CHAPITRE II

SÉPARATION, PAR DISSECTION, DES FRACTIONS à HEMOLYSANTES.

Les essais précédents avec des araignées ayant pondu, des jeunes araignées et des mâles, suffisent amplement pour élayer notre conviction sur la localisation de l’arachnolysine dans les ovaires.

Je veux cependant rendre compte d'un certain nombre d'essais, effectués dans le but de serrer de plus près cette évolution de l’arachnolysine. Ils ont consisté à disséquer des araignées pas tout à fait mûres et à essayer séparément, au point de vue hémolvytique, le lot d’ovules et le reste.

Les ovaires rudimentaires se composent de deux grappes d'ovules très petits et transparents. Plus tard les ovules grossissent et se colorent en jaune où en brun. Lorsqu'ils approchent de la maturité, ils se remplissent de gouttelettes grasses qui finissent, tant elles deviennent abondantes, par leur donner l'aspect opaque d’une écume.

Les dissections étaient extrêmement difficiles. Pour peu que les ovules fussent un peu mürs, ils se crevaient en assez grand nombre et souillaient les autres lots. Cependant on peut tirer de ces essais un certain nombre d'observations.

Je fus obligé de prendre les mêmes précautions que pour les araignées avant pondu, c’est-à-dire d'opérer avec les substances prises à divers degrés de dilution. Surtout lorsqu'il s’est agi d’ovules encore peu hémolytiques, il arriva souvent que le maximum d'hémolyse correspondit non pas à la plus forte concentration, mais à une concentration moyenne, le pouvoir hémolytique diminuant aux deux extrémités de Ja série de

tubes. Cette particularité, à laquelle nous chercherons une explication, justifiait encore mes précautions.

Pour mieux disséquer, dans certains cas, Je eongelais l’araignée dans un mélange de neige carbonique et d'acétone. En disséquant alors rapidement, j’obtenats une séparation meilleure. L'ovaire se détachait en bloc assez compact. — I importait naturellement de contrôler si la congélation ne détruisait pas le pouvoir hémolytique. Je fis une expérience où Jecomparai, par dilution, lepouvoirhémolytique d'œufsneufs et celui d'œufs du même cocon congelés cinqminutes, à — 55°. Les œufs congelés se montrèrent d'ume-activité tout à fait comparable à celle des œufs neufs.

$ 1. — Essais de séparation.

Les expériences que je fis ainsi par dissection et séparation des lots furent nombreuses et les résultats en furent assez divers. Pour avoir une idée de leur variété, décrivons avec détail quelques-uns des essais faits avec Epeira diademata, espèce sur laquelle portèrent les expériences les plus nombreuses et les meilleures comme technique.

A. Essais Avec Epeira diademata.

30-septembre. — No 168. — Æpeira diademata ©. Abdomen pas très renflé: Longueur totale : I5mm. ; longueur de Fabdomen : F2 mm. ; largeur de l'abdomen : 8nn,5, Poids : 510 mgr.

Les ovules sont déjà jaunes, assez développés. Leur ensemble forme sur le verre de montre deux taches rondesde5 mm.de diamètre ; le plus gros ovule, étalé sur le verre, a un peu moins de 2/3 de mm. Leur poids est : un peu plus de 40 mgr.

Brové à part :

Ovules dans 2ec,2 d'eau physiologique,

Reste dans 4fc,4 d’eau physiologique.

Filtré 1 heure après. Il passe 2 cc. et.3e,6: Complété le second liquide à 4 ce. Le liquide ovules est légèrement trouble ; le liquide reste l’est extrêmement. Fait des tubes avec :

Ovules : 1/2 de lx macération, 1/#, 1/8.

Reste : 1/4 dela maccration, 1/8, 1/16, 1/32:

Mis des globules de Bwæuf. Rien: après, 4 h:.1/2.

Le lendemain, après 17 heures, les tubes ovules ontune trace légère d'hémolyse ; les tubesreste présententles degrés suivants d'hémolyse : 1/4 : hémolyse complète. — 1/8 : complète. — 1/16 : avaneée. — 1/32: nulle.

Dans ce; cas, les ovules n’ont done pas de pouvoir hémolyuque, le reste de l'araignée contient de l'hémolysine, en faible proportion d’ailleurs.

30 septembre. — Ne 167. —-Æmeira diademata Q. Abdomen déjà assezrenflé. Longueurtotale: 12 mm.; longueur de:l’abdomen : 10 mm..; largeur de l'abdomen : 8 mm. Poids : 327 mgr..Ovules déjà développés, jaunes, pleins de gouttelettes grasses; le plus gros, étalé, a 2/3 de millimètre. Leur ensemble forme une grosse tache de 8 mm. de diamètre.

Broyé à part :

Ovules dans 2°e,2 d’eau physiologique,

Reste:dans:4tc,4 d'eau. physiologique.

Filtré 50 minutes après... Complété à 2et 4 ce.

Fait des tubes avec :

Ovules : 1/2 de la macération, 1/4, 1/8.

Hester 1/4 1/S -#T0, 1/32:

Globules de Bœuf. — 1 h. après :

Ovules — Rien.

Reste — 1/4 et 1/8: h. complète. —1/16: début.

Le lendemain, après 22 heures :

Ovules. — 1/2 : très avancée. — 1/4 :avancée. — 1/8 : avancée.

Reste — 1/3, 1/8, 1/16 : complète. — 1/32 : rien.

Dans ce cas, les ovules ont un pouvoir hémolytique faible, le reste en a un fort. |

Anovembre. — Æpeira diademala ®. Abdomen de forme triangulaire, peu renflé. Longueur totale : 10,5 longueur de l'abdomen : 8nn:5; largeur de l'abdomen : Gmm,5. Poids : 235 mgr. — Ovules avancés, jaunes, pas encore près de la ponte. Le plus gros à, étalé, 1 mm. Poids des ovules, légèrement souillés de resle.: 52 mgr.

Broyé :

Ovules dans 2ce,2 d'eau physiologique.

Reste dans 4et,4 d'eau physiologique.

Filwé #h..1/2 après. Liquide ovuleslégèrement trouble; liquide reste extrémement trouble.

Fait des tubes avec :

Owules.: 4/2 dela: macération, 1/4,.1/8, …..… 1/256.

Reste US; 116... 1/512.

Globules de Bœuf. — Après 1 h. 1/2, les tubes ovules commencent à s'hémolyser, Le lendemain, après 17 heures :

Reste — 1/4, 1/8 : léger début.

Ovules — 1/8, 1/16, 1/32 : hémolyse complète. 1/2 et1/4 d'une part, 1/64 de l’autre : léger louche. 1/128 : très avancée.

1/256 : début.

Dans ce cas, les ovules hémolysent, fortement même ; le reste extrêmement peu.

A noter, pour les tubes ovules, le phénomène signalé : présence d’un optimum d'hémolyse quelque part au milieu de la série des dilutions.

Au lieu de séparer seulement en deux lots : ovules et reste, il m'est arrivé de faire trois lots : ovules, foie et reste.

13 octobre. — Epeira diademata Q. Abdomen assez renflé. Longueur totale : 14mm,5: longueur de l'abdomen : 12 mm; largeur de l'abdomen : 10,5, Poids 685 mgr.

Ovules très développés, mûrs, mais encore cohérents et déformés par pression réciproque. Le plus gros à, étalé, environ 1 mm. La dissection est bonne. Séparé en 3 lots :

Ovules, foie, reste (contenant comme toujours une certaine quantité de foie).

IL y à 155 mgr. d'ovules et 165 mgr. de foie.

Pilé les 3 lots chacun dans 4ec,4 d’eau physiologique.

Filtré 4 heures après.

Le liquide ovules est légèrement trouble, jaunâtre.

Le liquide foie est très trouble, opaque, brun.

Le liquide reste est très trouble, verdâtre.

Complété de nouveau tout à 4 cc. et fait pour chaque lot une série de tubes :

1/4 de la macération, 1/8, 1/16, 1/512.

Mis des globules de Bœuf. — Après 18,50 : rien.

Le lendemain, après 17 heures :

Ovules — 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 : hémolyse complête. — 1/128 : léger louche. — 1/256 : presque complète. — 1/512 : très avancée.

Foie — 1/4 : fort début. — 1/8 : léger début. Puistraces décroissantes et rien.

Reste — 1/1, 1/8: hémolvse assez avancée. Puis traces décroissantes et rien.

Dans ce cas, les ovules hémolysent très fortement, le lot foie hémolyse très peu et le lot reste à peu près dans les mêmes proportions que le foie.

Dans un autre essai, je comparai, à masses égales, les pouvoirs hémolytiques des ovules et du foie. J'essayai également à part le céphalothorax avec les pattes.

6 novembre. — Æpeira diademata ©. Abdomen assez triangulaire, pas trop renflé. Longueurtotale : 9nm,5, longueur de l'abdomen : 8mm,5, largeur de l'abdomen : 5mm,5, Poids : 155 mgr. Détaché le céphalothorax avec les pattes; il pèse 54mer,5. Congelé l'abdomen 5 minutes vers — 65°. Disséqué. Ovules très mûrs, jaunes, diffluents quand ils se réchauffent. Isolé les ovules : lot de 36 mgr.

Fait un lot avec du foie souillé de quelques tissus étrangers: 5mer 5,

Brové ces divers lots :

Céphalothorax dans 2 cc. d'eau physiologique. Filtré. Liquide peu

trouble, verdâtre. — Fait des tubes avec :

1/2 de la macération. 1/4, 1/8, 1/256;

Ovules dans 6 ec. d'eau physiologique. Filtré. Liquide légèrement trouble, blanc. Il y a 4°c,8. Complété à 13cc,1. Celà fait 2 mgr. 3/4 par centimètre cube. — Fait des tubes avec :

oct ARR 1/512.

Foie dans 1°c,8. Filtré. Il passe 1°°,5 de liquide légèrement trouble, jaunâtre. Complété à 2 cc. Cela fait aussi 2 mgr. 3/4 par centimètre cube. — Fait des tubes avec :

1 ÉCVETTE VELOR MERE RCE 1/128.

Globules de Bœuf. — Les tubes ovules s’hémolysent très vite.

Le lendemain, après 18 heures :

Céphalothorax : rien.

Ovules -— 1 ce., 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 : hémolyse complète. — 1/32 : avancée. — 1/64 : début. Les autres : rien.

Foie — 1cc. : complète. — 1/2 : assez avancée. Les autres: rien.

Le céphalothorax n’est pas hémolytique, les ovules le sont beaucoup et le foie, à poids égal, l’est environ 16 fois moins.

Ces expériences réalisent un certain nombre de types autour desquels je puis grouper les autres que J'ai faites et que j'indiquerai de façon plus succincte. — Je rappellerai par leurs dates les essais déjà décrits de façon à réunir et tous les essais exécutés.

Un premier type de résultats est : ovules sans pouvoir hémolytique ; reste hémolytique.

Un deuxième type : ovules ayant un pouvoir hémolytique faible ou moyen ; reste ayant un pouvoir hémolytique du même ordre de grandeur ou plus grand.

Un troisième ‘type : ovules ayant un pouvoir hémolytique considérable ; reste en ayant un bien moindre. — Avec ce troisième type prennent place des essais où la dissection élait perfectionnée par congélation et où le fractionnement des diverses parties de laraignée était plus poussé.

1% groupe d'expériences. — Ovules non ‘hémolytiques, reste faiblement ou moyennement hémolytique.

Expérience déjà décrite du 30 septembre, n° 168.

29 septembre. -— Æpeira diademata Q .— Longueurtotale : 41m. ; longueur de l'abdomen : 8um 5; Jargeur de l'abdomen: 6 mm. Poids : 186 mgr. Ovules déjà jaunes, mais pas très développés. Hs forment sur le verre de montre une tache de 5 mm. de diamètre; le plus gros a, étalé, un peu plus de 1/3 de mm. Essais ‘séparés avec les deux lots ovules set reste.

Ovules : rien. — Reste : hémolyse lente, pouvoir ‘hémolvtique peu intense.

2e groupe d'expériences. — Ovules ayant un pouvoir hémolytique

moyen, reste ayant un pouvoir hémolytique du même ordre de grandeur ou plus grand.

Expérience déjà décrite du 30 septembre, n° 167.

G octobre. — Æ£peira diademata Q. Dimensions : 14 mm., 11 mm., 9 mm. Poids : 470 mgr. Ovules jaune vif développés ; leur lot pèse 73 mgr. :

Ovules : hémolyse lente et très faible (optimum non au début de la série des dilutions).

Reste : hémolyse faible, mais plus forte que pour les ovules.

Toctobre. — Æpeira diademata Q . Dimensions : 44 ovm., 41 mm., 10 mm. Poids : 540 mgr. Dissection difficile.

Ovules gros, très développés, mais bien cohérents. Poids : 80 mgr.

Ovules : hémolyse très lente, assez forte (optimum non au début).

Reste : hémolyse bien plus rapide et un peu plus forte.

23 octobre. — Æpeira diademata Q. Dimensions : 14 mm., 11 mm., 8mm,5. Poids : 198 mer. — Ovules très développés; le plus gros, étalé, a { mm. Poids du lot : 90 mgr. Dissection diffieile.

Ovules : hémolyse lente, assez forte.

Reste : hémolyse bien plus rapide, mais quantitativement, au total, plutôt plus faible.

3° groupe d'expériences. —Ovules hémolysant fortement, reste beaucoup moins.

Expériences déjà décrites du 4 novembre, du 13‘octobre et:du 6 novembre.

I octobre. — Æpeira diademata Q. Dimensions : 19 mm., 45 mm., 11mm. Poids : 1080 mgr. — Ovules très développés, encore cohérents. Le plus gros a’environ 1 mm. Dissection bonne. Fait 3 lots : ovules (135 mgr). foie (165 mgr.), reste.

Ovules : hémolyse très forteæt très rapide.

Foie : hémolyse faible.

Reste : rien.

29 octobre. — fpeira diademata Q. Dimensions : 10 millimètres, Smillimètres,6mm,5. Poids : 183 milligrammes. — Congelé à —50° avant dissection. Ovules assez gros (2/3 de millimètre), pas extrêmement mûrs.

Fait des lots : céphalothorax et pattes : 45 milligrammes. — Ovules (souillés ‘de foie) : 67 milligrammes. — Reste : 53 milligTranumes .

Céphalothorax : rien.

Ovules : hémolyse forte (optimum non au début de la dilution).

Reste : hémolyse très faible,

3novembre. — Epeira diademata ©. Dimensions : 110,5, 9 millimètres, 7 millimètres. Poids : 249 milligrammes. Il manque deux pattes.

Congelé à - 52° avant dissection. Ovules extrêmement mûrs. Dissection difficile.

Fait des lots : Céphalothorax : 72m8r,5. — Ovules (souillés de foie) : 84 milligrammes. — Foie : 24 milligrammes.

Fait les macérations d'ovules et de foie à poids égal par centimètre cube.

Céphalothorax : rien.

‘Ovules : hémolyse très forte.

Foie : beaucoup moins forte (à masse égale 16 fois moins).

Ces expériences faites sur Æpeira diademalu, malgré que leurs résultats soient variés et en apparence contradictoires, laissent cependant eutrevoir une certaine sériation. Avant de tirer les conclusions de ces résultats, indiquons rapidement veux que mous ont donnés des essais analogues faits sur Zi//4 X-nolata et sur Epeura cornul«.

B. — Essais Avec Epeira cornuta.

Je fis 7 essais.

Poids, État des Hémolyse par Hémolyse par le resle. (en mgr.). ovules. les ovules.