Cas des protéines thyroiïdiennes

Les travaux de BLAU [21], ont établi que l’hydrolyse de ces protéines par la baryte à 8 p. 100 au bain-marie bouillant pendant 6 heures libère quantitativement la thyroxine sans décomposition importante de celle-ci (perte de 2 à 3 p. 100 de l’iode à l’état d’iodure). Par ailleurs, LELAND et FOSTER [107] ont précisé les conditions dans lesquelles ce produit peut être séparé de la diiodotyrosine au moyen de son extraction par le butanol. Nous avons tout d’abord contrôlé que des solutions titrées de thyroxine additionnées de 8 p. 100 de baryte ne

renferment après chauffage de 6 heures au bain d'huile à 115 -120° que 2 à 4 p. 100 de leur iode à l’état d’iodures ; 96 à 98 p. 100 de l'acide aminé sont alors retrouvés par la méthode colorimétrique décrite plus haut. Il en est de même de la thyroxine ajoutée à la thyroglobuline avant l’hydrolyse de celle-ci. Nous avons ensuite vérifié que l’extrait butanolique des hydrolysats porté à pH — 3,5 - 4,0 renferme la totalité de la thyroxine et que le lavage à la soude en élimine la diiodotyrosine. On n’y trouve plus alors que des quantités minimes de tyrosine (200 ug environ pour 100 Mg de thyroglobuline), trop faibles pour donner une réaction appréciable en présence d'ions nitreux et gêner le dosage. Les résultats de ces essais ont permis d'adopter la technique que nous proposons.

Réactifs nécessaires.

Solution I : mélanger 10 cm3 NaOH 10 N, 10 cm3 HCI1 10,5 N, 25 cm éthanol à 95° et 30 cm# H:0 (*).

Solution IT : solution à 1 p. 100 de nitrite de sodium fraichement préparée.

Ammoniaque concentrée (20 p. LUE NaOH 5 N, HCI N, Ba(OH):, 8 H:0, butanol.

Mode opératoire. — 50 à 200 Mg de thyroglobuline ou de poudre de thyroïde (**) sont additionnés de 10 cm? H,0 et de 0, 8 g Ba(OH),, 8 H,0 et portés pendant 6 heures au bain d'huile

à 115-120° sous réfrigérant à reflux. Après refroidissement, on transvase quantitativement dans une aripoule à décantation de 50 cm. On amène le milieu à pH — 3,5-4,0 à l’aide d’HCI N (virage au bleu ardoisé du bleu de bromophénol) et l’on porte à 15 cm3 avec de l’eau distillée. Après addition de 15 cm° de butanol on agite énergiquement et laisse reposer 12 heures ; la totalité de la thyroxine passe alors en solution dans le butanol avec une partie de la diiodotyrosine. Pour éliminer celleci, on lave l’extrait butanolique avec de la soude 5 N (deux lavages, le premier avec 15 cm le second avec 7,5 cm) en ayant soin de ne pas éliminer les produits insolubles rassemblés à la limite de séparation des deux liquides. On centrifuge, puis on décante le butanol, que l’on évapore à l'étude à 70°. On reprend

(*) La composition de ce réactif répond à la nécessité d’une certaine concentration en chlorure de sodium pour le développement complet de la réaction colorée et à celle d’une certaine teneur en éthanol du milieu pour assurer la dissolution de la thyroxine dans les derniers temps du dosage.

(**) La quantité minima de produit qu'il convient de soumettre à l’hydrolyse est fonction de sa teneur en thyroxine, assez variable dans les thyroglobulines.