CHAPITRE IV

Coloration.

La coloration n’a d’autre rôle que de rendre plus aisément visibles les structures préalablement fixées. Elle ne caractérise donc pas de façon spécifique les constituants cellulaires. Bien souvent, pour des raisons qui nous échappent, certains éléments, cependant différents, se colorent de façon identique, tandis que des éléments identiques se colorent diversement. Il faut toujours en tenir compte dans l'interprétation des images fournies ; mais, sous cette réserve, on peut admettre deux catégories de colorants : les uns basiques ou nucléaires, les autres acides ou cytoplasmiques. [ei encore, j'ai dû faire un choix, et j'ai retenu dans chaque groupe la méthode qui, sur le matériel fixé par les procédés indiqués plus haut, m'a paru donner les meilleurs résultats.

COLORANTS BASIQUES. — J’ai adopté la safranine, dont l’électivité pour les substances chromatiques du noyau est connue, et Je l’ai employée associée au vert Lumière, ainsi que BENDA le préconisa dès 1891 (1). La méthode dont j'ai généralement usé est la suivante : les coupes déparaffinées sont portées sur la platine de Malassez, recouvertes de safranine anilinée (2), chauffées jusqu'à production de vapeur et maintenues de cinq à dix minutes à cette température. Elles sont ensuite lavées à l’eau distillée, différenciées une minute dans le vert Lumière à 0,25 p. 100, lavées et montées au baume. Ce procédé, qui a sur celui de BENDA l’avantage de la rapidité, donne néanmoins d'excellentes images. Il faut cependant noter que, dans certains cas, les chondriosomes,

(2) Safranine à saturation dans eau anilinée saturée.

LA CONNAISSANCE CYTOLOGIQUE DES MUSCINÉES 327

d’ailleurs déformés, peuvent se colorer par la safranine. Il est donc nécessaire, pour éviter des erreurs graves, de comparer les résultats obtenus par ce procédé avec ceux que fournissent les méthodes mitochondriales.

COLORANTS ACIDES. — La fuchsine acide, employée par ALTMANN dès 1890 pour colorer les « bioblastes », est encore, à l'heure actuelle, le colorant de choix pour les mitochondries. J'ai préféré à la méthode classique la combinaison, proposée par GarEoTri en 189,5, de la fuchsine acide et du vert de méthyle (1). Cette méthode a l'avantage de donner des images. bicolores, plus facilement lisibles. Réalisée avec quelques modifications destinées à la rendre plus rapide, elle peut se résumer de la façon suivante :

Chauffer jusqu'aux vapeurs les coupes déparaffinées et recouvertes de :

HATRANITÉR A ULCS ee . 100 centimètres cubes. HUCNSINE SPP he 10 grammes.

Maintenir cinq minutes à cette température, laver à l’eau distillée et différencier de deux à trois minutes dans une solution aqueuse de vert de méthyle à 1 p. 100.

Cette méthode, extrêmement simple, donne généralement (surtout avec le matériel traité par le fixateur de REGAUD) d'excellents résultats.

Dans certains cas cependant, et particulièrement pour les pièces fixées par le liquide de CHampY, 1l peut être avantageux de faire précéder la coloration à la fuchsine acide par un mordançage selon la formule de PAL (2). Cette technique, appliquée à l’étude du chondriome par RuBascakin [1910] comme temps préalable à la coloration à l’hématoxyline (3), fut associée par MEvEs [1912] à la coloration par la fuchsine

(2) Les coupes déparaffinées et hydratées sont immergées durant trente secondes dans une solution de permanganate de potasse à 0,5 p. 100, puis

rincées à l’eau distillée et traitées trente secondes par une solution d’acide oxalique et de sulfate de potasse à 0,5 p. 100 de chaque. (3) P. 408.

acide (1) et appliquée pour la première fois par DUESBERG [1923] à la cellule végétale en association avec le vert de méthyle (2).

HémarToxyLinE. — Parallèlement aux colorants indiqués ci-dessus, j’ai employé l’hématoxyline. Ce colorant a l’inconvénient d’êtremonochromatique et de colorer avec une spécificité peu marquée à peu près tous les constituants cellulaires morphologiquement définis. Mais il a, par contre, l’avantage de donner des préparations stables et ne pâlissant pas, comme celles que fournissent les colorants à base d’aniline. De plus, il peut être utilisé indifféremment après n'importe quel procédé de fixation. J’ai utilisé assez volontiers la méthode régressive préconisée par HEIDENHAIN en 1892 (3). Elle est assez connue pour que je me dispense de la décrire. Je lui ai cependant généralement préféré la technique instituée par MazLory [19001 (4) : les coupes déparaffinées et hydratées sont portées dans une solution aqueuse de permanganate de potasse à 0,5 p. 100, où elles séjournent de quinze à trente minutes. Elles sont ensuite rincées à l’eau et immergées durant un temps égai dans une solution d'acide oxalique à 1 p. 100. Enfin, après un nouveau lavage à l’eau distillée, elles sont immergées de douze à vingt-quatre heures dans un mélange ainsi constitué :

HÉMATOXVIINERE RENE ERP EE ETS l gramme.

Solution aqueuse d'acide phospho-tungstique à

LORD ALODRN ER ARR PER ES Re EE MENT 200 centimètres cubes. AUTO VOENÉE uma eos Re SRE: 2 —- — LS UE NAME Pate RÉDONE NE D NASA OT 800 — ==

puis rincées à l’eau, déshydratées et montées à l’huile de cèdre.

Le mordançage précédant la coloration est, comme on l'a remarqué, une variante de la technique de PauL. [peut être