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Or, cet ordre est celui que nous avons trouvé pour

la valeur toxique des cultures en milieu liquide dans notre second chapitre.

Le phénomène de la floculation respecte. Ja loi des proportions multiples.

Exemple : 10 ce. du filtrat de bouillon de bœuf peptonée à 2 % floculent en présence de o cc. 2 du sé- TURN TD.

Pous obtenir la floculation avec 20 ce. de cette to-

xine, il faut ajouter o cc. 4 et pour observer la réac-

tion avec 5 cc. de toxine il faut o ec. 1 du sérum. La réaction de floculation permet donc de doser la toxicité de toxines par rapport à un sérum. La réciproque doit, à priori être vraie. Nous nous contentons de donner ici un tableau des résultats obtenus avec douze sérums différents, dans 16 titrages faits à des dates différentes avec des toxines différentes

(1). Le lecteur pourra remaquer que la classifica-

tion des sérums, d’après leur pouvoir de floculation est très constante et que les chiffres obtenus dans

chaque série sont en rapport avec la toxicité de lu

toxine utilisée.

Dans tous ces titrages nous ne relevons que cinq

chiffres discordants, résultats dûus surtout aux tâ-.

tonnements d’une technique trop jeune. Et cela nous amène à dire quelques mots des « floculations irrégulières »,

Nous n'avons tenu compte jusqu'ici que d'une seule floculation, celle qui se produit la première ; le phénomène se produit pourtant dans d’autres tu-

bes. Reprenons, pour la clarté de cette question, La \ série de tubes contenant une dose constante de toxine et des doses ‘croissantes de sérum. Au boui de 4 heures d’étuve ou d’une heure de chauffage à 45° la floculation s’est produite dans un tube dont nous avons noté la dose de sérum et-qui nous sert pour nos titrages. Si nous continuons à observer notre « échelle » de floculation nous voyons bientôt le tube contenant la dose inférieure à celle qui a été no. tée tout x l'heure et le tube contenant la dose supérieure présenter la réaction, puis un autre tube voisin et ainsi de suite. Finalement, au bout de 1 h. 30 de chaufage à 45° le tube dit floculant est entouré, vers la gauche (doses inférieures) de deux ou trois autres tubes présentant des floculations secondaires et vers la droite (doses supérieures) de. trois, quatre ou cinq tubes offrent le même aspect. Enfin, au bout de 3 ou 4 heures de séjour au bairimarie, il se produit une floculation retardée dans un tube contenant une dose de sérum très inférieure à la dose floculante. Si, donc, nous avons mal choisi les doses de sérum à ajouter à la toxine nous pouvons observer à défaut de la première floculation, des floculations secondaires ou la floculation retardée et notre titrage sera faussé. À l'heure actuelle, il nous est difficile de dire quelle est la signification biologique de ces floculations. Nous savons seulement que nous pouvons impunément injecter à |animal des quantités énormes (3 à 4 ce.) d’un mélange de toxine et d’antitoxine aux doses indiquées par

troie

la première floculation, mélange laissé 30 minut?s à 37° suivant la technique habituelle des titrages in ‘vivo. L'animal ne réagit généralement pas du tout, rarement il présente une perte de quelques dizaines de grammes. Les doses immédiatement inférieures. qui présentent la floculation secondaire laissent l’animal réagir fortement, mais arrivent cependant à le sauver et il faut injecter les tubes contenant des doses inférieures ne provoquant pas ta floculation pour tuer lanimal à coup sûr. (Voir protocole VIT). La dose de sérum provoquant l’'apparition de la première floculation est-elle la « dose curative » de Kraus et Doerr et la dose la plus faible provoquant la « floculation secondaire » estelle le L,? Nous n’osons l’affirmer, nos expériences sur l'animal étant trop restreintes à l'heure ac-. tuelle. Quant à la « floculation retardée », nous ne lui entrevoyons aucune signification. Peut-être est-elle due à un mélange incomplet provoquant une neutralisation partielle ? y ; En tous les cas, la réaction étant constante, parallèle au pouvoir des toxines et à la valeur des sérums, il nous semble possible de baser, dès à présent, une technique de titrage et même d’étalonnage des sérums antidysentériques. La comparaison entre ce mode d'étalonnage et le titrage par la méthode de Fukuhara, faite par beaucoup d'expérimentateurs, ne manquera pas, croyons-nous, de mettre en valeur le rôle important de la floculation. Déjà, nous avons pu constater que la classifica-

tion des sérums n°° 15, 100, 33; 38 et 57, établie dans cet ordre grâce à la réaction de floculation, était absolument parallèle à la classification. faite d’après les titrages sur la souris (par voie veineuse). Mais nous avons pu nous rendre compile par nousmêmes des causes d’ereurs qui interviennent dans la technique des inoculations intraveineuses chez la souris et des irrégularités qui en découlent. Aussi avons-nous dû baser notre classification sur une moyenne de cinq dosages in vivo. (Voir protocole

n° VIID.

CONCLUSIONS

En matière de conclusions, nous donnerons une technique d'étalonnage de sérums antidysentériques telle que nous la concevons d'après nos expériences. 3

Technique d’étalonnage des Sérums antidysentérique par les Procédés de Filoculation

1° Déterminer la dose d'un sérum étalon qui, en présence d’une quantité donnée d’une toxine choisie, donne lieu à la floculation la plus rapide. Lorsque le pouvoir du sérum et la toxicité de là foxine sont inconnus, il y a intérêt à établir une première échelle avec 5 ce. de toxine et des doses

espacées de sérum pour recommencer l'expérience avec 10 ou 20 cc. de la toxine et des doses de sérunt très rapprochées les unes des autres, en ne faisant que les mélanges correspondants aux floculations primitives et secondaires de la première échelle (multiplier les doses de sérum par 2 ou par 4 suivant que l’on utilise 10 ou 0 ce. de toxine). Il est également préférable d'utiliser un: produit d’autolyse de cultures sur gélose, ce produit, rendu. limpide par filtration sur bougie Chamberland F, ayani l'avantage de donner le phénomène de la façon je plus rapide et la plus visible.

>° Déterminer, de la même façon, la dose du serum à examiner, qui, avec cette même toxine, provoque le même phénomène.

3° La quantité d'unités antitoxiques r°ntenues dans un centimètre cube de sérum à titrer est donnée par la formule

U : étant la quantité d'unités antitoxiques contenues dans 1 cc. du sérum étalon.

a : étant la dose de ce sérum étalon qui provo- que la floculation.

b : étant la dose du sérum à examiner donnant lieu au même phénomène.

Exemple : Le sérum étalon E contient 200 unités

par centimètre cube. Il provoque la floculation d'une toxine T à la dose de 1 cc. 2.

Le sérum X à titrer donne la même réaction, avec la toxine T à la dose de o cc. 4.

Nous pouvons donc écrire |

6 cc. 4 du sérum X = r cc. 2 du sérum E.

Or, x cc. 2 du sérum E contiennent 200 x 1,2 = 240 unités antitoxiques.

Donc, o cc. 4 du sérum X = 2/0 unités.

240 X 10 Et x ce. du sérum X == 7 — "600, unités 200 X 1,2 Ou plus simplement À = = = 600 unit.

LE Mon

Conclusions générales de ce Travail

1° La toxicité du bacille de Shiga cultivé in vitro dépend de la composition, de la réaction et de l’aéralion du milieu de culture.

a) Le meilleur milieu est la décoction de viande de veau additionnée de 25 grammes de peptone Chapoteaut par litre, de 5 grammes de phosphate monopotassique et de 2 grammes de citrate de soude (ce dernier corps empêchant la précipitation du phosphate au moment de l’alcalinisation).

b) La meilleure réaction est égale au pH de 8,4.

c) L’aération doit être très large. Le milieu susindiqué, rendu solide par addition de gélose, donnant une culture très abondante et naturellement entièrement aérobie en 24 heures, alors qu'en milieu liquide, il faut attendre plusieurs jours pour obtenir la formation d’un voile donnant le même résultat, il est logique de préférer les cultures sur ce milieu solide aux cultures en bouillon.

2° L'émulsion de bacilles de Shiga cultivés sur ce milieu solide durant 48 heures, faite dans une quantité d’eau physiologique égale à la quantité

de milieu employée, additionnée de o cc. 5 de chloroforme par litre où chauffée durant r heure à Co°, produit les plus grands effets toxiques. L’émulsion ci-dessus laissée 24 heures à 37°, puis filtrée sur bougie Chamberland F, donne un produii limpide légèrement verdàtre qui a une toxicité égale au liquide limpide obtenu en filtrant au bout de 15 jours une culture en bouillon.

3° Le produit le plus toxique ayant les meilleures propriétés antigènes, c’est l’'émulsion bactérienne décrite ci-dessus qui doit immuniser le mieux. Ce fait est vérifié au moins en ce qui concerne l'immunisation des chevaux producteurs de sérum antidysentérique.

4° C’est l’action du formol, à la dose de 6 ec. par litre, durant 4o jours, à la température de 4o°, qui atténue le mieux la toxicité du matériel immunisant tout en altérant le moins ses propriétés immunisantes. (

5° La technique basée sur le phénomène de la floculation de Ramon paraît être le mode d’étalonnage des sérums anti-dysentériques le plus régulier et le plus simple.

Vu le Doyen, Vu le Président.

ROGER.. F. BEZANCÇON.

Vu et permis d'imprimer : I

Le Recteur de l'Académie de Paris, - : LAPIE.

ps s .

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