CHAPITRE I

Etude Chimique du Muguet

Cest dans CARTHEUSER (1) (1745) qu'à notre connaissance, on trouve mentionnée pour la première fois l'existence d'un principe immédiat retiré du Muguet. Ce principe qualifié de « sel essentiel aigrelet » aurait été obtenu par LEmBACH au moyen de l'alcool et des alcalis. De vagues renseignements concernant sa préparation sont indiqués dans FERREIN (2) (1770).

« Ce sel subtil, essentiel, aigrelet, se manifeste en fai- « sant infuser le Muguet pendant quelques heures dans « l’eau simple et l'esprit de vin et en versant sur les dissolu- « tions filtrées une liqueur alcaline. On voit tomber au fond « des liqueurs de petits grains nitreux, salins qui prennent « par évaporation une apparence cristalline ».

HERBERGER (3), en 1835, isole par distillation, le prin eipe odorant des fleurs.

Wazz (4), en 1844, aborde d’une façon plus scientifique le chimisme de la plante. Il isole deux principes immédiats, (auxquels il donne le nom de Convallamarine et de Convallarine) par un procédé peu différent de celui qui est encore employé de nos jours et que nous résumons en quelques lignes :

(1) CarTHEUSER Matière médicale, 1145.

(2) FerreiN. Matière médicaie, 1110.

(3) HerserGer. Rep. Pharm. 52. p., 397-1835.

(4) Wazz. Jahr. Pharm. t. VII p. 281, t. VIlIp., 18-1844,

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La plante est épuisée par de l'alcool de densité 0,84; la teinture obtenue est précipitée par de l’Acétate de Plomb. Après filtration, l'excès de plomb est éliminé de la liqueur par HS et l’alcool chassé par distillation La solution ainsi concentrée abandonne au refroidissement des cristaux de Convallarine qui sont traités par l’éther pour séparer la résine et la chlorophylle. Les eaux-mères légèrement concentrées puis traitées par le tanin laissent déposer la Convallamarine à l’état de tannate. Ce dernier est décomposé par l'hydrate de plomb; la Convallamarine mise en liberté est extraite par de l'alcool étendu.

En 1865, ST. MARTIN (1) apporte une nouvelle contribution au chimisme du Muguet. Il y est amené incidemment à propos d'une expertise toxicologique qui lui fut confiée dans les conditions suivantes : Un empirique avait prescrit à un malade «3 verres à liqueur par jour d’une tisane préparée avec une poignée de fleurs sèches de muguet des bois pour 1 litre d’eau bouillante ». L'emploi de cette tisane détermina des accidents intestinaux assez graves pour nécessiter l'intervention d’un médecin qui invita ST.MaRTIN à en rechercher la cause. Ce dernier opéra sur des fleurs fraîches et sur des fleurs sèches qu’il traita successivement par l’éther, le sulfure de Carbone et le chloroforme. Il sépara ainsi une matière colorante jaune, une huile essentielle, de la cire, du mucilage et deux principes nouveaux : l'acide maïalique et la maïaline . Cette dernière substance, d'après LAIGRE (2), n’a pas été retrouvée par les

(1)Sr-MarTiN. Principes médicamenteux du Convallaria maïalis. Union pharmaceutique. 1865, p., 266.

(2; Laicre. Thèse médic. Paris 1903, p., 144,

hs.

différents auteurs qui se sont occupés de cette question.

HarDY (i) en 1882, isole dela Convallamarine à l'état amorphe par la méthode de DRAGGENDORFF (2) en traitant l'extrait aqueux acidulé par l'alcool, le chloroforme et l’alcool amylique ».

La même année, TANRET (3) reprend la question de l’extraction et de l'isolement des principes actifs en complétant et en précisant tous les travaux antérieurs. Il apporte au procédé de WaLzz d’après lui « fort long et fort incommode » quelques modifications heureuses.

C’est ainsi qu’il remplace l’Acétate de Plomb par le s/- Acétate de Plomb, qu’il précipite l'excès de Plomb par Pacide Sulfurique dilué et que le tanin est ajouté à la solution maintenue neutre par des additions ménagées de Carbonate de Soude. Il décompose le tannate de Convallamarine par l’oxyde de zinc et redissout la Convallamarine dans l'alcool à 90° pour la séparer « des sels qui sont entraînés quelquefois avec le précipité de tannate ».

LANGLEBERT (4) pour l’extraction de la Convallamarine préfère utiliser l’extrait aqueux de plante entière qui, d’après lui, ne contient que de la Convallamarine. Il emploie le mode opératoire de WAazz, mais décompose le tannate par un lait de chaux.

Pour LAIGRE et pour ROSTAING (5), le procédé de TANRET serait de beaucoup supérieur à celui de LANGLEBERT : « la

(1) Harpy. Bull. de Thérap. 1882.

(2) Draccenporrr. Beïtrage zur gerichiligen chemie À, 4, 1871 p., 44. (3) Tanrer. Bull. de Thérap. 1882.

(4) LanczeBerT. Bull. de Thérap. 1884.

(3) RosraInG. Valeur lhérap. du muguet des bois, Thèse méd. Lyon,

Convallamarine obtenue par TANRETr semble plus pure et de composition chimique mieux définie ».

Il est, en effet, difficile d'admettre que la Convallamarine de LANGLEBERT soit exempte de Convallarine. C’est ce que laisse pressentir ce dernier, quand il écrit: « Nous basant pour la préparation de la Convallamarine sur sa solubilité dans l’eau, nous avons préparé un extrait aqueux de plante entière ésolant autant que possible la Convallarine ».

Les laboratoires DAUSSE (1) pour le dosage des glucosides totaux dans l'extrait fluide de Muguet utilisent sensiblement le procédé de TanrerT. Comme ils n’ont pas en vue la séparation des deux glucosides, ils les précipitent globalement dans la liqueur réduite au 1/5° et non filtrée, par du tanin. Le produit trituré avec de l'hydrate de plomb est desséché, introduit dans la douille d’un Soxhlet et épuisé par de l'alcool à 60° qui dissout les deux principes. On évapore et on pèse lerésidu qui est de couleur jaunâtre.

Tels sont, jusqu'à présent, les procédés dont on a fait usage tant pour la séparation des glucosides que pour leur dosage ; extraction par épuisement, purification à l’aide de combinaisons mal définies. On est bien obligé de reconnaître l’imperfection et l'insuffisance d’une pareille méthode de dosage ; mais en matière de glucosides, c’est à peu près tout ce dont on dispose. Les dosages colorimétriques, lorsqu’ils sont susceptibles d’être pratiqués n’offrent guère plus de précision.

Nous avons préparé de la Convallamarine à partir dela

(1) Dausse. Essais sur nos préparations galéniques. 1908,

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plante elle-même en suivant pour la première partie de l’opération, le procédé indiqué par DAUSSE ; puis le mélange des deux glucosides est dissous dans l'alcool à 95°. On évapore à sec ; on reprend le résidu par l’eau distillée froide qui dissout seulement la Convallamarine. Après repos et filtration, la solution aqueuse est évaporée dans le vide et le résidu de couleur jaune d’or est à nouveau purifié par plusieurs dissolutions dans l’alcoo! à 90°.

La Convallamarine obtenue ne diffère des échantillons que nous nous sommes procurés dans le commerce, ni par sa coloration qui est jaune pâle, ni par son aspect demicristallin, demi-amorphe, ni même par ses réactions.

Les premiers renseignements sur les propriétés physiques et chimiques des glucosides du Muguet ont été fournis par Wazz qui en a donné la composition centésimale et la formule chimique. Ils furent dans la suite complétés par TANRET (1), LôsCe (2), Merck (3). Des données fournies par ces différents auteurs, il résulte que :

La Convallarine (C%* H% Of) cristallise en prismes rectangulaires droits, presque insolubles dans l'eau et dans l'éther, solubles dans l’alcool. En solution alcoolique elle a une saveur âcre. Elle fond à 100°, puis se décompose. Sous l'influence des acides dilués, clle se dédouble en glucose et en convallarétine. La solution aqueuse mousse abondamment; elle a une odeur particulière qui rappelle assez bien celle du dalap.

La Convallamarine (C* H'* O*) est un mélange de

(1). Tanrer, Bul. de thérapeutique, 1882, p. 179, (2). Losca. In Czareck, Biochemie der Pflanzen. (3). Mercx's JauresBericur, 1911, Darmstadt,

principes amorphes et cristallisés (1), solubles en toutes proportions dans l’eau, dans l'alcool ordinaire et dans l'alcool méthylique. Elle est insoluble dans l’éther, le chloroforme et l'alcool amylique. Elle dévie fortement à gauche le plan de polarisation de la lumière avec un pouvoir rotatoire en solution alcoolique de A — — 55°.

Elle ne réduit pas directement la liqueur de Fehling. Elle le fait seulement après ébullition avec les acides étendus par suite de son dédoublement en glucose et en Convallamarétine.

L'acide sulfurique concentré dissout la Convallamarine en donnant une solution brun-noirâtre. Avec SO‘ H° monohydraté, on a une solution rouge-brun qui devient violette au contact de l’eau et de l'air chargé d'humidité. Elle disparaît par addition d’eau en excès.

Depuis cette date, peu de renseignements ont été donnés sur le chimisme du Muguet.

VorocEx et VONDRACEK en 1903 (2). isolent du Muguet du galactose-d. Pour J. LINDNER, (1915) (3) la convallarétine serait un dérivé du benzol, qui, associé au glucose-d, forme la convallarine. Ce dernier glucoside aurait un certain rapport avec les saponoïdes (opinion déjà émise par PouCHET et CHEVALIER (4) en 1908.) En 1920, STRAUSKY (5) a caractérisé l'acide chélidonique dans le précipité obtenu avec lacétate de Plomb.

(1). Husemaw. Die Pflanzenstoffe, Berlin, 1882, p. 1041.

(2) Vorocerk uND VonDracex, Ber. Chem. Ges. 1903, 36, p. 4.372. (3). J. Taxoner. Monal. Chem. 1915, 36, p. 257.

(4). Poucurr Er CHEVALIER. Nouv. remèdes, 1903.

(5). Srrauskv. Arch. der Pharm, Berlin, 1920, 258, p. 66-69.

En dehors de ces quelques renseignements, il ne semble pas que l’on soit revenu sur les propriétés physiques et chimiques des deux glucosides ainsi que sur leur préparation ; si bien que les quelques pharmacopées qui mentionnent la Convallamarine (MexIQUE, 1890 ; GRÈCE, 1909), lui donnent à peu de choses près les mêmes caractères que ceux fournis par TANRET : formule, solubilité et jusqu’au procédé de préparation.

Pour compléter ces données relatives au chimisme du Muguet, il nous faut citer SCHLAGDENHAUFFEN et REEB qui donnent en 1896, quelques réactions différentielles de la convallamarine, de la coronilline, de la strophantine et des digitalines. RztcHARD (1) en 1911, s'applique à donner un grand nombre de réactions différentielles des deux glucosides; mais, étant donnée la difficulté sinon l’'impossibilité d'obtenir chaque glucoside dans un état de pureté suffisant, on est en droit de se demander siles réactions obtenues sont rigoureusement spécifiques. Il est d’ailleurs frappant de constater que les différences de colorations, signalées par l’auteur, sont assez peu tranchées.

Quoi qu'il en soit, RetcHARD attribue à ces deux glucosides des propriétés réductrices. Ils réduiraient l'iodate de Na à l’état d’iodure déliquescent ; le nitrate basique de Hz ; le sublimé ; l'azotate d'argent ; le chlorure stanneux.

Toutes ces réductions se traduisent par des réactions colorées ou des précipitations ; elles seraient plus rapides avec la convallamarine. L'auteur signale encore un grand

(1). Reicuaro. Beïtrage zur keuntnis der glykosidreaktionen (Convallarin und Convallamarin). Pharm. Zentr. Halle, 1911, p. 483.

nombre d’autres réactions qui ne méritent guère être mentionnées.

Réaction colorée avec l’acide sulfurique

De toutes les réactions colorées, la plus généralement citée dans les traités classiques de pharmacie, c’est la réaction à l’Acide Sulfurique. Signalée par Wazz, puis précisée par TANRET, nous l'avons reprise minutieusement afin de fixer les conditions dans lesquelles on l’obtient avec le plus de netteté.

Nous avons opéré sur 4 échantillons de Convallamarine (trois provenant du commerce, et un préparé par nous au Laboratoire) sans préjudice des traces de Convallarine ou de produits de dédoublements qu'ils sont susceptiblesderenfermer ; nos tentatives en vue d'obtenir un produit cristallisé étant restées sans résultats.

1 Mode Opératoire.

On dépose 5 mmgr. de Convallamarine sur 2 gouttes de SO: H? concéntré, 1! se développe une coloration jaune-brun qui avec le concours du temps et de l'humidité passe au rose violacé et au bleupâle.

Il est nécessaire que l’acide sulfurique soit à un degré optimum d'hydratation, Elle ne se produit pas sous un dessicateur, et pas davantage avec un acide dilué. L'exposition ménagée du mélange réactionnel d’acide sulfurique et de Convallamarine à l'air saturé de vapeur d’eau (voisinage d’un B.-M. en fonctionnement) nous semble la meilleure façon d'opérer. Loin d’être indifférente, la température accélère la réaction ; l’optimum semble devoir être voisin de 80°.

Ces faits laissent à penser que la coloration finale résulte d’une réaction entre l'acide Sulfurique et un produit résultant de l’hydrolyse sulfurique.

OU

2eme Mode Opératoire.

Dans un tube à essai, on introduit 0 gr. 0 de Convallamarine et 4 à 6 gouttes de SO4H?. On plonge le tube dans un bain-marie à 75°-80° pendant une à deux minutes ; on étale le contenu sur les parois du tube par des mouvements appropriés. En ajoutant graduellement quelques gouttes d’eau, le mélange devient successivement rouge-tomate, rouge-clair, rose-violacé, puis bleu-ciel. Cette dernière couleur frès fugace passe rapidement au brun avec un léger excès d'eau.

3eme Mode Opératoire.

Dans une capsule de porcelaine, on dissout 0 gr. 01 de Convallamarine dans 2 cm° d'alcool à 95° on ajoute 4 gouttes de SO“ H? concentré ; on évapore doucement au bain-marie en étalant le mélange

sur les bords de la capsule. Il se forme un enduit jaune-pâle qui vire au rose-violacé puis au brun (4).

Avec une solution alcaline d’Acide Picrique (2) la Convallamarine donne à froid une coloration orangée qui est maximum au bout de 20 minutes environ.

Bayer a signalé cette coloration à propos de la digitaline. Elle lui semble commune à tous les glucosides cardiaques. Il l’a obtenue avec la digitaline, les strophantines et même avec des glucosides très différentes : amygdaline, arbutine, condurangine. Tiffeneau l’a réalisée avec l’'Ouabaïne et nous-même avec la Convallamarine.

(1). Cette manière d'opérer, la plus nette, la plus rapide est exactewent celle qui est employée pour caractériser la loganine dans les préparalions de Strychnées. La coloration vivlacée a sensiblement la même nuance ; mais l’analogie de teinte n'existe qu'avec la convallamarine en nature, Aucune des préparations extractives du Muguet ne la fournit alors que celles des Strychnées la donnent d'emblée,

(2)Réactif de Bayer (in Schw. Apoth. Zeitung, LV1,11,1918) est formé de volumes égaux de solution à 1 6/0 d'acide picrique dans l’alcool à 95° et de solution aqueuse à 10 0/0 de soude caustique exempte de potasse.

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Pour BALJET, elle serait due plus particulièrement à une fonction lactonique dont la présence est constante dans

les glucosides cardiaques.

Réactions fermentaires d’hydrolyse et d’oxydation dans le Muguet

Dans le domaine biochimique, les acquisitions expérimentales concernant le Muguet semblent des plus restreintes. De tous les ouvrages que nous avons compulsés y compris CZAPECK (Biochemie der Pflanzen) aucun ne mentionne de recherches à ce propos.

Cependant le Muguet n'échappe pas à la loi commune. Son fonctionnement vital, comme celui des autres plantes exige l'intervention d’un certain nombre de diastases.

11 n’a pas été dans nos intentions d'aborder ce côté de la question à cause même de la généralité qu’il présente. Mais comme nous avons donné à entendre, sans crainte d’être à côté de la vérité, que l’activité du Muguet était, comme pour tous les végétaux à glucosides, sous la dépendance de réactions fermentaires hydrolysantesouoxydantes, nous avons tenu à montrer que ces réactions se produisent dans le Muguet ou sont au moins possibles.

Nous sommes seulement partis de cette idée connue, formulée récemment encore par HERISSEY (1) que « fréquemment il existe dans les végétaux, à côté d’un glucoside déterminé, un ferment soluble capable d’hydrolyser ce dernier » et même — ajoutons-le — un ferment oxydant capable d'agir sur les produits de dédoublements.

ff Hgrissay. Les Glucosides. Bul. de Ja Soc. chim, de France, avril

Sn D Recherche de ferments bydrolysants

Pour nous assurer de l'existence de ferments hydrolysants, nous avons fait agir des poudres fermentaires obtenues avec le Muguet frais, sur des solutions de Convallamarine. Les poudres fermentaires, ont été préparées avec les différentes parties de la plante (fleurs, feuilles et rhizômes) et aussi avec la plante entière, en suivant la technique donnée par BoURQUELOTr et HERISSEY, et Se À he par BRIDEL (1) à propos des Gentianacées.

On à broyé au hachoir universel 50 gr. des organes précités ; la pulpe a été mise à macérer pendant 2 heures avec 250 cm d'alcool à 95°; après quoi on a essoré, lavé le précipité avec de l’alcoo! à 95°, puis avec de l’éther. Le produit a été finalement mis à sécher à l'étuve à 30°.

Les solutions de Convallamarine ont été faites à 2 0/0 dans l’eau thymolée.

À 25cm* de cette solution on a ajouté 0 gr. 50 de poudre fermentaire. L'expérience comporte 4 essais, correspondant aux 4 poudres fermentaires. Chaque essai comprend un témoin pour lequel le mélange a été maintenu une heure au Bain-marie à 100°. Les tubes d'expériences ainsi que les tubes témoins ont été abandonnés 7 jours dans une étuve à 32°,

Le degré d'hydrolyse du glucoside est mesuré par la quantité du sucre réducteur formé, à l’aide de la méthode de Bertrand.

Avec deux échantillons de Convallamarine les quantités

(2). Briez. Recherches sur les hydrates de Carbonne et les glucosides des Gentianacées, 1913 p. 108.

ner

de suere réducteur formé (exprimées en glucose) sont respeetivement pour 1 gr. de Convallamarine :

2 mixer. et 24 mise. avec la Poudre ferment. de fleurs

SR » et 79 » SSL » de feuilles SH » etST » >» » » » de rhizômes T8 » et 70 » > » » > de plante entière

Les tubes témoins n'ont accusé aucune mise en liberté de substances réductrices.

Ces expériences permettent de conclure à l'existence d'une diastase hydrolysante capable de dédoubler la convallamarine (1. L'émulsine s'étant montrée sans action sur une solution de convallamarine, la diastase hydrolysante doit être iei considérée comme spécifique, ou du moins différente de l’émulsine.

Des différentes poudres fermentaires essayées, c'est celle de Beurs qui à le pouvoir hydrolysant le plus faible, alors que la fleur est l'organe le plus riche en convallamarine.

Il peut y avoir là, un rapport de cause à effet qui mériterait confirmation.

RecBereBe des ferments Oxvdants

Pour la recherche des Oxydases, dans le Muguet, on a fait agir les poudres fermentaires précédemment préparées sur les réactifs habituels des oxydases ;

(4) On s'est assuré au préalable que la Convallamarine ne possédait par elle-mème aucune propriété réductrice. On s'est également assuré qu'elle étsit exempte de saccharose en la soumettant à l'action de l'invertine.

1) Teinture de Gaïac fruichement préparée ; 2) Solution de Paraphénylène diamine à 1 0/0; 3) Solution aqueuse de Gaïfacol à 1 0/0 ;

Nous n'avons obtenu directement aucune coloration, ce qui permet de conclure à labsence d’oxydase vraie.

Par contre, le mélange étant additionné de V gouttes d’eau oxygénée, nous avons observé; avec la teinture de gafac une coloration bleue intense prompte à 8e manifester ; avec la solution de gaïacol, une coloration jaune-brun ; avec la paruphenylène diumine, une coloration bleu-ardoise, Ces réactions sont l'indice de la présence d’une peroxydase ou oxydase indirecte, ou anaéroxydase,

Sans vouloir tirer de cette réaction qualitative plus de déductions qu’elle ne peut en comporter, nous croyons intéressant de mentionner pour l'instant que ces colorations se sont montrées maximum avec la poudre de feuilles et minimum avec li poudre de fleurs.