GÉNÉRALITÉS
Lorsqu'un faisceau de lumière blanche traverse un prisme, on observe un phénomène de dispersion donnant naissance au spectre, qui permet de mettre en évidence les diverses radiations (violet, indigo, bleu, vert, jaune, orangé, rouge, auxquelles il faut ajouter les radiations infra-rouge et ultra-violette, invisible à l’œil humain), du rayonnement initial.
Si l’on observe, après son passage dans un prisme, le rayonnement produit par un corps incandescent, on voit un ensemble de faisceaux colorés et de plages obscures dont l'ensemble constitue un spectre d'émission. Si d’autre part on interpose sur le trajet d'un faisceau lumineux, un corps absorbant, transparent ou en solution, et que l'on fasse traverser au rayon émergeant un prisme, on obtient là aussi un spectre, dit d’absorbtion, caractéristique de la substance étudiée.
Cette dernière méthode est celle que l’on utilise le plus souvent, en particulier pour l’analyse spectrale des corps en solution.
Elle permet de donner des renseignements qualitatifs et quantitatifs ; ce fait peut être mis en valeur par un exemple très simple : on sait que le spectre de l’oxyhé-
moglobine est caractérisé par deux bandes d'absorption
TOUSSAINT
ASE
entre les raies D et E du spectre ; si l’on verse dans la solution du sulfure d’ammonium, l’oxyhémoglobine est réduite et les deux bandes se rapprochent jusqu'à n'en faire qu'une, occupant l’espace qui séparerait les précédentes. À la modification du corps envisagé correspond celle du spectre : c’est là une indication qualitative.
D'autre part, si l’on étudie le spectre d’une solution d’oxyhémoglobine trop concentrée, et que l’on la dilue progressivement, on voit tout d’abord une très large bande noire unique, ne laissant apparaître que le vert, le rouge et l’orangé. Puis la concentration diminuant cette bande se scinde en deux, donnant le spectre que nous avons décrit plus haut.
On a donc là une indication quantitative.
Nous avons utilisé dans nos recherches des spectres d'absorption situés exclusivement dans la région de l’ultra-violet ; la source lumineuse est une lampe à hydrogène, donnant un rayonnement très riche en radiations de faible amplitude. ;
Le principe de la spectrophotométrie réside, comme pous le verons ultérieurement dans l’étude des variations d'intensité subies par le rayonnement issu de la substance étudiée, l'intensité du rayon incident étant pris comme point de comparaison. Pour faire varier ce fac-
teur, diverses méthodes ont été utilisées :
À. — Méthode des dilutions successives :
L'intensité du rayon émergeant varie en raison inverse de la concentration de la solution étudiée : cette méthode,
peu commode, oblige à des manipulations nombreuses ;
dore
de plus, elle nécessite des quantités considérables de liquide et de ce fait n’est pas compatible avec les recher-
ches effectuées sur des corps biologiques.
B. — Emploi des cuves à épaisseur variable :
Elles sont constituées par deux parties reliées par un pas de vis serré qui permet d'accroître ou de diminuer l'épaisseur de la solution. Là encore, il faut une quantité
assez importante de liquide.
