CHAPITRE I

NOS METHODES EXPERIMENTALES

Dans le premier chapitre, nous avons passé en revue les différentes variétés de méthodes que nous avons à notre disposition pour doser l’hémoglobine et nous avons tenu à indiquer succinctement quel était le principe de chacune d'elles.

Les unes sont des méthodes fidèles; les autres, au contraire, ne donnent que des résultats approximatifs. Certaines sont des méthodes longues, demandant un appareillage perfectionné; certaines sont des méthodes simples et rapides.

I! nous a fallu dans cette diversité faire notre choix, lequel a dû satisfaire au double but que nous poursuivons, but clinique d’abord, but comparatif ensuite.

Le but clinique nous oblige déjà à éliminer les méthodes longues et compliquées, et nous avons dû, en définitive, nous arrêter aux méthodes colorimétriques et aux méthodes au fer.

Le but comparatif demande que nous gardions la méthode à l’hématine acide, qu'avaient employée Fontès et Thivolle, tout en reconnaissant comme justes les objections des auteurs dont nous avons parlé, Wu en particulier.

Nous avons abandonné l'appareil de Sahli, car 11 ne peut, à notre avis, donner des lectures précises, surtout lorsqu'il s’agit de sangs anémiques. L'étalon s’altère rapidement sous l’action de Ja lumière, la solution de chlorhydrate d'hématine n'étant pas stable. D'ailleurs, les différents étalons livrés par le constructeur ne présentent pas exactement la même coloration.

Nous avons profité des modifications apportées par Autenrieth, qui préconise l'emploi d’un étalon stable et d'un

colorimètre plus commode, l'appareil de Hellige. La précision de cet appareil est telle que des observateurs non entraînés, faisant la même lecture, trouvent des résultats identiques.

Nous avons parlé assez longuement de la méthode et de l'appareil de Sahli dans notre premier chapitre; il nous reste maintenant à décrire le ‘principe et la technique de celle d'Autenrieth-Hellige.

Méthode d’Autenrieth-Hellige.

W. Autenrieth et K. Dorner (Münch. med. Wochenschifl, 1925, 48, p. 2043-2045) sont arrivés, après des études s’étageant sur plusieurs années, à produire des cristaux d’oxyhémoglobine pure de sang humain. Ce sont ces cristaux qui ont servir à établir l’étalon des prismes qui servent au dosage de l’hémoglobine avec l'appareil de Hellige.

En partant de cet étalon, on pratique les dosages de la manière suivante : on prélève au malade où à lanimal en expérience une quantité de sang égale à 20 mm, que l’on aspire jusqu'à la marque inférieure de la pipette fournie avec le prisme, puis on remplit celle-ci d'acide chlorhydrique à N/10, jusqu'à la marque supérieure, soit 2 cm.

On mélange intimement en secouant la pipette, puis on expulse sont contenu dans la petite cuvette-du colorimètre et on attend cinq minutes. Après mise au point à égalité de couleur, on lit le résultat en millimètres sur l'échelle du colorimètre et on se reporte sur la table jointe à l'appareil qui indique en gramnies le contenu réel d’oxyhémoglobine dans 100 cm de sang.

Les chiffres du tableau réfèrent aux résultats des lectures obtenues cinq minutes après mélange dans la pipette.

Si la lecture ne se relève qu'après dix minutes, il faut déduire 2 p. 100 de la valeur trouvée. Pour lecture après deux heures, il faut déduire 8 p. 100. Rs

Pour ces auteurs, la teneur de sang normal en hémoglohine serait de 17 g. p. 100.

Quant à notre méthode de base, nous avons choisi les méthodes chimiques ou ferrométriques.

Fontès et Thivolle ont fait la comparaison entre les méthodes gazométriques, considérées comme base de toutes les méthodes et celles du fer.

IIS concluent à égalité de valeur, de même que Peters et Haden.

Dans leurs travaux, ces auteurs ont utilisé leur méthode, mais ils conseillent celle de Fleury et Marque. Cependant elle est longue, compliquée, à tel point que nous lui avons préléré la méthode de Wong, mais nous avons voulu à titre de comparaison en décrire le principe et la technique avant

de passer à celle que nous avons adoptée.

Méthode de Fleury et Marque.

Principe, — Le sang est incinéré en présence d’une petite quantité de nitrate de magnésium. Les cendres sont dissoutes dans l'acide chlorhydrique concentré. La solution ferrique obtenue est réduite à l’état ferreux par le mercure et titrée au permanganate en présence de réactif phosphomolybdique,

qui donne une coloration bleue avec les sels ferreux. TecaniouEe. — Réactifs nécessaires

1° Solution de nitrate de magnésium

Nitrate de magnésium cristallisé ............, PUR TRE CR A eh te snusler etes 100

Où

2° Acide chlorhydrique pur officinal (D — 1,27).

3° Mercure pur distillé.

4° Réactif phosphomolybdique de Fontès et Thivolle Dans un ballon de 1 litre, introduire

Jai MN EE Se ee ET OO PE 300 cm3.

ACITEMMOI DATA ET ER CN ME AEree ee 20 g.

Soude pure à l'alcool ...................... 40 g.

Faire bouillir jusqu'à départ complet d'ammoniaque, ce qui demande au moins une demi-heure.

Refroidir et ajouter

AU Rene ART ee Re Ten 300 à 400 cm.

Acide phosphorique cristallisé ............ 200 g.

Faire bouillir un quart d'heure et ajouter au liquide bouillant 15 grammes de sulfate de manganèse (à 4 H?0) et goutte à goutte une solution concentrée de permanganate jusqu'à coloration rose persistante. Après refroidissement, faire disparaître exactement la couleur par addition d’une solution diluée de sulfate ferreux. Compléter à 1 litre à l’éprouvette avec de l’eau distillée (conservation indéfinie).

5° Solution titrée au quarantième de la solution . décrnormale.

Si la solution mère est décinormale, 4 cm3 de la dilution au quarantième (N/400) correspond à 0 mg. 440 de fer.