CA NP
À Da
TE Le
en solutio n aïcaline + Par contre en solution acide, nous avons obtenu la courbe I fig. I8 qui. nous montre un maximum à 500-#I0 TD Nous avons déjà vu Fig ,2 page 20 un exemple de courbe ayant un maximum à SI0Me 2° / Fixation sur résine ot élution de J! acide indol-acétique en solution pure » | I00 ce d' une solution W/5000 df acide indol=acétique ont été passés sur une colonne contenant I gramme de ne ° Lfélution a été foie te comme d'habitude par HCL M/I0 et recueillie par fractions de TO cc, Les 2 premiers tubes ne donnent pas de coloration : Les spectres des colorations des différentes portions sont représentés sur la figure 20 page 77 . Le spectre I correspond au tube N° 3 .. là encore, nous renarquons que 1° acide indol-acétique ne cormiens ce à apparaître quiau 20° cc, que le maximun de concentration est atteint seulement au 2° Lube contenant de 17 aide indol-acétique, c' est à dire du 30° au 40° ce a En mêne tenps, nous voyons le maximum se déplacer légèrement de 500 my dans Le T° tube à 510 ot 520 ru dans Le 3° tube », De Renfrrcement par addition d'acide indol-acétique des
courbes chtenues avec l'urine pure «
A IOO cc.dt urine,nous avons ajouté 2 mars d' acide indol-acétique,
Cette addition a été faite sous forme de 2 cc dt une solution d' acide 2 0 EN — 18 ” e 0 # e indolacétique à TO , dans 1° eau distillée, ce qui ne change pas Le
pH de l'urine ,
MU Hi 4
FIGURE 20, Spectres donnés par les différontes fractions la de ltélution d'une 7 solution df acide in D otitue pure « 18 rs On renarque que : :
La première coloration est donnée per le troisième tube ct corres= pond au spectre I Le maximum le plus fort qi est donné par le spectre sis HU Le maximum se déplace à
520 nu dans les deux der
niers tubes « 7 0,5 Œ 48 Sue 550 00 65e
À en “
AS EPL EL rie 500 Si. ce
Pr £41 MN AU?
FIGURES 2I , Spoctres obtenus par les éfations des chr'matographies d’ urine seule ( à gauche) ct dt urine + acide indol=acétique (àdroite) . On retrouve des deux côtés Les mêncs phénomènes , Seuls les naxima sont plus élevés du cô= té où se trouve Lf acide äindol=acétique ,
SEAT, | ed … PAS
0} ui) /n Lu 4s 05 % 4] 0,3 23 “is D A A nt dE | si us 45 An Li Ne Au “. 450 oo fo À, ee
FIGURES 22 . Spectres obtenus par les élutions des chromatographies d'urine seule (à gauche) et dt urine + acide indol=acétique (àdroite) , Mêônes obsciva tions que pour Les figures ?2I »
de
es
4 Et à Na
Nous avons pu ainsi comparer Los élutions obtenues avec 1! urine pu= re et l! urine additionnée d' acide indol=acétique, L'étude des deux sés ries de spectres de la figure 21,page 78 montre que nous retrouvons dans les deux ae, avec ct sans acide indol-acétique, les mêmes phénomènes, mais avec plus d' intensité 13 où se trouve L' acide indol=acétique e La coloration commence à apparaître au troisième tube dans Les deux Cas +
La plus forte concentration en acido indol-acétique, est atteinte au 4° tube à partir du début de 1! élution ,
On note toujours Le déplaccnent du maxirrum vers 520 NH» EVOC TONe forcement de ce maximum , dans Le cas où nous avons ajouté 1! acide indol=acétique «
Un deuxième essai a été fait dans les mêmes conditions et nous
montre les mêmes résultats, représentés par les deux séries de courbes
de la figure 22,page 78 .
eu
Cogclusion . Nous avons pu obtonir par élution d? une chromatos :: graphie dt urine pure, une courbe superposable à celle d'° une solution dt acide indol-acétique M/I0,000 comme le montre les spectres de la figure T2, page 68, |
IL est difficile de pæler de maxinur strictement fixé à 510 np puisque 1! acide indol=acétique lui=même,on solution pure, donne une réaction qui présente des naxima oscillant entre 500 et 520m ec
De plus, les élutions de 1! acide indol-acétique sont simultanées,
que nous ayons affaire à 1! acide indol-acétique pur, à 1! urine pure
ou à celle où nous avons ajouté de L' acide indoleacétique , Dans ce der= nicr cas, 1! acide indol-acétiquo ajouté renforce , sans déformer, les courbos donhécs par 1f urine pure , Dans ‘tous les cas, nous remarquons donc :
a) Ltapparition de l'agide indol=acétique au 20° ce c! est-à-dire au 3° tube + b) La plus forte concentration de 1! acide indol-acétique atteinte au 4° tube, du 30° au 40° oc de 1! élution ,
na) Un déplacenent du maximum vers 520 mp dans les tubes suivants «
Nous nous trouvons donc sûrement en présence df acide indol-acé=
tique dans les élutions de 1? urine, .
4* / Fixation de 1! indol et du scatol sur La Déscidite, en so lution et ajoutés à 1! urine ,
Nous avons étudié les cas du scatol et de 1! indol, pour sf assu= rer qu'ils ne troublaient pas la recherche de 1! acide indol=acétique 4 a) En solution pure .
I ) Scatol . Le scatol,en solution puro,après action du réactif CH + CLFÉ Eee ayant un maximum à 470 ru « La coloration est rouge=orangée très vive . La donsité optique à 470 mp est de I, 8I pour une solution M/I000 »e Le spectre est représenté sur La figure 23, page 8I , ;
Nous avons fait passer une telle solution sur I æ. de résine et après 1* élution par 1! acide chlorhydrique M/I0, nous avons fait a réaction colorée . Le spectre se trouve complètement transformé ( voy. fig. 23,page 8I ) IL descend faïblement à partir de 450 mp, est aplati
FIGURE 23 dog a Spectres donnés par
le scatol avant chro= matographic (spoctrel) et après chronatographiec et élution pæ HCL 45 (spectre II)
La courbe du spectre IT est aplatic ct ne
présente plus de maxi
TU
450 $0e 550 éeo Ve
LR
se
= 82 = et ne présente plus de maximum à 470 mp . La coloration est devenue brune,
II ) JIndol . Nous avons fait passer une solution d' indol à 10° sur La Déacidite , L'indol semble être très faiblement retenu par La Déa= cidite, car nous le voyons apparaître à la sortie aussitôt,pendant la chronatographio . Le spectre n'est pas modkfié , ( Fig, 3, page 22] «
b) Ajoutés à 1! urine ,
Des essais comparatifs ont été faits avec de l'urine pure et avec la mêne urine additionnée soit df indol,soit de scatol . Nous avions ajouté I mer. df indol à IOO cc dt une part, ct 1,3 ner. de scatol d! autre part à 100 autres ce de la même urine .« Enfin 100 ce de la même urine étaient passés tels quels sur la résine ., Les trois élutions ont été faites de la même manière avec 1! acide chlorhydrique M/I0 et divisées en fractions de J0 co.
I ) Scatol . Dès le premier tube, le réactif C1H + CL Fe donne une coloration brune, qui donne le spectre I de la figure 24,page 83 ressemblant au spectre de sertie du scatol ; puis cette coloration dimi= nuc dans Les 2 tubes suivants ( spectres II et III ) . Le spectre IV mon= tre qu'il y a probablere nt un mélange dt un peu de scatol et df acide indol=acétique , La courbe ost encore aplatie, mais elle est plus relevée que les précédentes, à cause de 1! æide indol=acétique qui commence à sortir . Dans les tubes suivants, la coloration est nettement rose et les spectres correspondent à ceux de Lf acide indol=acétique 4
On voit dans 1? étude de ces spectres,qu'il ne peut y avoir confu
456 | Fee $£e Évg &So À eu M jo FIGURE 24, Spectres donnés par les différentes fractions de 1' élue tion dt urine additionnéc de scatol , Le prenier spectre correspond au prenicr tube de 1! élution dont la co= loration était brune , Ensuite la concentration en scatol décroft et ltacide indol=acétique commence à sortir . Les dernicrs spectres corres= pondent à ceux donnés par 1! urine puro 4 :
LC spectre IV montre qu'il y a encore un mélange de scatol et dt acide
indol-acétique + La courbe est encore aplatic, mais elle est plus role
vée que Les précèdentes à cause de 1! æide indol-acétique qui commence
à sortir e
