NOTIONS ÉLÉMENTAIRES DE TECHNIQUE BACTÉRIOLOGIQUE
I. COMPOSITION DES COLORANTS LES PLUS USUELS. — Les colorants bactériologiques et rytologiques usuels .se trouvent couramment dans le commerce, et le praticien pourra se les procurer tout prêts à l'usage.
Mais il peut être pratique et économique do les préparer en petites
TECHNIQUE BACTÉRIOLOGIQUE 369
quantités au fur et à mesure des besoins, de façon à éviter la décomposition d'une teinture trop ancienne et le gaspillage. Il existe, à ce point de vue, dans le commerce, des petits comprimés renfermant 08^,10 de matière colorante et qui se prêtent parfaitement bien à cette préparation extcmpDranée. La plupart de ces colorants s'emploient en solutions hydroalcooliques. Nous emprunterons au Vade-mecum de la maison Burroughs We'.comc la plupart des indications ci-dessous :
Les couleurs basiques d'aniline servent surtout à colorer les microbes.
Les couleurs acides d'aniline servent surtout à colorer le fond.
Les couleurs les plus employées sont les suivantes :
Couleurs basiques : rouge : fuchsine ; violet : violet gentiane, violet de méthyle, violet dahlia ; bleu : bleu de méthylène, bleu thionine.
Couleurs acides : rouge : éosine.
V alcool le plus couramment employé est V alcool éihylique absolu C^H*.OH, renfermant 99 p. 100 en poids d'alcool pur. L'alcool à degré spécifié, par exemple à 50<^, renferme la proportion indiquée d'alcool éthylique pur, c'est-à-dire, pour 100 volumes, 50 volumes d'alcool éthylique.
Les proportions d'eau distillée et d'alcool pur qu'il faut employer pour obtenir des solnlions salaries [solulions mères) de cerlaines leinlures d'usage couranl sont indiquées dans le tableau ci-dessous :
Comprimé
renfermant Alcool
0,10 de maUëre Eau en absolu en
Col3ra:its. colorante. cent, cubes, cent, cubes.
Bleu de méthylène 1 7 7
Bleu thionine 1 5 10
Fuchsine basique 1 10 2,5
Hématoxyline 1 2 1
Violet gentiane 1 7 7
Violet de méthyle 1 5 1
Comme nous !e verrons ultérieurement, V alcool mélhylique pur CH*.OH, obtenu par distillation de l'esprit de bois du commerce (alcool à brûler), peut et doit être employé dans la préparation de certains colorants [éosine, azur (Giemsa), Leishmann, Romanowsky].
Pour maintes colorations courantes ordinaires on peut employer une dilution aqueuse (dans eau distillée) de 1/10 à 1/20 des solutions saturées ci-dessus ; par e.x^emple : une goutte du colorant pour 10 gouttes d'eau distillée. Ces mêmes solutions pourront évidemment servir, après dilution convenable, à la préparation des solutions colorantes indiquées ci-dessous.
Cette méthode des solutions mères est particulièrement recommandable pour le praticien qui ne pratique qu'éventuellement bactériologie et cvtologie.
Dans l'éventualité d'une pratique bactériologique plus routinière et intense, nous rap[)elons la jjréparation dt'S principales solutions COlO-
^7id TECffmÇV^JS MÉDICALES aÉNÉ^RALES
rsotosf bactériologiques lusuelles en partant toujours de l'unité de metière colorante (comprimé de JOcentigramme«).
Solutions colorantes simples, Éosine, dissoudre :
Eosine 0«%10
Alcool à'50o 20 centimètves cubes.
Bleu 4e métliylène alcalin de Lcpffler :
Bleu de méthylène , . 0*^10 ) Dissoudre le bleu (lans
Alcool absolu 7 centimètres cubes. ] l'alcooL
Eau distillée 25 — j Ajouter successivement
Solution de potasse ceus- > Teau et la solution
tique à .5 p. 100 I goutte. ; de potasse.
Bleu de méthylène acide de Neisser :
Bleu de méthylène 0*^10 ) Diflsoudie le bteH dax^
Alcool absolu 2 centimètres cubes. ) Talcool.
.Eau distillée. 95 ^ S Ajouter la solution
Acide acétique glacial 5 — ( aqueuse il aciae ace
Bleu pliéniqué de Kùline :
r^M JM Ai.n ,1 . ( Dissoudre le bleu de
Bieu de méthylène.. 1 gramme. méthylène dans
Al(xool absolu - 10 centimètres cubes. I r alcool
Eau phéniquée 1/50. 90 - j ^^^ F^r/'*"'-
Violet «aniline (Elirlich) surtout employé pour le Gram:
Violet de^entiane ^ 0«^10
Alcool absolu 7 centimètres cubes.
Eau saturée d'huile d'aniline (fraîchement
filtrée) 63 —
Violet de gentiane pliéniqué (NicoUe).
Violet de gentiane ' O*%10 ) Dissoudre le violet dans
Alcool absolu 7 centimètres cubes. ) l'alcool.
Solution aqueuse d'acide ) Ajouter l'eau phén'-
phénique au 1/lDO 63 — S quéeau 1/100.
FiidisâtB0 piiésiiquée de Ziehl :
Fuchsine ©«'jlO ^ Dissoudre la fuchsine
AJçooiahsolu 3 centimètres .cubes. ^ • dans l'alcool.
KaupMmqué.à5p.lOO.. 22 - j ^Tb^'IoO.'"'*'''''"'*
Tlilonine phéniquée :
Thionine 0«M0
Eau phéniquée à 5 p. 100 100 centimètres cubes.
Solutions colorantes complexes.
Éosine-Azur (méthode Qiemsa).
Éosine-azur (comp. ) 0«%10
Alcool méthylique pur j
œycérioa miUm j «^ ^ »î>
TECff NIQUE BACTtmOLO&IQUE 37Î
Bleu de tnéthylèfNKéositit (méthode Jcfiner).
Eosine bleu de méthylène (comprimé) 0«%10
Alcool méibylique pur 10 aentimètres cub«M
Triacide (Blondi, Ehrlich, Heidenhain). Voici Tune des foimules qui ont été données :
i Orange G 4«%20
1 ) Fuchsine acide 6 grammes.
{ Alcoolà 20O 72 —
,. ^ Vert de méthyle 5 —
** ( Alcool à 20O 50 —
Faire chaufTer chaque 5K)lution dans un ballon jusqu'à rébullitioiV ; attendre dix minutes ; refaire bouillir ; les liquides refroidis à 30^ ou 35° sont transvasés deux fois Tun dans- Tautre.
Hématéine alunée (Solution de Bœhmer) :
I \ ^i^"*^*^*K ^V * in ^®™'"?; ^ K . i La dissoltithm se toit à froid en 12 heure». i Alcool absolu . 10 centimètres cubes. )
l Alun d'ammoniaque ou de j Faire dissoudre à chaud.
II ^ potasse 20 gramme». \ Laisser refroidir 12 heures.
\ Eau ordinaire filtrée 200 centimètres cubes. ) Filtrer.
Mélanger alors les solutions I et II. Ramener à 200 centimètres cubes au besoin avec un peu d'eau ordinaire. Abandonner le mélange dans un petit bocal à large ouverture, non couvert ; la solution est satisfaisante au bout de quinze jours à un mois.
Liqueur de Qram :
lodure de potassium 2 grammes.
Iode 1 gramme.
Eau distillée 200 grammes.
Bleu de Roux : Préparer les doux solutions suivantes :
C Violet dahlia I gramme.
