PRÉPARATION DES SOLUTIONS

1° On travaillera tout le temps avec de l’eau distillée physiologique, soit pour le lavage des globules de mouton, soit pour la préparation des dilutions de sérum, soit pour le rinçage des pipettes. On se sert d’eau distillée non physiologique une seule fois pour la composition du témoin spectral (La solution étalon quand on ne se sert pas du spectro-photomètre).

2° Le sang de mouton aura été recueilli dans un récipient contenant des bulles de verre, pour éviter la coagulation. Une première centrifugation séparera les globules du plasma. On ajoutera ensuite du sérum physiologique et on centrifugera autant de fois qu’il sera nécessaire pour que le liquide surna-

Titre du sérum Globules Sérum Eau Sérum danslemélange de mouton Hémolytique physiologique à % à 1/20 à 10 % 10 % 1 0,5 0,3 2,17 0,03 3 0,5 0,3 2,11 0,09 4. 0,5 0,3 2,08 0,12 5 0,5 0,3 2,05 0,15 6 0,5 0,3 2,02 0,18 7 0,5 0,3 1,99 0,21 8 0,5 . 0,3 1,96 0,24 9 0,5 0,3 1,93 0,27 10 0,5 0,3 1,90 0,30 11 0,5 0,3 1,87 0,33 12 0,5 0,3 1,84 0,36 13 0,5 0,3 1,81 0,39 16 0,5 0,3 1,70 0,50 25 0,5 0,3 1,45 0,75 Sans hémolyt. 0,5 0,0 15 1 Sans alexine 0,5 0,3 272 0,0 Tém. spectral 0,5 0,0 2,5 0.0

geant reste incolore. Les globules ainsi préparées sont conservées, après usage, à la glacière. On peut les garder environ une ou deux semaines. Il est prudent de les relaver de temps

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à autre, surtout si l’on constate un certain degré d’hémolyse dans le tube sans alexine.

3° Mettre 20 cc. d’eau distillée physiologique dans un récipient, ajouter 0 cc. 6 de globules de mouton (on aura le soin d’agiter les globules de mouton avant d’en aspirer dans le pipette). Bien agiter le mélange.

4° Préparation du témoin spectral :

Prendre 0 ce. 5 de la solution de globules.

2 cc. 5 d’eau distillée non physiologique.

Les mettre dans un tube à hémolyse. Bien agiter et examiner au spectrophotomètre pour vérifier que la concentration en hémoglobine des globules de mouton reste constante.

Ce témoin spectral servira de solution étalon pour le colorimètre. Si l’on ne dispose pas de spectro-photomètre.

5° Mettre dans chaque tube à hémolyse 0 ce. 5 de la solution de globules.

6° Sérum hémolytique anti-mouton.

Prendre 0 cc. 5 de sérum hémolytique (on évitera de mettre la pipette au fond du récipient contenant le sérum. Il y a souvent un dépôt qu’il faut éviter de mobiliser). Les diluer dans 4 cc. 5 d’eau distillée physiologique; bien agiter.

Mettre 0 cc. 3 de ce mélange dans tous les tubes sauf un (tube sans hémolytique).

7° Ajouter de l’eau distillée physiologique en quantités diverses, suivant ce qui est inscrit au tableau de la page

8° Mélanger en retournant trois fois les tubes. Le tube sera bouché avec le doigt, on essuyera son doigt quand on passera d’un tube à l’autre et l’on fera en sorte que ce ne soit pas le même doigt ou la même région du doigt qui bouche le tube suivant. On commence de préférence par les tubes remplis les premiers.

9° Attendre dix minutes avant de continuer le remplissage des tubes à hémolyse.

10° Préparation de l’alexine.

Avec une pipette bien propre et bien sèche, prendre 0 ce. 5

Enroe

du sérum du malade. Les diluer dans 4 cc. 5 d’eau distillée physiologique et les répartir dans les tubes, suivant les proportions inscrites au tableau.

11° Retourner les tubes avec les mêmes précautions que précédemment.

12° Mettre une demi-heure à l’étuve à 37°.

13° Mettre quelques instants à la glacière et centrifuger sans perdre l’ordre des tubes.

14° Faire la lecture au coiorimètre ou au spectro-photomètre, après la centrifugation. Si la lecture ne peut être faite immédiatement, remettre les tubes à la glacière jusqu’au moment favorable.

Sérum 10 %e Fi. 18.

15° La lecture étant faite on appliquera pour chaque solution les formules :