AE PURE UN I ES L

b) préparation du filtrat à doser :

filtrat à doser 2 ce. 5 à compléter par de l'eau distillée à 20 cc. c) préparer un tube témoin à blanc, pour vérifier la pureté des réactifs, avec à 1/2 cc. d'acide trichlorac étique à 20 % Eau distillée q. s. p. 20 cc:

Dosage. Ajouter à chacun des tubes

1 cc. de réactif sulfomolybdique

V gouttes de chlorure stanneux

On compare au bout de 10 minutes au colorimètre le tube contenant le filtrat trichloracétique avec le tube de la gamme étalon dont la coloration se rapproche le plus de la sienne.

h On a X =

CN h’

X étant le taux de phosphore inorganique cherché (qui sera exprimé en PO4 H3 pour 1.000 cc. de sérum.

h étant ia FR lue au colorimètre pour le tube de la gamme étalon,

h’ étant la hauteur lue pour le filtrat trichloracétique,

n étant le chiffre en mg. de PO4 H3 pour 1.000 cc. de sérum auquel correspond le tube étalon (soit 100, ou 120, etc...).

Le résultat obtenu en acide Re est à diviser par 8,16

pour être exprimé en phosphore minéral.

Dosage de l’activité phosphatasique du sérum.

L'activité phosphatasique du sérum a été dosée par la technique de BopANSKY.

Notre ami JEQUIER l’a extraite d’une conférence de Cx.-O0. GUIL- LAUMIN intitulée : « Le métabolisme du calcium, physiologie — techniques de mesure — leur application au diagnostic, parue dans « Les exposés annuels de biochimie médicale publiés sous la di-

rection du Professéüir M. PoLonovski, 1'° série, pages 250 et suivantes :

« La méthode utilisée pour la mesure de l’activité phosphatasique est la méthode de Bopansxr qui réalise facilement l'équilibre acido-basique favorable à l’action maxima du ferment,

Comme les mesures sont faites sur le sérum et que dans le sérum c’est la phosphatase 8 qui prédomine (à l’inverse des globules) c’est sur un glycérophosphate 8 que l’on fait agir le sérum. :

On prépare extemporanément la solution :

Glycérophosphate disodique 8 pur 0 gr. 50;

Véronal sodique 0 gr. 42;

Eau distillée 100 ec.

Dans deux tubes à essai on verse 10 cc. de cette solution et on place l’un d’eux pendant cinq minutes dans un bain d’eau réglé à 38°. Au bout de ce temps on ajoute 1 cc. de sérum, on

mélange et replace le tube bouché au bain d’eau pendant une .

heure exactement .

Parallèlement on verse 1 cc. de sérum dans le deuxième tube (B) qu'on additionne immédiatement de 3 cc. de solution d'acide trichloracétique à 20 %.

À son tour le premier tube (A) est retiré du bain, additionné de la même quantité de désalbuminant et refroidi. On centrifuge alors les deux mélanges pour obtenir les liquides limpides dans lesquels on va doser le phosphate libéré. On prépare dans cinq éprouvettes :

Etalon I HEtalon II “Tubes IIL IV V Solution de phosphate correspondant en PO4 H3 a... (en mg.) .... 0,050 0,100

Solution trichloracétique à 20 % 1 1 Ô 0,5

hat A

Hiquidé Br ir. 7 cm3

Liquide A ........ 8cm3,5 1cm3

Soude à 10 p. 100 q. s. p. neutraliser en présence de phtalénie

AU IST Serre 25 cm3 25 25 45 25

Mélanger chacune d'eux, terminer, comme pour le dosage du phosphore minéral du sérum, en ajoutant (méthode de DENIGES)

Réactif molybdique 1cm3 1 1 1 1

Réaction stanneux. 0 cm3, 25 0,25 0,25 0,25 0,25 (ou V gouttes)

On utilise de même que précédemment

1. Comme solution étalon de phosphate, une solution titrée de phosphate monopotassique PO4 KH2 sec.

2. Le réactif molybdique: il est constitué par un mélange à volumes égaux de solution à 10 p. 100 de molybdate d’ammoniaque et d'acide sulfurique pur (réactif à préserver de la lumière pour qu’il ne se colore pas spontanément en bleu).

3. Le réactif stanneux : il est constitué par: étain en feuilles O gr. 20; solution de sulfate de cuivre à 2 p. 100 : II gouttes ;

acide chlorhydrique pur: 4 cm8.

On chauffe légèrement pour activer l'attaque du métal et lorsque celui-ci est presque totalement dissous (il ne l’est jamais en entier) on amène à 20 cm3 avec de l’eau distillée.

Ce réactif ne se conserve pas plus de 3 à 4 jours.

On mélange donc les liquides dans les cinq éprouvettes; il se développe une belle coloration bleue. On compare au colorimètre le tube III et le tube IV ou le tube V à l’étalon dont la teinte se rapproche le plus de celle de ces tubes.

En exprimant les résultats en PO4 H3 par litre, ceci conduit,

tous calculs faits, à ce que légalité avec l’étalon I du tube III