6 7 4 FIGURE 15. — pH initial 3,27 Courbe | : Variations du pH en fonction du temps.
Courbe Il : Consommation de l'acide en fonction du temps.
Aide Oxalique consomme EI M9
FIGURE 17. — pH initial 4,70 Courbe | : Variations du pH en fonction du femps.
Courbe Il : Consommation de l'acide en fonction du temps.
Acide Oxalique consomme en y
+ lenps en jours | 3 4 2] (4 ÿ4 d FIGURE 16. — pH initial 3,71 Courbe | : Variations du pH en fonc-
tion du temps.
Courbe Il : Consommation de l'acide en fonction du temps.
5,5 Fig 18
Fe = + Ë
ue CONSOMME en M
jh ca 8 |\XSS LT | D S / ds S # N % LÉ Bt i È +} TS
Si lemps a juur |
FIGURE 18. — pH initial 5,68 Courbe | : Variations du pH en fonction du temps.
Courbe II : Consommation de l'acide en fonction du temps.
00 LE 2°) EXPÉRIENCES PAR LA MÉTHODE DES VOILES SOLIDES. I] était intéressant de voir si la méthode des voiles solides condui-
sait aux mêmes résultats, et surtout d’essayer de préciser le rôle des molécules entières.
Choix du milieu de culture initial.
Un milieu au glycocolle m’a donné des voiles bien formés mais tellement plissés qu’ils étaient inutilisables.
J'ai employé dans les expériences qui vont suivre des voiles obtenus sur milieu à la carotte, et sur milieu de RAULIN dilué au demi. Je donnerai séparément les résultats obtenus avec chacun d’eux.
a) Expériences avec des voiles obtenus sur un milieu à la carotte.
Le milieu de culture initial était le même que celui employé pour l’Aspergillus repens. Je redonne ici sa composition :
Décoction de carottes à 500 g. p. 2000 cc. 1000 ce.
Constante mineralé DR ee 50 cc.
Glucose LR RER nets 90 g.
Citrate de Na tn me die 20 g.
CIN SE RE PR ee à 20 g.
HCL'N RE SR RE Re 10 cc.
Le Penicillium glaucum donne sur ce milieu après 12 jours à l’étuve à 22° (température optima de croissance) des voiles compacts mais en partie immergés, qui présentent un début de sporulation. Leur poids après dessication est d’environ 150 mg.
ExPÉRIENCE XXII (Tableau XXIIT)
Oxalaté de KIN7/2%..:40, 0... 6 cc. 25 Constante minérale À ........ 252R0:0e Sol. de NO,NH, à 5 p. 100 ...... 5 cc.
Glucose Rene LENS HCI et NO PART Variable
PAU OAI ER 2507
= 09 TagLEau XXIII
Voiles lavés seulement à l’eau distillée.
Milieu de substitution complet.
Achoxaliqueunttial 7.1... 140 mg.
OT EE DES Variable DH Durée pH Récolte Ac. oxæali- | Consominitial en final en my. que final mation heures en my.
De ces expériences il résulte que la consommation de l’acide oxalique est très faible, et se produit uniquement aux dépens de la molécule non dissociée, car elle ne s’observe que pour des pH inférieurs à 4, c’est-à-dire dans les milieux seuls où l’acide existe sous cette forme non ionisée.
En présence de glucose (tableau XXIIT) le milieu de la seconde série passe de pH 6,9 à pH 4 sans manifester aucune consommation de l’acide. Celle-ci se produit seulement dans la série la plus acide où le pH passe de 3,65 à 3,45. Mais le milieu est toxique à ces pH, et on s’en rend compte en comparant, après 24 heures de contact, les variations de poids des mycéliums des deux séries : pour un gain de 40 mg. chez les premiers, les seconds ont augmenté de 200 mg.
ExPÉRIENCE XXIII (Tableau XXIV)
Milieu de substitution :
Oxalate de K N/2 :....:.:...... 6 cc. 25 Constante minérale À .......... 5 cc.
Sol. de NO;NH, à 5 p. 100 ...... 5 cc:
LD PE PR PE LT à | Variable
Sn 25 ni ÉSRRRRSRRE gs 25 ce,
