REACTIONS FERMETTANT DE LE DOSER
Lt'acide indol=acétique répond à le formule suivante : À.
met Nas —ÉHys € COM
CH
Son poids moléculaire est de 175,
ses cristaux sont assez peu solubles dans 1! eau , mais très solu bles dans les solutions alcalines ,
L'acide indol=acétique est soluble dans 1! alcool, 1! éther, le chloroforme, Le butanol ,
Son point de fusion est de I64°=165° C,
Dans l'éther , . = = 3°8
Nous allons maintenant passer en revue quelques-unes de ses pro — priétés qui pourraient éventuellement servir à le caractériser ou à le
doser . Elles sont soit physiques, soit biologiques , soit chimiques à
1°/ Etude du spectre de l'acide indol-acétique dans 1! ultra-violet.
Nous avons étudié le spectre dans 1! ultra-violet de deux
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Figure I. Spectres d'absortion dans l'ultra-violet de 223 mp à 305 my de l'acide indol-acétique :
memes EN Solution alcaline aqueuse mm“m» on solution dans le butanol
On observe un minimum à 245 ma et un maximum à 280 Te
solutions différentes d' acide indol-acétique , l'une dans la soude N/I0 , l'autre dans le butanol ,
Les spectres ont été étudiés de 223 mp à 305 M +
Dans les deux cas , comme le montre la figure I, page I6 les cour beë sont superposables , On remarque une brusque descente de 223 rap jus= aie 245 my , un maximum à 280 ma et une nouvelle descente jusqu'à 305 MH
Connaïssant Les quantités d! acide indol=acétique, entrant dans les
deux solutions , nous avons pu calculer ue pour 280 Ty °
En solution aqueuse , DA = 827
En solution dans le butanol , il est peu différent .« Le maximum se trouve plutôt à 28I my + pa = 329 «
Toutefois ces intensités dt absorption sont trop faibles pour être retenues en vue df' un dosage 4
D'autre part , il existe dans Les milieux biologiques , beaucoup d' autres corps ayant aussi un maximum d' absorption dens cette zone du spectre , comme La phenyl-alanine et la tyrosine à 280 mp et le trypto= phane à 270 np +
Aussi nous ne retiendrons pas cette méthode pour doser l'acide in-
dol=acétique « 21 Te test LVENA,
Le test Avena consiste à mesurer la courbure du colcoptile d! a —
voine sous l! influence d'un petit dé d'egar-agar chargé en substance
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MAIRE ': ee Us
aotive, dans des conditions déterminées de tompérature, d! humidité ct d' éclairement ,
Pour oxprimer quantitativomont los résultats obtenus, KOGL (6) a défini l'unité-avoine : Avona-Einhoit ( AE) . C'est la quantité de pro duit provoquant à une température de 22-25°, dans une humidité de 92% une déviation de 10° du coléoptile d'avoine décapité , en l'ospace de 2 heures le produit se trouvant dans une petite plaque d'agar-agar Gt un volume de 2 X2 X 0,5 mm,
Liangle est mesuré au rapporteur sur une photographie du coléoptile ,
Ltavoine utilisée est la varièté : " la victoire " , Les graines sont ramollies dans 1! cau et mises à germer sur du papier-filtre à la chambre noire à 23° , Après germination, les germes sont placés sur des supports en verre pour la culture dans L! eau, |
La première décapitation a lieu une heure avant l'essai , suivie
d'une deuxième section aussitôt avant l'application de la petite plaque d'agar=agar «
On fait des essais-témoins avec des solutions pures d'acide in dol=ncétique et on compare les résultats obtenus avec les dés d'agarmn= gar contenant la substance à étudicr .
Discussion , Le test Avena est une méthode assez précise qui est intéressante, quand on veut se rendre compte de l'action phytohormonale d'un corps ou d'une solution inconnue , mais elle a le grand inconvénient de ne pas être spécifique et de répondre positivement avec des corps dif férents comme l'acide indol-3-pyruvique et le scatol qui se trouve jus
tement présent dans l'urine
A ue à
= ÏJ9 +
3° / Réaction colorée avec SO,H, + NO,Na
Ltacide indol=acétique donne avec le nitrite de sodium,en présence d'un acide minéral fort ( CIH ou s0,H, ) une coloration rose Cette coloration s'obtient à froid et passe dans le butanol , L'étude du spectre présente un maximum à 540 The (Figure 2, page 20°}.
Nous avons employé de l'acide indol=acétique à La concentration de mi À ,» dont nous avons pris 2 ce que nous mettons avec : 0,T ce de NO,Na à IS et 0,5 ce de 50 E, pur d'une part et
0,Icc de NO, Na à I % et I cc de S0,H, d' autre part .
La coloration rose passe dans 3 cc de Butanol .
Cette réaction a plusieurs inconvénients :
a) Le réactif se conserve mal et doit toujours être récemment PrÉPATÉ «
b) La coloration rose ost assez fugace ,
c) La comparaison avec la réaction suivante au perchlorure de
Fer, pour des concentrations égales en acide indoleacétique, montre un spectre beaucoup plus étalé avec le nitrite do sodium «
La réaction est nettement moins accusée «
4°/ Réaction colorée avec C1H + ci,Fe «
Une solution d'acide indol=acétique donne avec l'acide chlorhydrique,additionné de quelques gouttes de perchlorure de Fer, après un chauf=
fage au bain-marie bouillant, une coloration rose passant dans le
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FIGURE 2 -+ Spectres des colorations obtenues :
mL
en JT par la réaction au nitrite avec IT cc de S0,H, en IL par ia réaction au nitrite avec 0,5 ce de : S0/H»
en TITI par la réaction au perchlorure de Fer
Le maximum est à 540 mu pour les réactions au nitrite et 510 m1 pour da réaction au perchlorure de Fer ,
Tes concentrations en acide indol-acétique sont égales dans les trois cas,
les spectres sont nettement moins accusés dans Le cas du nitrite ,
5 l PAU AN " ré ;
= I = butanol 4 Cette coloration, lue au spectrophotomètre de Beckman présente un maximum à 5IO mn
Cette réaction a déjà été employéeprécédemment par J, LEFEVRE (31) pour déceler l'acide indol-acétique dans les végètaux , ainsi que par A. BERTHELOT et Mello AMOUREUX (52) . |
Cette réaction est très sensible ,
La coloration est stable et passe dans certains solvants organiques. Le solvant employé au cours de nos recherches fut toujours le butanol ,
C'est cette réaction lue au spectrophotomètre de Beckman que nous avons choisie pour reconnaître et doser l'acide indol-acétique pendent nos recherches ,
Avant d'étudier les différents facteurs qui interviennent dans cet te réaction, nous en avons vérifié la spécifité en analysant les colora -
tions obtenues avec le scatol et 1! indol .
Comparaison des colorations obtenues avec l'indol et le scatol
L'indol et le scatol sont des corps très voisins de ltacide indolacétique,se produisant au cours du métabolisme du tryptophene et.existant dans l'urine , Aussi avons-nous étudié les colorations fournies par ces
corps avec le réactif C1H + Er .
a -/ Scatol Le scatol donne une coloration rose . Le maximum est très nette ment déplacé vers les courtes longueurs d'onde et se trouve à 470 mp
(voir Fig.5, page 22 )
Les essais ont ét6 faits avec 0,I ce , 0,3 ce et 0,5 ce de réac-
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Re SE ON VER SET Le D Ge PLU CS VUS Per vo h$o fo0 S$o eo So À em np FIGURE 3 . Spectres des colorations données avec le réactif C1H + CL, Fe par le scatol , l'indol et 1f acide indol=acétique , avec 0,I — 0,5 et 0 082 s , Le scatol a le maximum à 470 mp dans les trois
CAS + L'indol a le AE à 490 my et une allure de courbe différente de
l'acide indolwacétique dont le maximum est à 510 mi
NT Doit
et PT
