Un porte-tube

4. Deux verres de montre ou un verre de montre el un petit tube.

». Une pipette ou compte-goutte.

6. Une émulsion, de bacilles d'Eberth tués, préparée au laboratoire d'hygiène de la Faculté de Paris et titrée à raison de un milliard de bacilles par centimètre cube (les bacilles tués par la chaleur étant comptés comme on compte le nombre de globules rouges du sang au moyen d’un hématimètre) et émulsionnés dans de l’eau physiologique légèrement antiseptique. On à ainsi une émulsion d'aspect laiteux, toujours du même litre se conservant très longtemps et pouvant être manipulée sans crainte puisque les bacilles sont tués. (Nous avons vu des échantillons au laboratoire datant de

1 à targ 1 A quatre ans et aussi homogène qu'aux premiers Jours).

TecaniQue.—Recueillir dans un verre de montre ou dans un petit tube deux ou trois gouttes de sang du malade, à qui on veut pratiquer le séro-diagnostic, pour cela une simple piqûre au doigt suffit. On fait placer le maladé pendant quelques minutes la main dans une position déchve afin d'y amener une stase sanguine puis au moyen d'une lancette, bistouri ou aiguille, on fait (1) une petite piqûre à la pulpe d'un doigt, — c'est là moins sensible qu'à la matrice — pas plus douloureuse que celles dont on s'est fait maintes fois accidentellement, puis en faisant quelques légères pressions vers l'extrémité du doigt on recueille beaucoup plus de sang qu'iln’en faut pour faire le séro-diagnostie, avec le procédé qui nous concerne, puisque une goutte de sérum nous suffit, c'està-dire deux gouttes de sang environ puisque le caillet constitue habituellement le tiers du volume du sang recueil. Ce caillot se forme 15 à 20 minutes après --- le temps de se rendre chez soi, — et plonge de lui-même au fond du tube ou on l'y fait plonger en le détachant avec une aiguille des parois du récipient. Il laisse ainsi à la partie supérieure le sérum dont on prélève une goutte et quon additionne de sept gouttes d'eau ordinaire, dans un verre de montre.

Les tubes étant placés sur leur support on y verse, après agilation pour bien la rendre homogène, l'émulsion bacillaire, toute préparée et titrée, à raison de un centimètre cube dans chaque tube, c'est à dire 20 gouttes.

1) I est bon pour ne pas déroger aux règles si salutaires de l'aseptie de

laver le doigt à l'alcool ou de le toucher à la teinture d'iode et de flamber l'instrument.

Et on y ajoute :

Rien dans le tube n° 1 qui sert de lémoin.

IV gouttes du mélange sérum + eau dans le tube n° 2.

Il gouttes du mélange sérum LE eau dans le tube n° 5.

l goutte du mélange sérum + eau dans le tube n° 4.

On agite de nouveau les tubes puis on les bouche et on les laisse à la température ordinaire dans un endroit plutôt chaud, létuve à 37° n’est nullement nécessaire, et la réaction s'opère suivant la richesse en agglulinine dusérum, entre quelques minutes et quelques heures; si elle n’est pas apparue après 24 heures on peut la considérer comme négative.

Lorsque la réaction est positive une précipilation apparaîl dans les tubes que l’on reconnait immédiatement par comparaison avec le tube témoin et on peut conclure que le malade dont le sérum est examiné est atteint de fièvre typhoïde, car il n°y a que le sérum d’un malade ayant la fièvre typhoïde qui peut agglutiner une telle émulsion éberthienne. Une simple lécture à l'œil nu sans microscope, sans laboraloire, permet ainsi de faire, sans erreur possible, un séro-diagnostic et de reconnaître le taux de l'agglutination d’une facon précise comme le montre la figure ei-Jointe.

Rappelons que le pouvoir agglutinalif apparait chez les malades, en moyenne, à la fin du premier seplénaire, mais qu'on l'a vu parfois se montrer plus précocement et aussi plus tardivement, d'où la nécessilé, en cas d'échec, de renouveler l'examen à plusieurs reprises. La réaction peut être retardée jusqu'au 31° jour et pouvant même n'apparaître qu'à la convalescence où au

GANACHAUD D

RSS

SN SSSSSS SSS : LA =

sa

Taux de la réaction : 1/90° 17/90° 1/170:.

La dilution, 1 sérum +- 7, eau a été versée dans les Lubes, IV gouttes, tube 2, IT gouttes, tube 3 et I goutte tube 4.

Tube n° 1 — Tube témoin présentant le trouble homogène de l'émulsion.

Tube n° 2. — La réaction est nettement positive puisque le liquide surnageant est complètement clarifié, c'est-à-dire totalement exempt de bacilles qui sont lous agglomérés d’une façon compacte.

Tube n° 3. — À première vue simule une précipilalion plus marquée que cèlle du tube ?, puisque le niveau de l'agrégat y est plus bas, mais remarquons que cel agrégal bacillaire au lieu d'être compact comme dans le tube n° { est floconneux et que le liquide surnageant vu à jour frisé est un peu trouble et contient certainement de nombreux bacilles non agglu-

tinés.

Tube n° 4. — Même remarque.

Obs. Lorsque le laux de l’agglulination est lrès élevé, au 1/1000° par exemple, les tubes sont complètement clariliés,

CMP

cours d’une rechute (Thoinot et Cavasse), elle peut même demeurer complètement absente au cours d'une typhoïde classique (Widal, 1 fois sur 163 examens de typhoïdiques) mais c'est là un fait si exceptionnel qu’il est négligeable en pratique.

I ne faut pas manquer également de toujours s'enquérir si le malade a eu antérieurement, et surtout récemment la fièvre typhoïde, auquel cas la réaction perd de sa valeur: il en est de même pour une personne ayant subi la vaccination antityphoïdique.

Habituellement la réaction agglutinante persiste quelques mois après la maladie, mais elle peut aussi persister pendant plusieurs années, même à un taux très élevé, M. Widal l'ayant observé à 1 pour 8000 chez un sujet guéri depuis 8 ans. Un sujet vacciné contre la fièvre tvphoïde présente un séro-diagnostic positif pendant

un temps variable.

erOSe

Particularité du procédé.

La particularité de ce procédé ne réside pas dans le fait d'employer des bacilles tués pour la réaction d'agglutination, car Fleint de Bruxelles avait déjà constaté en 1895, que le sang d'animaux immunisés pouvait agglutiner en grandes masses des bacilles morts; M. Bordet également signala que des vibrions cholériques tués par le chloroforme présentaient aussi le phénomène, et enfin MM. Widal et Sicard montrèrent qu'il en élait de même pour le bacille typhique et avaient recommandé, afin que l’on put avoir des émulsions toutes prêtes et inoffensives, de les conserver par le formol, mais les bacilles ainsi ‘‘embaumés” ne sont bons pour l'usage que pendant quelques semaines, après lesquelles ils agglutinent spontanément, aussi s'est-on toujours méfié des produits formolés du commerce qui ne sont Jamais employés par ceux qui pratiquent le séro-diagnostic extemporané.

En Allemagne un produit de composition non décrite est entré dans la pratique courante avec Ficker (1) aussi avons-nous vu le commerce en France être inondé par un «€ Typhus Diagnostikum »-à propos duquel nous ne pouvons faire mieux que de citer l'opinion de M. Bard, Professeur de Clinique Médicale à l'Université de

Genève : « Malheureusement, d'après notre expérience

(1) Fischer, Klin. Woch., 1903, no 45.

ed

personnelle, le produit de Ficker manque de sensibilité dans certains cas. De plus, il ne paraît pas être de composition fixe ».

MM. Stassano-Lematte mirent également dans le commerce un produit d'émulsion éberthienne dans lequel les bacilles sont tués, parait-1l; par des rayons ultra-violets. M. de Rossi lui, recommande la chaleur; ce n'est donc pas dans l'emploi des bacilles tués, ce qui assure l’inocuité des manipulations, ni dans le fait d'examiner macroscopiquement la réaction de l’agglutination, dis-je, que réside l'originalité du procédé que nous avons exposé. Cette originalité git principalement dans l'emploi d'une émulsion titrée ce qui a une très grosse importance; en effet, lout le monde est d'accord pour admettre qu'une séro-réaction pôsitive au 1/10* et même ou 1/20° ne signifie rien puisque le sérum d’individus normaux ou celui de malades atteints d’affections diverses peuvent agglutiner à ce taux, et qu'il faut au moins un taux de 1/30°, 1/40, voire 1/50°.

Or, qu'entend-on par une réaction au 1/30° par exemple ?

Mesure du pouvoir agglutinatif.

Avec le procédé que nous avons décrit nous avons dit que ce pouvoir se mesurait au 1/50° dans le Lube n° 2; au 1/90° dans le tube n° 3; et au 1/170° dans ie tube n° 4; voici pourquoi : Dans le tube n° 2, nous avons ajouté 4 gouttes de la dilution, 1 sérum du malade +4 7 eau (ce qui représente 1/2 goutte du sérum du malade), ces

Er

FENG LS

4 gouttes ayant été additionnées à 1 centimètre cube d’émulsion éberthienne nous avons donc dans ce tube XX gouttes émulsion (XX gouttes — IC.C.)-+ IV gouttes sérum dilué = XXIV gouttes de liquide contenant 1/2 goutte du sérum du malade, soit un taux de 1/48: c'est-à-dire en chiffres ronds 1/50°; Dans le tube n° 3, XX gouttes émulsion + IT gouttes sérum dilué — XXII gouttes de liquide et comme les Il-gouttes du sérum dilué représentent 1/4 de goutte de sérum, Île taux est donc ici 1/88° en chiffres ronds 1/90°.

Dans le tube n° 4, XX gouttes émulsion + 1 goutte sérum dilué = XXI gouttes contenant 1/8° de goutte de sérum du malade, soit un taux de 1/168°, en chiffres ronds 1/170°. |

Quelle que soit la personne qui pratique cette réaction et en quelque lieu qu'elle soit pratiquée, un taux de 1/50° par exemple sera toujours 1/50%, ce qui est loin d'être le cas dans la pratique des autres procédés, en effet, prenons l'exemple du séro-diagnostic extemporané, qui est le procédé courant. On se sert pour le pratiquer directement d’une culture en bouillon âgée de 15 à 24 heures, ou si on a fait un ensemencement sur gélose on prélève une bonne quantité et on en fait une émulsion. Avec celle émulsion, ' l’une ou l’autre peu

importe, on verse dans trois verres de montres : 9 gouttes 29 gouttes 59 gouttes

auxquelles on ajoute dans chacun 1 goutte de sérum suspect et on a ainsi, dit-on, une dilution.

er à NOR

Mais un taux de 1/30° ne pourrait-il pas simuler un aux de 1/10° el nous savons qu'une réaction positive au 1/10° n'est pas caractéristique de la fièvre typhoïde ?

.Prenons, par exemple, deux émulsions, l'une contenant un milliard de bacilles par centimètre eube et une autre contenant trois fois moins de bacilles et ce cas se rencontre fréquemment dans la pratique, puisque, d'une part, toutes les cultures ne poussent pas avec la même intensité et toutes les parcelles de gélose prélevées ne sont pas toujours égales et d'autre part, à la-vue la différence d'aspect entre diverses émulsions où le nombre de bacilles varie dans la proportion de 1 à 10 ne frapperait pas même un œil exercé s'il n'avait des tubes repères ; prenons, dis-je, ces deux émulsions que nous appellerons, a et b et versons dans chacun des verres de montre 10, 30, et 60 gouttes et qu'arrivera-t-11?

Avec l’'émulsion 4 à un milliard de bacilles par centi-

mètre cube nous aurons :

Verre no { .… Verre n° 2 Verre n° 3 Réaction au 1/10° Réaction au 1/30 Réaction au 1/60° 10 gouttes — 30 gouttes — 60 gouttes —

24 milliard debacilles 134 milliard de baciles 3 milliards de bacilles

et avec l’'émulsion b nous aurons, puisqu'elle est trois fois

moins riche en bacilles :

Verre n° Î Verre n° 2 Verre n° 3 Réaction au 4/10 * Réaction au 1/30° Réaction au 1/60° 10 gouttes — 30 gouttes — 60 gouttes — 4/6 de milliard de 14 milliard de 114 milliard de

“bacilles bacilles bacilles

PSE Re

Nous voyons ainsi que le verre n° 2 (1/30°) avec l'émulsion b correspond en richesse bacillaire au verre n° 1 avec l’'émulsion a et cela peut entraîner des résullaits erronés, avec toutes leurs conséquences, pour la raison qu'une réaction d’agglutination est proportionnelle à la quantité d'agglutinine contenue dans le sérum par rapport au nombre de bacilles contenu dans l’émulsion, et cela se comprend aisément, puisque les agglutinines sont absorbées par leurs microbes spécifiques: deux exemples nous le confirment : 1° le procédé de Castellani pour la séparation de deux agglutinimes d'un sérum. On met le sérum en présence d'un microbe, puis par centrifugalion, on sépare le microbe et il ne reste” plus dans le liquide que lagglutinine du 2° microbe; 2° lorsque nous faisons le séro-diagnostic par le procédé lent d'ensemencement du bacille sur du bouillon addilionné de sérum du malade, il arrive que parfois dans les premières heures les microbes s'agglutinent au fond du tube, le liquide demeurant clair au dessus et que plus tard, alors que la culture devient plus riche en microbes, celle partie claire peut se troubler « comme si les premiers microbes avaient absorbé toute la subslance agglulinante » (Macé).

Si le fail que la réaction d’agglutination dépend beaucoup du nombre de microbes se comprend facilementparlesexemples précédents ilse démontre également très clairement delafaçonsuivante : prenonsune émulsion à 1 milliard de bacilles par centimètre cube et une autre émulsion à 100 millions par centimètre cube et ajoutons à 1 centimètre cube de chacune de ces émulsions des

LT

quantités égales de sérum agglutinant, nous trouverons ainsi aisément qu'une certaine quantité de ce sérum agglutinera l’émulsion à 100 millions, alors qu'elle n'aura pas d'action sur l'émulsion à 1 millia rd ; d' ailleurs comment pouvoir mesurer le pouvoir agglutinatif d'un: sérum dans l'équation qui se pose lors de l'exécution d’un séro-diagnoslic, sinous ne connaissons pas le nombre de microbes sur lesquels le sérum agit; nous avons dans

cette équalion quatre facteurs :

Î. Quanlité de sérum qui entre dans lexamen = connue.