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interprétation des faits que l’on à pu conclure que la neutralisation du mélange toxine-antitoxine dysentériques ne suivait pas ta loi des multiples. Ba effet, lorsqu'une faible quantité de sérum préserve contre une dose de toxine cela n'implique pas forcément une neutralisation absolue de cette toxine et on conçoit parfaitement qu'il puisse alors rester non neutralisée une dose sub-mortelle de toxine. Multiplions le tout par 10, les 10 doses de sérum neutraliseront bien les 10 doses correspondantes de toxine mais la dose sub-mortelle non neutralisée dans la première expérience, étant aussi multipliée par 10 a de fortes chances de devenir une dose sûrement mortelle. Smiea en con: clut que le L + peut être bien mieux déterminé avec de grandes quantités de toxine. Il ajoute que, si toutes les formes de toxine peuvent être utilisées, le produit d’autolyse de culture sur gélose, contenant le moins de substances étrangères pouvant être causes d'erreurs, doit être choisi. Sxica injectant dans le périloine de la souris un mélange de bacilles et de sérum pense titrer le pouvoir hictéricide de ce dernier.

Dans son second rapport SGA réédite la technique de FUKuHARA sous le nom de « Détermination de la valeur antitoxique par la valeur toxique indirecte ». SGA choisit une unité antitoxique arbitraire et recherche, vis-à-vis d’elle le L + d’une toxine. Son élalon d’antitoxine est la dose du sérum sec n°

128 qui neutralise exactement 20: doses minima mortelles pour un lapin d’un kilog (1 gr. de ce sérum neutralisant 120.000 fois cette dose mortelle ce sérum titre donc 6.000 unités). |

‘Ayant déterminé le L + de plusieurs” totinés SHIGA dose plusieurs sérums sur la quantité de toxine indiquée et une simple règle de trois lui permet de trouver le nombre d'unités. antitoxiques contenues dans les sérums examinés.

Nous reproduisons, pour terminer les conclusions de l’auteur japonais au sujet de l'animal de choix :

* Ba sensibilité des souris à la toxine dysentérique vient après çelle du lapin qui est l’animal de choix. Les rats et les cobayes sont très résistants ;

2° Les souris peuvent être utilisées pour le titrage du pouvoir antitoxique des sérums antidysentériques mais comme leur susceptibilité à la toxine est moindre que celle du lapin les résultats des dosages ne sont pas si exacts que lorsqu'on utilise le lapin ;

3° Les résultats de ces titrages sur la souris ne sont pas uniformes ;

4° Les rats et les cobayes ne sont pas utilisables pour les titrages de toxine et d antitoxine ».

Tout récemment enfin MADsEN adressait à ses collègues de la commission du sérum antidysentérique une petite quantité d’un sérum desséché puis dissout à la proportion de 1 %, dans une solution formée de deux tiers de glycérine et d’un tiers de solution saiine. Madsen, possédant un stock de 1.200 gr. de ce sérum sec, le propose comme sérum étalon,

l'étalon d'antitoxine étant la dilution au trois ceutiàme de la solution à 1 % de ce sérum (soit 10 doses minima mortelles). 11 adresse également à ses collevues une toxine sèche dite étalon avec laquelle il demande que les titrages soient effectués. Nous avons pu nous rendre compte que cette toxine présentait l'inconvénient de se dissoudre mal et n'avait plus, lorsque nous l’avons titrée, le pouvoir toxique qu'elle avait présenté à Copenhague.

CONCLUSIONS

Ici les conclusions suivantes s'imposent

Le titrage et l’étalonnage des sérums antidysentérique doivent être effectués par la méthode de Fukuhara, soit : x

a) Choix d’un étalon d’antitoxine. Quantité prise arbitrairement d’un sérum antidysentérique stabilisé par un procédé sûr.

b) Recherche du L + d’une toxine quelconque.

Toutefois nous dirons avec Shiga que le produit d’autolÿyse de culture sur gélose est la meilleure forme comme étant la plus forte et la plus pure.

Il est bien entendu que le L + d’une toxine est !a plus petite dose qui, mélangée à l’étalon d’antitoxine, amène régulièrement la mort de l'animal. :

c) Recherche du L + du sérum à:titrer, inversement le L+ d'un sérum est la plus forte dose de

celui-ci qui mélangé à la dose L + de la toxine dé. terminée d’après l’étalon d’antitoxine, laisse cependant cette dose de toxine tuer régulièrement l’animal. Le L + d’un sérum étant égal à l’étalon d’antitoxine, ce sérum contiendra autant d'unités antitoxiques que sa dose L + déterminée par l'expérience est contenu de fois dans un centimètre cube.

d) Fixation de la durée du contact préalable. Il serait bon qu'un temps de contact du mélange à 57° soit fixé. Signalons à ce sujet une cause d'erreurs sur laquelle personne n’a insisté : S'il est admis que le temps de contact a une grande importance 11 ne faut pas faire tous les divers mélanges, les placer à . l’étuve puis les retirer après le laps de temps fixé pour commencer les injections, car, si le titrage est effectué sur un grand nombre d'animaux, les premiers mélanges sont bien injectés après le temps. de contact fixé, mais les derniers peuvent l'être après 30 minutes, même parfois une heure de contact supplémentaire.

2° L’animal-réactif de choix est le lapin, mais il faut choisir des lapins de même poids et de même couleur (les lapins blancs semblent les plus sensibles, les lapins noirs élant.les plus résistants). Par mesure d'économie la souris blanche de 15 à 20 gr. peut être choisie, mais il est nécessaire de répéter chaque dose sur trois individus au moins.

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De la Floculation :

Nous avons vu précédemment que Mac Conkey regretlait qu'une technique de dosage in vitro ne vienne pas remplacer avec toute la rigueur d'une réaction physico-chimique les titrages in vivo dans lesquelles les diverses susceptibilités individuelles apportent des causes d'erreur qu’il est impossible de mesurer. N'y avait-il donc aucun procédé de titrage in vitro? Les premiers expérimentateurs essayèrent bien d'apprécier la valeur de leur sérum par des épreuves d'agglutination ou de fixation du complé-

ment, mais l’on se rendit compte rapidement que

les agelutunines n'avaient rign de commun avec les antiloxines et ne représentaient aucune vertu intéressanté pour un sérum antidysenthérique curatif. Quant au second procédé, tout le monde sait que s’il permet de prouver l'existence, ou l’inexistence d’une qualité, il est incapable pratiquement d'en mesurer la quantité.

Cependant au Congrès de Genève, DoPTER et Du- MAS annonçaient qu'ils étaient entrain d'étudier un procédé de titrage du sérum antidysentérique calqué sur le titrage du sérum antidiphtérique par le phénomène dit de la « floculation » étudié et mis

au point par RAMow. Nous ne referons pas ici l'étude des travaux de Ramon qui ont été rapidement connus dans le inonde entier mais au contraire nous nous cantonnerons dans le sujet que nous avons choisi : la toxicité du bacille de Shiga et ses applica- Lions

En ce qui concerne le sérum antidysentérique la floculation est un sujet presque neuf. ROSENTHAL cependant, en 1903, avait vu que dans un mélange de toxine et d’antitoxine dysentérique il se produisait un précipité floconneux mais la question du sérum antidysentérique était alors trop jeune pour que cet auteur put-en tirer parti. En 1925, ARLIN- DO DE Assis publie les essais qu'il a faits avec la toxine et l’antitoxine dysentérique d’après les travaux de RamoN qui signala d’ailleurs que le phénomène de la floculation était également produit par le sérum antidysentérique lorsqu'il est mélangé à la toxine correspondante.

Arlindo de Assis constate que : 1° le filtrat de culture en bouillon de 21 jours donne le phénomène et que l’addition de formél ne l'empêche pas ; 2° Le sérum de cheval normal et le sérum antidiphtérique ne provoquent pas la floculation lorsqu'ils sont mélangés à une toxine-dysentérique. 3° Le sérum antidysentérique mélangé à des toxines hétérologues ne donne pas plus le phénomène.

L'auteur brésilien trouve cependant qu’ y a des irrégularités dans le pouvoir floculant des sérums. T1 lui arrive de ne pas observer de floculation avec

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un sérum qui donnait le phénomène quelque temps auparavant et inversement. Il signale que le liquide d’autolyse d’une culture sur gélose de 24 heures donne le phénomène beaucoup plus rapidement el d’une façon beaucoup plus visible que la toxinebouillon.

Arlindo de Assis dit également que la floculation a été plus rapide et plus accentuée là où les éléments toxine et antitoxine tendaient à s'équilibrer. Dans des essais comparatifs l’auteur trouve que 5 fois Îe pouvoir curatif (procédé de Kraus et Doerr) correspond à la floculation, qu'une fois ni la floculation ni le pouvoir curatif n'existent et qu'une fois il y eut floculation mais que le sérum ne protégea pas. AR- LINDO DE Assis, ne trouvant pas de floculation avec un sérum qui ne fut jamais curatif et trouvant qu’un autre sérum acquiert des propriétés curatives indépendantes de son pouvoir floculant conclut : « On ne peut conclure à un rapport entre les pouvoirs antitoxiques (neutralisant et curatif) d'un sérum et ses aptitudes à floculer ».

En même temps, comme DoPpTer et Dumas l'avaient annoncé, des expériences se poursuivaient à l'Institut Pasteur, consistant surtout en des titrages in vivo et des floculations faites comparativement par Dumas et $S. Birar. Nous aurons occasion tout à l'heure, de reproduire les résultats obtenus.

Etudiant les produits toxiques du bacille de Shiga nous ne pouvions laisser de côté le phénomène de la floculation ; mais, par le fait même que notre étu-

d> personnelle porte plus sur la toxine que sur l’antitoxine, nous avons pris la question à l'inverse des autres expérimentateurs, Ce qui nous à permis également d'économiser les animaux d'expérience.

Pour voir le phénomène nous avons réparti dans douze tubes à hémolyse des quantités égales de toxine d'autolysat (5 cc.) et des. doses croissantes d'un sérum antidysentérique choisi arbitrairement. Ne connaissant pas le pouvoir neutralisant du sérum et le pouvoir fixateur de la toxine nous avons, choisi les doses de sérum de telle sorte que le premier Lube ne soit sûrement pas neutralisé et le dernier autcontraire soit hyperneutralisé. Chaque mé: lange ayant été bien agité nous l'avons placé à l'étuve à 37.

Au bout de heures nous avons remarqué que certains mélanges devenaient troubles et au bout de 4 heures il est apparu dans un tube des sortes de flocons blanchâtres ayant tendance à se sédimenter lentement au fond du tube. Dans ce liquide d’autolyse de culture sur gélose presqu'incolore cette floculation est parfaitement visible sans aucun artifice et ne saurait être mieux comparée qu'à une chute de neige. Ayant observé le phénomène nous avons voulu, sa spécificité ayant déjà été démontrée par ARLINDO DE Assis, nous rendre compte de la constance du phénomène. Pour cela nous avons, en présence du sérum choisi précédemment, essayé toutes les formes de toxines limpides (cette condition est en effet nécessaire pour observer le phénomène qui.

dans une émulsion bactérienne, se confondrait avec l’'agglutination ou resterait invisible). Nous avons : constaté que :

° Le filtrat d’une culture en bouillon de 15 jours, quelle que soit la composition ou la réaction de ce

bouillon donne lieu au phénomène.

° Les produits d’autolyse de cultures sur gélose ont la même propriété que celte autolyse soit faite en eau salée ou en eau distillée, ‘ que.les bacilles soient tués par la chaleur ou par le chloroforme.

3° Les toxines précipilées par le sulfate d’ammoniaque, séchées puis redissoutes en eau physiologi-, que ou en eau distillée floculent avec la même proportion de sérum qu'avant ieur traitement par le sulfate d’ammoniaque.

4° La toxine sèche de l’Institut Pasteur (mélange

de corps microbiens et de sulfate de soude, autoly-

sée, ne donne pas la réaction. Mais si, en ajoutant du sulfate de soude au produit d’autolyse, nous arrivons à précipiter la toxine que nous recueillons ainsi débarrassée de son suifate de soudé, et si nous redissolvons ce précipité, la floculation se produit dans le liquide limpide ainsi obtenu. $

5° Cinq toxines préparées avec cinq souches diff#rentes de bacille de Shiga, ont donné le phénomène.

6° Tous les sérums dd sentériques essayés (au "nombre de 14) ont provoqué la floculation de la toxine dysentérique. Jamais ces sérums, essayés à di.

‘verses saignées des chevaux, n'ont perdu ce pouvoir.