Réaction de Jaffé

Cette dernière réaction est particulièrement importante; elle est utilisée couramment pour le dosage de la créatinine : une solution de créatinine, traitée par une solution d’acide pierique et alcalinisée par NaOH à 10 %, donne, à froid, une coloration rouge orangée rappelant celle d’une solution de bichromate de potassium.

La constitution du corps qui donne la coloration a été très discutée. On pensait qu'il y avait réduction de l’acide picrique à l’état d’acide picramique. Mais Benedict et Osterberg (4) ont démontré que cet acide n’entre pas en jeu. Greenwald (5) a réussi à isoler deux produits cristallisés dont l’un donne la réaction de Jaffé. En 1937, Bolliger (5) a décrit quatre corps rouges formés par l’acide picrique et la créatinine en milieu alcalin. C’est à l’un d’entre eux qu’il attribue la coloration de Jaffé.

Cette coloration varie avec la concentration en créatinine. Folin (7) l’a adaptée au dosage. Sa spécificité et sa sensibilité ont été étudiées par Kayser. Une étude plus récente a été effectuée par Vague et Dunan (8). De nombreuses techniques de dosage de la créatinine ont été proposées ; toutes apportent quelques modifications à la méthode de Folin. Les plus récentes sont dues à Laudat, Cahn, Houget et Jacquot (9) et à Barac et Delvenne.

(1) Langley (W.D.) et Evans (M.). — Journ. Biol. Chem, t. 115, p. 333 (1936). ; (2) Barac (G.) et Delvenne (J.). — Bull. Soc. Chim. Biol tr 28;

(3) Jaffé (M.). — Z. physiol. chem., t. 10, p. 391 (1886).

(4) Benedict ($S.) et Osterberg (E.). -- J. biol. chem., t. 56, p. 229 (1923).

(5) Greenwald (I.). — J. b'ol. chem., t. 80, p. 103 (1928).

(6) Bolliger (A.). — J. Proc. Roy. Soc. N.S. Wales, t. 71, p. 60 (1937).

(7) Folin (O.). — Z. physiol. chem., t. 41, p. 223 (1904).

(8) Vague (J.) et Dunan (J.). — Créatine, p. 40-60. Masson et Cie, 1939 (Paris).

. (9) Cahn (Th.), Houget (J.) et Jacquot (R.). — Ann. physiol. et phys.

chim. biol., t. 9, p. 205 (1933).

RENE j: En III. — LA METHODE DE DOSAGE EMPLOYEE

Nous avons adopté la méthode indiquée par Fiessinger (1) et Fleury (2).

Dans un ballon jaugé de 500 cc., on met une prise d’essai de 10 cc. d’une solution de créatinine dont le titre varie suivant les recherches. On ajoute :

Solution de NaOH N/1 Q.S. pour neutraliser Solution saturée d’acide pierique à 1,2% ... 15 ce. SolutHontde NAO HO MIOL CE PRE RE EE 5 cc.

Il se produit instantanément une coloration rouge orangé. On mélange et laisse en repos 10 minutes exactement. On complète alors à 500 cc. avec de l’eau distillée. On mélange de nouveau. Nous attendons 5 minutes pour effectuer les mesures, afin de laisser à la coloration le temps de se stabiliser.

Les appareils utilisés pour la mesure.

Au début de nos recherches, nous avions adopté le colorimètre de Duboscq malgré les multiples inconvénients de cet appareil : fatigue rapide de la vue et, par suite, impossibilité de faire des mesures en série; phénomènes subjectifs diminuant la sensibilité.

Solution étalon.

À la suite de Folin, de nombreux auteurs conseillent d’utiliser comme solution étalon une solution de bichromate de potassium à 24 g. 54 par litre, lorsqu'il s’agit du dosage de la créatinine dans l’urine. L'expérience montre qu’une telle solution, observée au colorimètre de Duboseq sous une épaisseur de 8 mm. donne la même coloration qu’une solution de créatinine à 1 g.%o observée sous 8 mm., 1. Nous avons préféré utiliser comme solution étalon, la coloration donnée par une solution de créatinine à 1 g. % traitée simultanément. Les essais nous avaient montré que la solution de bichromate de potassium varie rapidement avec le temps.

Par la suite, nous avons repris nos mesures avec un photocolorimètre de Hellige. Cet appareil est très simple. Il comporte deux cuves de verre à faces parallèles et identiques. Devant l’une d’elles

(1) Fiessinger (N.), Olivier (H.R.), Herbain (M.). — Diagnostics biologiques, 5° éd., p. 591 (1944). Maloine. Paris.

(2) Fleury (P.). — Fiches techniques de Ch. Biol. 2e supplément, p. 25 (1946). Véga. Paris.