CHAPITRE PREMIER

LA CULTURE DU STREPTOBACILLE DE DUCREY

Nous avions besoin de connaître les études sur la culture du bacille de Ducrey pour nos recherches personnelles et il nous a fallu tout un travail bibliographique pour amasser ce que l’on a publié sur la question, Sans doute cette littérature est-elle moins abondante que celle qu’a entraîné l’étude de certains microbes. Mais elle a cependant été très étudiée, surtout dans ces dernières années.

. On sait en effet toute l'importance pratique de cette culture. A vrai dire elle n’a pas encore une valeur diagnostique (24). Les échecs sont encore trop fréquents, même lorsqu'on s’adresse aux cas les plus favorables au

point de vue bactériologique. Plus que dans toute autre | “affection, la réponse négative du laboratoire ne veut rien dire dans la chancrelle, Mais à mesure que l’on précisait les techniques d’ensemencement, la composition

PSAOTE

des milieux, la morphologie des colonies, la culture devenait moins difficile, au point que ce n’est plus maintenant un fait remarquable d'obtenir une culture pure du streptobacille.

La culture du streptobacille permit de multiples essais thérapeutiques. Et lorsque l’on fait historique du traitement de celte affection, on est frappé du parallélisme des progrès de la bactériologie et du traitement. La chancrelle a cessé d’être « la honte de la dermatologie » du jour où Reenstierna et Nicolle ont pu obtenir avec assez de constance des cultures pures du bacille de Ducrey.

Historique

Ducrey (14) n'avait pu obtenir de cultures du germe qu’il a décrit. Il l'avait obtenu à l'état pur, en faisant des autoinoculations en série ; se servant donc in vivo de la méthode que les bactériologistes emploient habituellement in vitro, il décrit un bacille gros et court mesurant Op 50 et 2 p à bonts arrondis. Il a souvent la forme d’un 8, c’est-à-dire avec une dépression latérale de chaque côté; cette dépression du reste peut manquer.

Va verticalement, il semble un coccus ; il est ordinaiment en anias ou isolé, le plus souvent libre ou dans les globules du pus. Il se colore à la fuchsine et au violet de gentiane, mais sans prendre entièrement Ja couleur qui se fixe particulièrement à ses extrémités. Il ne se colore pas par la méthode de Gram.

Unna (52) critiqua la spécificité du bacille décrit par

Marne

di

Ducrey. En faisant l’étude anatomopathologique du chancre mou, il trouve dans la couche malpighienne un bacille différent. C’est un bacille en chaïînettes de 5 à 10 éléments ct plus, parallèles à la surface du chancre el n’envahissant pas le tissu cellulaire sous-cutané.

Individuellement, lesmicrobes sont de dimensions plus petites que celles données par Ducrey, le microbe se colore en entier. Ses extrémités sont carrées. Le bacille ne prend pas le Graw,

C’est à Nicolle (38) que revient l’honneur d’avoir réfuté Unna.

Analysant dans sa thèse les résultats de l’examen analtomopathologique de 26 chancres mous, il montre que si dans la profondeur de la muqueuse, le bacille a bien l’aspect décrit par Unna, à la superficie on a la morphologie du bacille de Ducrey. Et il écrit « la transition se fait d’une manière si évidente qu’il est impossible d’avoir le moindre doute sur l'identité du bacille du pus et du chancre » Nicolle, thèse (38).

Nicolle n'avait pas alors cultivé le streptobacille. Strauss partant du pus des bubons n’avait pas été plus heureux. Nous ne ferons que citer les tentatives douteuses de Ferrari (18), celles de Petersen (53) qui se sert de gélose sérum (1893). Islomanoff et Alaspiam (28) sur gélose ascite (1893). Lenglet (34) montra en 1898 une culture pure de streptobacilles. Mais à notre connaissance, il ne publia jamais la composition de son milieu contenant, disait-il, seulément « des ferments parliculièrement actifs » et à base de peau humaine.

En réalité l’histoire de la culture du bacille en navette

SEA Ye

éommence en 1900 par la communication de Bezançon, Griffon et Le Sourd (6).

Ils se servent de leur milieu au sang (7). On sait qu'il s’agit de gélose répartie en tubes ou fioles d'Erlenmayer, liquéfiée au bain-marie à 50° et dans lequel on incorpore 1/3 de sang de lapin prélevé directement et aseptiquement dans la carotide. Les auteurs ont donné une description parfaite des cultures : « À Ja surface des tubes ainsi ensemencés, on voit apparaître, après un séjour de vingt-quatre heures à l’étuve à 37°, des colonies arrondies, saillantes, brillantes, qui atteignent leur complet développement en 48 heures, et sont alors opaques, grisâtres, présentant 1 à 2 millimètres de diamètre. Lorsqu'on les prélève pour l’examen microscopique, elles ont tendance à fuir en masse devant le fil de platine, glissant à la surface du milieu, et sur la lamelle, sont difficiles à dissocier ».

Dans ce milieu, le germe a sa morphologie {typique en chaîneltes. Il conserve une vitalité extrême : il peut être repiqué après trois semaines de séjour à l’étuve ; il donne un chancre d’inoculation typique au onzième repiquage. Enfin les auteurs montrent que si en 24 heures on ne perçoit pas de colonies sur le milieu, il arrive que l’on trouve des chaïinettes typiques dans l’eau de condensalion.

Malgré l'importance de ce travail on peut dire que les cultures réussies demeurèrent rares. C’est à la suite des travaux de Reenstlierna que les tentatives heureuses se mulliplièrent, donnant lieu à une efflorescence de travaux que nous allons tenter de résumer ici.

LP

Milieux de culturé pour le bacille de Ducrey :

A. — Milieux au sang de lapin

On peut dire que les milieux au sang de lapin sont

au streptobacille ce que sont pour le gonccoque la gé-

lose ascite ou le sérum de bœuf coagulé pour le bacille

diphtérique. C'est le milieu qui a été le plus souvent

employé par les différents auteurs. Tous les modes de préparation que nous allons indiquer dérivent de la formule de Bezançon et Griffon. A notre point de vueil présente deux inconvénients : tout d’abord il est difficile d'obtenir plus de 100 à 150 cm° de sang même en sacrifiant le lapin. D'autre part, il nous à paru impossible de juger du travail de la bactériophagie dans ce milieu. Le premier en date de ces milieux est celui de Reenstierna.

1° Milieu de Reenstierna (Cf. 44)

C’est une gélose au sang de Bezançon-Griffon modifiée.

Cet auteur décrit ainsi sa préparation : € 1° On fait fondre 60 cm de gélose nutritive à 3,5 % d’agar dans une fiole ; 2° on laisse refroidir jusqu’à 60°; 3° on additionne de 30 cm° de sang de lapin défibriné ; 4° on maintient ce mélange dans un bain-marie réglé entre 60 et 63° pendant 5 minutes ; 5° on répartit en tubes (5 cm° dans chacun) qu’on incline ; 6° Il est nécessaire de re pas porter les tubes à l’étuve ainsi qu’on le fait d’ordinaire pour contrôler la stérilité du milieu avant l’ensemencement ».

SPAS

« Pour réussir l'isolement du streptobacille on doit employer un milieu préparé le même jour. Pour les passages, des tubes âgés même d’une semaine sont utilisables si on les garde à la glacière ».

Avec ce milieu Reenstierna a réussi 12 fois sur 18 à cultiver le bacille de Ducrey, parfois en culture pure d'emblée, si l’on partait d’un chancre d’inoculation. Il n’a jamais réussi à oblenir une culture pure en parlant d’un chancre spontané, les tubes élant envahis de streptocoques et de paradiphtériques. Il conseille d’ensemencer largement et de très nombreux tubes de (10 à 20), ce qui est difficile c’est d'obtenir la première culture : « dès la deuxième génération, les repiquages marchent bien » les cultures sont plus abondantes, l’auteur repique tous les jours.

2 Milieux de Nicolle. Mirieu n'iSsoLEMENT (Nicolle 39).

C’est un milieu de Reenstierna modifié. On l’obtient « en slérilisant dans une fiole d'Erlenmayer 90 gr. de gélose nutritive à 3 % d’agar et en ajoutant 20 gr. seulement de sang défibriné de lapin ».

MILIEUX D'ENTRETIEN. — On se sert soit de la gélose soit d’un milieu liquide.

Bouillon Martin. . . . 100 grammes Sang défibriné de lapin . 20 »

Dans ce milieu, la culture se développe en grains, parfois adhérents aux parois. Au bout de quelques Jours, il se fail à la surface du milieu un voile incom-

te plet dont les fragments tombent au fond du tube par agitation.

En maintenant les tubes à l’étuve à 35° on conserve les bacilles vivants pendant ro jours, en bouillon et sur

gélose 3 ou 4 jours ; la 1/2 des tubes peuvent être repiqués jusqu’au 10° jour.

MitiEU DE CONSERVATION, — En dehors de la gélose molle dont nous donnerons plus loin la formule et qui est du reste un milieu moins favorable, Nicolle se sert d’une gélose molle sanglante : |

Gélose à 2,50 % d’agar ; 1 0% d’amidon de fécule de pommes de terre ; 20 % de sang défibriné de lapin.

Le microbe, sur ce milieu, peut toujours être repiqué après 3 à {4 semaines. Souvent les repiquages sont possibles après six semaines.

3° Autres milieux au sang de lapin.

De Assis (1) donne une formule analogue. Il insiste sur l'importance qu’il y a à chauffer le milieu à 55 degrés au bain-marie pendant 5 minutes après le mélange du sang, De même Nicolau et Banciu (42) chauffent leur gélose sanglante pendant une demi-heure à 60°. Leurs milicux sont donc très voisins de celui de Reenstierna,

B. — Autres milieux au sang 1° Milieux au sang de mouton de Durand,

Durand (15) décrit deux milieux au sang de mou-

ton.