STE
Le germe présente une grande vitalité dans ce milieu. Il peut être repiqué jusqu’au vingtième jour, il reste vivant à la température du laboratoire après quelques jours d’étuve à 35°.Mais il perd sa virulence après 15 à 20 jours de culture. |
Notons que Nicolle dans son travail des archives de l’Institut Pasteur de Tunis (40) indique que les milieux au sang humain semblent impropres à l’isolement du bacille de Ducrey. Il n'indique pas du reste la formule du milieu dont il s’est servi. Il n’a pu obtenir la culture qu’en acclimatant progressivement et lentement le germe en une trentaine de repiquage.
C) Milieux au sérum
Nous rappelons pour mémoire que c’est sur la gélose sérum que Petersen (43) avait obtenu une des premières cultures du streptobacille. D’après Nicolau et Bauciu (41) ce qui compte dans les milieux au sang c’est l'hémoglobine des globules rouges et non pas le sérum ni les leucocytes.Le streptobacille en effet,selon Frei (21) hémolyscrait les globules rouges. De plus, un même streptobacille serait doué d’un pouvoir hémolytique inégal visà-vis des globules des différents groupes sanguins. Nous voyons peut-être là une raison aux différences d'appréciation que l’on note chez les auteurs vis-à-vis
de tel ou tel milieu sanglant.
1° Sérum non coagulé de lapin.
Dans leur article déjà cité, Bezançon Griffon et Le Saurd (6) communiquent les résultats qu’il ont obtenus
ot.
en se servant de sérum non coagulé de lapin employé pur «le milieu se trouble légèrement, écrivent-ils, ct présente de petits flocons ».
Le microbe se présente sous forme de longues chaïinettes à l’examen sur lames. Mais la vitalité du microbe est faible,nécessitant des repiquages fréquents.La culture reste toujours maigre.
2° Gélose au sérum de cheval de Nicolau et Banciu
Ces auteurs (41) emploient une gélose albuminée au sérum de cheval et préparée comme une gélose ascite. Ils font pousser sur ce milieu les souches de streplobacille, obtenues après isolement sur leur milieu à l’eau peptonée sanglante. Cela suppose un certain acclimatement du germe aux milieux artificiels, d’une durée extrêmement variable suivant les souches, allant de quelques semaines à quelques mois.
Il faut ensemencer largement,et l’on obtient en 24 heures des colonies grisâtres non confluentes. Ce milieu serait pour Nicolau et Banciu très supérieur à la gélose molle ascitique qu’ils ont expérimentée sans avoir de
bons résultats.
3° Milieu au sérum formolé de Legroux
Ce milieu de culture est indiqué par de Assis (1).
Bouillon de bœuf ;
peptone Parke et Davis 2 % ;
ou peptone d’estomac de porc 2 % ;
sérum formolé de Legroux 10 % du volume total,
AHooes
On stérilise cinq minutes à l’autoclave à 110.
On obtient un mélange opalescent dans lequel le bacille pousse, mais habituellement d'une manière assez maigre, sans beaucoup modifier l’aspect du liquide.Parfois, il se produit un dépôt au fond du tube ou des grumeaux surnageant dans le liquide.
D) Milieux à l’œuf
Ces milieux ont été décrits par Hababou Sala.
Ce sont eux qu’il emploie pour la fabrication de ses filtrats vaccins. Les milieux que nous indiquons à cette place sont à base du nouveau milieu à l'œuf de Besredka.
Milieu à l’œuf de Besredka
Nous croyons devoir reproduire en détail la technique de fabrication de ce milieu car c’est là le seul point délicat de la fabrication des milieux d’Hababou Sala.
Suivant Besredka (5) il faut prendre vingt jaunes d'œufs ce qui faitenviron 350 cm°. Il sera prudent d’en vérifier le volume, surtout si lon emploie des quantités plus faibles, car nous avons observé des variations assez importantes dans le volume des jaunes.
On dilue dans un litre d’eau neutre ou alcaline en battant le mélange. On obtient ainsi une émulsion homogène d’un jaune un peu laiteux. Il faut alors clarifier l’'émulsion en se servant de lessive de soude à 1 %.
’est là le point délicat de la préparation.
Ajouter tout d’abord 175 cm’ de la solution de
soude, dans l'exemple choisi : c’est la moitié du volume des jaunes. On le fera en remuant le liquide, et en versant la lessive par petites quantités de manière à avoir un mélange bien homogène.
À partir de ce point, ajouter la soude centimètre cube par centimètre cube,toujours en battant le mélange, et en vérifiant à chaque fois à la pipette la solubilité du mélange.
On en versera environ 10 cm*, pour vingt jaunes. Mais c’est là une dose très variable suivant les œufs “employés.
On devra doncsurveiller soigneusement la solubilisation. On sera averti par un changement de la coloration du mélange qui se fai! assez brusquement vers une belle teinte jaune d’or. Le liquide reste opaque en grande quantilé, mais est translucide si on l'examine en couche mince, dans une pipette. I ne faut plus alors ajouter desoude ; on dilue ainsi les œufs solubilisés dans 20 fois leur poids d’eau neutre, 7 litres dans l’exemple précédent, On stérilise à 110° pendant vingt minutes, ce qui nous a paru troubler légèrement le milieu.
Hababou Sala à la Société de Biologie (26) et surtout dans sa thèse (25) décrit ainsi les milieux qu'il à employés :
1° Bouillon B. H. S.
Bouillon ordinaire ou bouillon T ; Milieu à l'œuf de Besredka : 25 % ; Glycérine neutre: 5 %.
Le streptobacille y pousse en masses glaireuses,
DE
adhérentes au fond du tube, avec un trouble léger du
milieu.
2 Gélose B. H.Ss.
Gélose ordinaire stérilisée en ballon.
Bain marie à 70° pour faire fondre la gélose.
Ajouter stérilement 1/4 de milieu à l'œuf et répartir en boîtes de Pétri.
Il faut ensemencer largement toute la surface ; en 24 heures on obtient des colonies roses nacrées 1/2 sphériques difficiles à prélever parce qu’elles filent sous l’anse de platine.
Les jours suivants, les colonies deviennent opaques, friables. Enfin, une fois sèches, elles deviennent transparentes, avec un point opaque au centre.
Tels sont les caractères d’une première culture. Mais les repiquages sont beaucoup plus abondants et donnent une culture confluente en 12 heures; en 15 jours, elles ont atteint les bords du tube si l’on a cultivé en culot.
3° Gélatine B, H.S.
C’est une gélatine à laquelle on adjoint 1/4 de milieu à l’œuf de Besredka.
Hababou Sala a pu obtenir la cullure du germe sur ce milieu. Mais le bacille de Ducrey pousse lentement à la température du laboratoire. Il ne liquéfie pas la gélatine.
4 Milieu de Besredka à l’œuf
Employé pur, le milieu de Besredka a donné de mauvais résultats à Hababou Sala.
Hababou Sala est revenu dans plusieurs communications sur l'intérêt des milieux qu’il décrit: dans sa communication au Congrès de Dermatologie de Bruxelles en 1926 (26) il donne une véritable valeur diagnostique à la culture des germes chancrelleux sur milieux B. H.S. Cependant Nicolau et Bancin qui ont expérimenté les milieux à l’œuf les considèrent comme médiocres tout au moins pour l’isolement du germe.
Nous pensons qu’il faut voir comme cause à cette différence d'appréciation la difficulté qu’il y a à apprécier exactement la solubilisation des jaunes et à ne pas dépasser la quantité nécessaire et suffisante de lessive de soude,
E. — Milieux usuels
Tous les auteurs classiques considèrent comme impossible la culture sur milieux usuels du bacille de Ducrey.
Kolle et Hetch (32) indiquent qu’il pousse seulement sur les milieux au sang et au sérum non coagulé.
Dopter et Sacquepée indiquent les mêmes milieux et précisent que le streptobacille ne pousse pas sur Îles milieux usuels.
Cependant, si ces conclusions semblent indiscutables pour l'isolement et les premiers repiquages, certains auteurs ont pu cultiver sur des milieux usuels des streptobacilles acclimatés aux milieux artificiels.
Il faut insister sur ce point, et tous les bactériologues qui se sont occupés de la question y insistent, c’est qu’il s’agit là de microbes de collection, On ne réussit
Note
le passage que par adaptation progressive au milieu, et au bout d’un temps extrêmement variable selon Îles souches envisagées.
Nicolau et Baociu (41) qui ont repris les recherches de Hababou Sala sur la question, indiquent des variations de ce temps d’acclimatation aux milieux de culiture allant de quelques semaines à quelques mois.
Nous avons réuni ici les milieux où l’on a obtenu des cultures de bacilles de Ducrey.
Tout d’abord on citera la gelose molle.
Nicolle a obtenu la culture et la conservation du bacille dans un milieu ainsi composé :
Gélose à 2°, 50/00 d’agar + fécule de pomme de terre ou d’amidon : 1 %.
On conserve la culture vivante pendant une dizaine de jours, mais en adjoignant à un large ensemencement un fragment du milieu au sang. Ce milieu donne des résultats infiniment inférieurs à la gélose molle sanglante dont nous avons donné plus haut le modus faciendi.
Hababou Sala (25) semble être le premier à avoir obtenu le passage du bacille en navette sur les milieux usuels,
Il décrit ainsi les caractères des cultures.
Sur gélatine pure le bacille de Ducrey pousse très lentement ; les colonies restent toujours punctiformes et ne confluent jamais, même après plusieurs passages sur ce milieu. La gélatine n’est pas fondue.
Sur bouillon Martin où obtient un voile incomplet
