TECHNIQUE EMPLOYÉE

Milieu utilisé. — Le milieu utilisé a été la gélose peptone à 2 % de peptone et 3 % de gélose, de pH = 7,2.

Technique d'ensemencement. — Pour ensemencer le germe sur les géloses inclinées, j'ai constaté qu'il était préférable de déposer le matériel bactérien dans l’eau de condensation, puis, par un mouvement d’inclinaison du tube, de répartir cette suspension sur le milieu. L’ensemencement de la gélose au fil de platine, aurait l’inconvénient de faire retrouver sur les lames colorées, des spores, qui, enfermées dans des particules de matériel apporté, n'auraient pas été mises en contact avec le milieu nutritif. De ce fait, elles seraient restées intactes, ce qui constituerait une

cause d'erreur. Les tubes sont ensuite fermés au coton, flambés, et mis à l'étuve à 37° C.

Mise en évidence des spores. — J'ai employé, pour mettre les spores en évidence, la méthode d’Alessandrini. Je vais la rappeller sommairement. Les préparations étalées au fil de platine (2) sont fixées à la platine chauffante, deux minutes à la température de fusion de la résorcine.

On fait subir aux préparations l'action de la fuchsine phéniquée de Ziehl au bain-marie à 80° C. environ, pendant 10 minutes. Les préparations sont alors traitées par la solution de sulfite de Na à 2 pour mille qui décolore les plastides en laissant colorées en rouge les spores.

(1) Comme d’ailleurs le Bacille du charbon et d'autres germes sporogènes, (2) Stérilisé à la flamme.

RAA \

Après lavage à l’eau distillée, les préparations sont appliquées sur des

feuilles de papier buvard très fin (1) puis recouvertes de solution de vert

malachite à 1 % pendant deux minutes. Après ce laps de temps, on re-

jette ce dernier colorant et on lave les préparations, puis on les sèche

rapidement à 37° à l'abri de l'air. Les spores apparaissent en rouge rubis sur le fond vert des plastides.

RESULTATS OBTENUS SPORULATION

Il est à remarquer que, dans les conditions d'expérience où je me suis placé, je n'ai constaté chez Bacillus lactis niger GoriNr Ra et S aucun phénomène de sporulation. L'étude de ce phénomène se limitera donc à la seule squche Rb.

J'ai étudié, heure par heure, le comportement de la culture mise à - l’étuve à 37 °C., et j'ai fait les observations suivantes.

Après onze heures et demie de séjour à 37° C., les lames colorées par la méthode d’Alessandrini ont présenté des plastides colorées en vert avec des extrémités ayant pris plus énergiquement le colorant, comme il a été dit précédemiment, tandis que trente minutes plus tard, le centre de ces plastides était coloré en rose. Il s'agit donc là de sporanges. Les extrémités sont colorées en vert ou en rouge violacé. Chez certaines plastides, l'une des extrémités a déjà disparu, ce qui est le premier acheminement vers la spore libre. Après treize heures, on ne trouve guère, à côté d’un certain nombre de plastides intactes, que des spores libres colorées en rouge rubis.

J'ai effectué, à titre de comparaison, l'étude de la sporulation chez Bacillus megatherium (2) et chez Bacillus mesentericus (3). Mes observations ont porté sur les souches Ra et Rb de ces deux Bacilles. Avec ces quatre souches on observe des faits analogues à ceux observés avec la souche Rb de Bacillus lactis niger Gorinr. Ainsi elles présentent en douze heures le même aspect de bâtonnets sporogènes, et en onze heures

(1) Pour éviter les phénomènes de dessiccation et enlever néanmoins l'excès de colorant rouge qui a pu persister.

(2) Bacillus megatherium De BarY (souche CaLMETrE).

(3) Bacillus mesentericus niger Lunr,