PRINCIPE ET TECHNIQUE
Principe. — Le fer de la molécule d’hémoglobine est détaché par l’action de l'acide sulfurique concentré; la décomposition sera facilitée par la présence du persulfate de potassium. Les protéines sont précipitées par l’acide tungstique et filtrées. Puisque le procédé tout entier se passe sans ébullition, la concentration d'acide peut être contrôlée dans l'inconnu et faite la même que dans l’étalon pour produire la couleur. L’altération de celle-ci sera retardée par addition de persulfate de potassium à la fois à l’inconnu et à l’étalon.
RÉAGTIFS :
4° Acide sulfurique concentré.
2° Tungstate de sodium : Solution à 10 p. 100 comme dans la méthode de Folin-Wu pour précipiter les protéines du sang. | |
3° Persullate de potassium saturé. Introduire dans un flacon bouché à l’émeri 7 grammes de persulflate de potassium pur et agiter avec 400 cm3 d’eau distillée. La partie non dissoute tombe au fond. Maintenir un excès de persulfate qui remplace automatiquement le sel décomposé.
4° Sulfocyanate de potassium.
Préparer approximativement une solution 3 fois normale en dissolvant 146 grammes de sulfocyanate de potassium pur dans 100 em$ d’eau distillée; filtrer si cela est nécessaire. Additionner 20 cm3 pour éprouver la qualité.
5° Solution du fer étalon : Peser exactement 0 g. 861 de cristaux de sulfate ferreux d’ammonium et les dissoudre dans 50 cm3 d’eau distillée.
Diluér avec de l’eau distillée jusqu'à un litre. Chaque, centimètre cube doit contenir 0 mg. 4 de fer, pour être utilisé comme étalon régulier. On a intérêt à utiliser des étalons faibles; on diluera pour cela cette solution.
Monge opéraroirRe. — Mettre exactement 0 cm? 5 de sang dans un ballon de 50 em, et ajouter 2 em3 d'acide sulfurique concentré, Tourner rapidement le flacon pour agiter le mélange pendant une à deux minutes. Additionner ensuite 2 cm? de la solution saturée de persulfate de potassium et agiter. Diluer environ à 25 cm3 avec de l’eau distillée, et mettre 2 cm? de la solution de tungstate de soude. Mélanger et laisser refroidir à la température de la pièce. Compléter à 50 cm, fermer le flacon et le renverser deux ou trois fois pour en effectuer le mléange. Filtrer à travers un papier-filtre sec dans un vase sec et propre.
Prélever exactement 20 em du filtrat clair dans un large tube à essai gradué à 20 cm° et à 25 cms.
Mesurer dans un autre tube à essai semblable exactement 1 cm? de la solution étalon contenant 0 mg. 1 de fer pour ! cm et additionner à l’aide d’une pipette graduée 0,8 d'acide sulfurique concentré. Diluer à 20 em? avec de l’eau distillée et laisser refroidir.
Ajouter à la fois à l'inconnu et à l’étalon 1 om? de persullate de potassium saturé et # cm° de la solution de sullocyanate de potassium. Mélanger et comparer dans le colorimètre.
CaLcuLs. — 20 cm du filtrat correspondent à 0 cm3 2 de sang.
Dans la solution étalon 20 cm3 contiennent 0 mg. 1 de fer.
Nos deux solutions sont mises à la même intensité de couleur dans le colorimètre. Désignons par E la division où se trouve l’étalon et par I la division de l'inconnu.
La quantité de fer en milligrammes contenue dans 100 cm3
de sang sera donnée par l'équation : Pa 20
Comme lhémoglobine contient 0 mg. 0335 de fer pour 100, E x 50 JR donnera la quantité d’hémoglobine pour 100 cmè de sang. En opérant avec le colorimètre de Helligé et en utilisant un prisme garni avec l’étalon les lectures sont très facilitées.
