BOUILLON A L'EXTRAIT DE LIEBIG
Nous ne pouvons que confirmer les résultats précédents, même allure et même poussée de la culture.
BOUILLON ARTIFICIEL. — Résultats iden-
tiques.
(1) Toutes ces cultures ont été effectuées à +350
BOUILLON A L'ŒUF DE BESREDKA et JÜPILLE. — Aucune culture n'apparaît, même après
un mois.
BOUILLON MALTOSE. — Le bouillon maltosé est vraiment le milieu de choix pour cultiver l'Oospora catarrhalis. Après quarante-huit heures nous remarquons déjà une végétation assez luxuriante se traduisant par un léger trouble du bouillon, puis, après trois jours, nous percevions un dépôt assez abondant qui augmentait considérablement jusqu'au huitième jour. Ce dépôt était blanc grisâtre, muqueux, assez adhérent et qui, par agitation, se détachait en vrille. Nous n'avons jamais remarqué de voile, même en exposant les cul-
tures aux différentes températures (+15°, + 220, +220,
HE 30, € 34/62970/et 409) (D:
EXAMEN MICROSCOPIQUE. — Pas de change-
ment dans la morphologie en comparant aux milieux précédents. Ces filaments restent colorés par la méthode de Gram et présentent à leur intérieur de nombreuses
granulations.
RAULIN NORMAL et RAULIN NEUTRE. — (L'un et l'autre solidifiés par la gélatine). Il ne se produit aucun développement.
GÉLATINE EN PIQURE. — Sur gélatine en
piqûre, on observe le sixième jour, à la température de
(1) Notons ici une fermentation assez abondante et avec dégagement de bulles gazeuses.
UE
+20°, une colonie punctiforme d'environ | mm. de diamètre qui progresse un peu jusqu'au quatorzième jour pour atteindre environ 2 mm. 1/2. À partir de ce moment, nous ne pouvons enregistrer de progrès dans la culture. La gélatine est légèrement affaissée, une légère cupule se forme du septième au quatorzième jour, mais nous ne pouvons constater la liquéfaction du milieu. Ce fait a d’ailleurs été déjà signalé pour l'Oospora bronchialis par SARTORY.
GÉLATINE EN STRIE. — Sur gélatine en strie, la
culture est un peu plus luxuriante, les colonies sont plus nombreuses et se présentent sous la forme de petits points grisâtres qui ne changent pas de teinte, même après un mois. Nous n'observons ni liquéfaction de la gélatine ni pigmentation de la gélatine.
À l'examen microscopique, outre les nombreux filaments mycéliens très ramifiés aux parties terminales, nous apercevons, dès le onzième Jour, des filaments portant des conidies.
GÉLOSE. — La gélose ne paraît pas être un milieu bien favorable, cependant l'Oospora catarrhalis donne, au bout de six jours de très faibles colonies d'environ 1/2 à | millimètre au plus, de couleur jaune grisâtre et devenant gris noirâtre après quatorze jours. Ces colonies ne grandissent pas au delà d’un millimètre de diamètre. La gélose n'est ni pigmentée n1 liquéfiée.
L'examen microscopique n'apprend rien de particulier.
Cire
POMME DE TERRE SIMPLE. — Aucun déve-
loppement.
POMME DE TERRE ACIDE. — Aucun développpement.
POMME DE TERRE GLYCÉRINÉE. — Aucun
développement.
CAROTTE. — Petites colonies punctiformes d'environ 1/2 millimètre après quatre à cinq jours, d'abord blanc grisâtre, puis se fonçant vers le huitième jour pour prendre une teinte couleur cacao. Les colonies s'élargissent peu et ne confluent presque jamais ; elles atteignent de 1 millimètreà | mm. 1/2 au plus de diamètre. La croissance cesse après dix-sept à dix-huit jours. La carotte est néanmoins un des meilleurs milieux pour cultiver cette espèce cryptogamique.
L'examen microscopique ne révèle rien de particulier
TOPINAMBOUR. — Aucune végétation, même
après deux mois.
BANANE. — La banane se place à côté de la carotte comme milieu favorisant la culture de cet organisme. Dès le quatrième jour, nous remarquons de petites colonies punctiformes devenant crème, puis un peu plus foncées encore après dix à douze jours. Sur ce milieu l’'Oospora ne prend jamais la teinte brun cacao.
SÉRUM LIQUIDE. — Dans le sérum liquide,
culture à peine appréciable.
ALBUMINE D'ŒUF COAGULÉE. — Aucune
croissance, même après un mois.
LAIT. — Nous observons un début de coagulation le deuxième jour, il y a précipitation de la caséine, puis, dès le douzième jour, cette dernière se délite et se dissout complètement. Le liquide, filtré soigneusement, donne la réaction du Biuret (transformation en pep-
tones). (Voir le tableau p. 78.) Recherche de l'Indol. — La recherche de l'indol
est demeurée négative dans une culture de deux mois et demi sur bouillon peptoné. Cette recherche de l’indol a été effectuée par trois méthodes différentes :
19 Méthode à la paradiméthylamidobenzaldéhyde d'Erlich (1) modifiée par CROSSONINI, puis par PORCHER et GAUTIER.
2° Méthode de Denigès à la vanilline.
30 Méthode de Salkowski (nitrite de soude et acide
sulfurique).
Recherche des Granulations. — Les granulations ont été recherchées par la méthode que nous indiquons page 22 et qui est une méthode de choix. Le mycélium est pourvu de granulations nombreuses ressemblant beaucoup à celles que nous trouvons dans le bacille tuberculeux et diphtérique. Elles sont colorées en violet
noir et le corps du mycélium en rose.
(1) EHRLICH. — Med. Werke, 1901, n° 15
ae AGGLUTINATION
La réaction agglutinante a été essayée sur une culture âgée de quarante-huit heures et rendue homogène par de fréquentes agitations. Nous nous assurions de l’homogénéité par l'examen microscopique. Par trois fois nous avons renouvelé nos expériences avec du sérum du malade victime de notre oospora. Les résultats ont été négatifs alors même que le sérum n'avait été dilué qu’au 1/10. ROGER, SARTORY et BORY n'ont d’ailleurs pas eu de meilleurs résultats avec l'Oospora pulmonalis. Ceci tient à ce que la réaction d'’agglutination ne s'obtient que difficilement et rarement avec des fragments mycéliens. Il est nécessaire d'opérer sur des spores ; or, chez l'espèce que nous étudions, les organes de fructification n'apparaissent que tardivement et ne sont Jamais très nombreux.
Mais il est un autre procédé qui rend de très grands services pour déterminer le rôle pathogène des espèces microbiennes, c'est celui qui est bien connu aujourd’hui et qui est basé sur la déviation du complément.
Fixation du Complément. — Dans une première série de recherches, nous avons utilisé la technique de BORDET-WASSERMANN conseillée dans la séroréaction de la syphilis.
L'antigène était constitué par une culture pure et vivante de l'Oospora catarrhalis. Cette culture était âgée de trois Jours et avait été rendue homogène par de
fréquentes agitations : des tubes témoins nous ont permis de constater que le bouillon maltosé employé pour la culture du végétal ne gêne en rien la réaction
Le sérum du malade provenait d’une prise de sang faite aseptiquement dans une veine du ph du coude ; il avait été Inactivé par un chauffage à 56° pendant une demi-heure.
Nous avons utilisé comme complément du sérum frais de cobaye dilué de son volume avec de l’eau salée
Le système hémolytique était constitué par des globules rouges de moutons dilués à 5 0/0, et la sensibili-
. 1 , D 4 lé satrice d’un sérum de lapin préparé.
Après avoir versé dans les tubes le sérum du malade, la culture, le complément et le sérum physiologique, nous avons placé les mélanges dans l'étuve à 382 et nous les avons laissés pendant quatre heures. Ce temps est nécessaire pour permettre une bonne fixation qui se fait toujours plus lentement avec des corps mycé-
liens qu'avec des bactéries.
Le système hémolytique (sensibilisatrice et globules rouges) fut ajouté ensuite et les tubes furent de nouveau placés à l’étuve pendant une heure.
Le tableau suivant indique les résultats obtenus
après centrifugation :
En)
Tibe Sera Cuiuee || Conplmenl & | eine cm° cm° cm? | cm? cm° cm° cm’ | 02 0,2 0,1 le 14 0,! + 2 02 | 0,4 Gen 0,1 0 3 0,2 0,6 D oi 0, 0 4 0,2 = 0,1 1,6 0, = 5 0,2 0, 1,6 0,1 + 6 = 0,4 0,1 1,4 0,1 — 7 0,6 Qué cd 0,1 + 8 = = 0, 1,8 0, + 9 = — =. 2 Es 0
Le sérum du malade (tube 4) ne déviait donc pas à lui seul le complément : la culture pas davantage (tubes 5, 6, 7). Par conséquent, le doute est impossible, le sérum contenait une sensibilisatrice spécifique dans
Guen Grimes Eau Sensibi- Globules
Tubes TE sde Re Scie Hémolyse (10. — Globules à 5 0/0) l 0,5 0,4 0,1 0,9 0,1 l 0 2) 0,5 — 0,1 0,3 0,1 l de (29. — Globules à 20 0/0) A 1 Ï 0,5 0,2 0,5 0,3 0,6 légère 2 l — 0,2 l 0,3 0,6 +
Pr 10e
l'Oospora. Dans une deuxième série de tubes, nous avons contrôlé en quelque sorte les résultats précédents, en augmentant la dose de sérum et en utilisant dans un cas, comme dans l'expérience précédente, des globules rouges à 5 0/0 et, dans l’autre, une proportion plus élevée atteignant 20 0/0.
Ces constatations apportent un appoint précieux en faveur du rôle que cette espèce remplit dans le développement des lésions pulmonaires.
Un troisième essai fut effectué. Le tableau suivant
montre le résultat nettement positif de la réaction :
Culture Complément | Eau salée Abe Globules x k oospora de cobaye à rouges Hémolyse du malade au 1/2 9 9/00 Spies so Û
2 0,2 0,1 0,1 155 0,1 Il +
3 0,2 0,2 0,1 1,4 0,1 1 de
