TECHNIQUE
Dans le chapitre précédent, nous avons indiqué sur quelles bases physiologiques repose la réaction de Friedmaan.
Nous étudierons ici quelle est la technique que nous employons et quelles sont les précautions qui nous paraissent utiles pour éviter toute cause d’erreur due à une question de manipulation où aux animaux employés.
1° Test de Krieäman
Nous étudierons successivement : les animaux, l’urine et enfin les diverses méthodes proposées.
A. Les animaux. — On emploie pour ce test, la lapine arrivée à sa maturité sexuelle; pour cela, on utilise des animaux ayant au moins 3 mois et pesant de 1.600 à 1.800 grammes.
En effet, quand on emploie des animaux d’un poids inférieur à 1.000 grammes, comme l’a fait remarquer Clauberg dès 1933, l'intensité de la réaction dépend du degré d’évolution des follicules.
La limite supérieure de poids n’est pas fixée, cependant on a intérêt à n’employer que des animaux de 1.500 à 2.000 erammes qui permettent d'éviter la cause d'erreur que pourrait représenter une lapine trop âgée dont les ovaires pourraient être séniles.
Adèle Brouha employait de préférence pour ses expériences des lapines vierges de 3 mois environ.
ENOQTE
Mais cette condition ne pouvant être toujours réalisée, on utilise en général des animaux isolés du mâle depuis (rois semaines au minimum.
On sait en effet, que chez la lapine, il n'y à pas d’ovulation spontanée, mais que celle-ci est provoquée par la copulation.
Malheureusement, dans les laboratoires, on ne possède pas toujours des lapines ayant pu être isolées assez longtemps; dans ce cas, il peut être fait simplement une laparotomie exploratrice pour examiner les ovaires.
Cette méthode qui permet d'utiliser n'importe quel animal présente en outre, l’avantage de supprimer toute cause d'erreur tenant à la présence de follicules hémorragiques préexistantes. Comme ce moyen nous permet d'éviter toute erreur, nous estimons que la laparotomie doit être faite systématiquement dans les cas de recherches médico-légales. Elle ne présente aucun ennui, étant bien supportée par l'animal; nous donnerons plus loin sa technique. Les auteurs français et étrangers n'utilisent en général qu'une seule lapine pour leurs recherches; cependant, Goldberger et Franck signalent que d’après leurs expériences, 9,4 % au moins des lapines seraient réfractaires à l’urine de femmes enceintes.
Aussi ces auteurs emploient-ils deux lapines pour chaque épreuve; cetusage leur donne desrésultats supérieurs à ceux des autres laboratoires américains n’utilisant qu'un seul animal, avec seulement 0,6 % d'erreurs pour 1.092 réactions.
L'emploi de deux lapines au moins nous parail done indiqué dans les cas où l’on désire une grande sûreté, ainsi que le recommandent déjà Lévy-Solal et J. Dalsace.
B. Urine. — L'urine employée pour la réaction doit être recueillie le matin, la femme n'ayant pas encore uriné.
Cette urine est la plus concentrée en hormones; Remlinger a constaté que des réactions faites avec l’urine de la journée et refaites avec l’urine du matin, étaient plus fortes dans ce dernier cas.
L'urine doit être recueillie dans un flacon stérile après une toilette vulvaire.
Le sondage qui parfois a été employé, nous semble devoir être rejeté car il peut provoquer une polyurie nerveuse qui, diluant lPurine en abaisse la teneur en prolan, pouvant ainsi troubler la réaction.
Cette urine doit être conservée dans la glacière jusqu’au moment de l’injection mais elle ne doit jamais être amente à une température inférieure à 00, À une température de + 29, on pourrait la conserver avec son prolan pendant près d’une année.
Dans les cas d'urine purulente on peut cependant faire la réaction. Il faut auparavant soit la traiter par la solution iodo-iodurée ordinaire (on ajoute cette solution jusqu'à coloration jaune de l'urine, puis après un certain temps, on la décolore avec de lhyposulfite de soude); soit, la traiter par l’éther. Si l'urine, au cours d’une première réaction a tué la lapine, pour diminuer sa toxicité, il suffit de la traiter par l’éther. Pour cela, on mélange à 40 cc. d’urine, 80 à 100 cc. d’éther, que l’on agite, puis on laisse reposer l’éther se séparant, on décante, et avant d’injecter, on enlève l’éther dissous dans l’urine par évaporation dans le vide ou à faible température sans dépasser 450.
Doses el nombre d'injections.
Les doses employées pour la réaction de Friedman, varient assez peu suivant les différents auteurs; au contraire, le nombre varie considérablement.
Bourg injecte 12 à 20 cc. d'urine en une seule fois et examine les ovaires, 48 heures après.
Goldberger et Franck, au contraire, font deux jours de suite, deux injections de 5 cc. d'urine. D’autres, 28 cc. en 4 injections.
Nous injectons 10 ce. d’urine deux jours de suite el nous examinons les ovaires 48 heures après ia première injection.
Malgré ces importantes variations de technique, les résultats obtenus ne varient pas beaucoup.
Toutefois, il nous semble qu'il est préférable de ne pas se
contenter d’une seule injection car les résultats sont peut-être modifiés par la loi de la sommation d'effets qui est si souvent vérifiée en biologie.
L’urine avant d'être injectée doit être légèrement chauffée pour éviter tout accident au cours de l'injection.
Dans les cas où une première expérience a montré une quanlité de prolan très élevée, donnant une réaction très intense, ou si l’on soupconne cliniquement une mole, on pourra faire un dosage quantitatif avec l’urine.
Pour cela, nous injectons trois lapines différentes :
laspremiere lc.
la seconde, 0,5 cc.
la troisième, 1/10 de cc.
C. Sang. — La réaction de Friedman a également été faite avec le sang; cette méthoce indiquée par T. K. Brown, nous paraît cependant moins importante au point de vue médicolégal, car la difficulté signalée dans l'introduction d'obtenir de l’urine et surtout du sang, ne permet pas cette réaction.
Technique de Brown : Le sang est recueilli par ponctions veineuse et placé à la glacière pendant 12 à 24 heures, le sérum frais éLant toxique. On injecte ensuite 1 cc. de sérum par 600 à 700 grammes de poids dans les veines de la lapine.
Technique de Servantie el Bex : On recueille par ponction veineuse, 10 cc. de sang environ dans un tube stérile. Ce sang est placé à la glacière pendant 24 heures; le sérum est décanté puis centrifugé; on prend 3 à 4 cc. pour une lapine de 1.500 grammes, on traite par 10 cc. d’éther en agitant plusieurs fois. L’éther est décanté ou évaporé à chaud (300). Le sérum est injecté dilué de 6 à 7 cc. de sérum isotonique. Examen des ovaires, 48 heures après l’injection.
D. Examen des ovaires. — Pour l’examen des ovaires, nous employons la laparotomie médiane, qui nous semble le procédé de choix; d’une technique simple, ne nécessitant pas un repérage exact des ovaires comme l’incisicn dorsale. elle permet, en outre d'examiner les ovaires en place sans être obligé de les extérioriser, évitant ainsi tout traumatisme.
Elle permet en outre, au cours d'unelaparotomie exploratrice, de vérifier si la lapine n’est pas pleine.
Méthode opéraloire.
L’anesthésie se fait à l’éther; l'animal est fixé sur une planche par les quatre membres à l’aide de liens.
a) Epilation au moyen d’une pâte;
b) Désinfection du champ opératoire, alcool iodé;
c) Laparotomie : incision de la peau sur une longueur de 4 à 5 em sur la ligne médiane, en débutant au niveau des mamelles inférieures.
Le plan musculaire est incisé au niveau de la ligne blanche ; on place de petites pinces sur les plans cutanés el musculaires permettant d'éviter l’extériorisation de l’intestin, si l’animal se réveille en cours d'opération.
Examen des ovaires : l’animal étant en position presque verticale, on écarte la vessie et l'intestin vers la droite découvrant ainsi l'ovaire gauche; puis vers la gauche découvrant l'ovaire droit. La position verticale perme! un examen plus facile en faisant retomber la masse intestinale vers le diaphragme.
Suture du muscle au catgut n° 0; suture cutanée avec des agrafes de Michel
Interprélation des aspecls des ovaires.
La réaction caractéristique est l’apparition de kystes hémorragiques sur les ovaires ; ces kystes se présentent comme de petites masses noires en saillie sur lovaire, d’un diamètre de 2? mm. environ.
Il ne faut pas les confondre avec les petits kystes séreux que l’on trouve fréquemment qui se présentent comme de petites masses transparentes, faisant légèrement saillie sur l'ovaire.
La réaction pour être considérée comme positive doit faire
apparaître des kystes sur les deux ovaires; dans les cas où
l’on ne trouve qu'un ou deux kystes plus petits et moins oros la réaction est douteuse et doit être refaite avec deux animaux auxquels on injecte des doses différentes. Nous utilisons dans ce cas 10 ce.el D ce. Pour que la réaction soit posi- Live, il faut trouver des follicules hémorragiques sur les ovai-
res des deux lapines.
Précocilé de la réaction.
La réaction ne se montre positive en général que trois semaines après la fécondation. Certains auteurs citent des résultats très précoces, souvent même avant tout retard des règles; cependant dans le cas où la réa:tion est faite très Lôt une erreur ne nous parait pas devoir être imputée à la réaction.
L'observation V, nous semble devoir rentrer dans ce cas.
J. Réactions de la Follieuline.
Se font sur des animaux castrés; deux techniques différentes ont 6Lé proposées :
À. La réaction sur des lapines castrées avec l’urine.
B. La réaction sur des rates castrées avec le sang.
A. Réaction sur la lapine castrée. -— Celle réaction est basée sur Phypertrophie des cornes utérines, due à la folliculine et à ét6 décrite récemment par Bourg. (6 avril 1935)
L'animal employé est une Japine castrée après une réaction de Friedman el laissée au repos pendant 4 semaines.
L'avantage trouvé à employer une lapine ayant déjà été utilisée pour un diagnostic de grossesse, est d'être sûr que celle lapine à déjà présenté un æstrus.
Technique : injecter 30 à 40 cc. d'urine dans la veine marcinale de loreille deux jours de suite. 48 heures après l’injec- Lion examen de lutérus. Congestion et hypertrophie sont plus où moins marquées.
La sensibilité de cette réaction est moindre que celle des rates castrées el répond à 500 ou 600 US par litre.
B. Réaction surla rate castréé. — La réaction sur la rate castrée se fait sur une rate adulte castrée. Il faut une rate d'au moins 120 grammes.
En effet, comme nous l'avons signalé dans notre chapitre précédent l’injection de folliculine provoque l’æstrus caractérisée chez la rate par l’apparition de cellules kératinisées.
Technique de la castration.
1° Les poils sont coupés dans les régions dorsale et lombaire.
20 Repérage du tracé d’incision.
Trait parallèle à la colonne vertébrale à un doigt environ, longue de 2? à 3 cm. au plus et dont l'extrémité postérieure arrive à 1 doigt des hanches; on écarte la peau.
A ce moment on aperçoit les muscles et leur aponévrose d'insertion. Incision au bord externe de l’aponévrose sur 1 à 2 centimètres. On écarte et on voit apparaître quelques petites masses de graisse que l’on résèque. |
39 Découverte de l'utérus et de l'ovaire.
Avec une pince on va chercher l'ovaire qui est Juste contre la paroi au fond de l'incision.
49 Ligature et ablation de l’ovaire.
50 Fermeture de l’incision musculaire par un ou deux points de catgut fin.
L'incision cutanée est suturée au fil de lin.
L'animal est endormi à l’éther.
Huit jours après, la-rate peut servir pour des dosages après vérification de l'absence de cellules Kkératinisées dans le
mucus vaginal.
Technique du dosage par la rale castrée.
19 Prélever avant le début des règles 40 cc. de sang par ponction veineuse.
20 Verser le sang dans une boîte de Pétri, dont le fond a été couvert de sulfate de soude anhydre pulvérisé (60 à 80 gr.)
NE
Mélanger peu à peu avec une spatule pour former une masse épaisse; pendant les 10 premières minutes on sèche la masse en battant continuellement avec la spatule, en évitant la formation d’une grande masse dure. La couche va se solidifier el se sécher; à ce moment on la sépare en petits morceaux avec la spatule pour la remuer plus facilement et ainsi Jusqu'à ce que la masse soit complètement sèche.
Cette opération dure 15 à 20 minutes.
30 Les morceaux secs sont pulvérisés dans un mortier.
40 La poudre qui en résulte, d’une couleur rouge marron, est placée dans un entonnoir à décanter. Pendant 10 minutes on fait passer dessus 100 ce. d’éther en agitant. L’éther qui surnage est séparé; le sédiment qui reste se traite de nouveau par 100 ce. d’éther que l’on sépare de nouveau et que l’on mélange avec l’éther obtenu antérieurement.
D0 Ces deux extraits éthérés se mettent dans une capsule de verre et on les évapore jusqu'à disparition de léther.
60 On prend le résidu de dessiccation el on le mélange aver 2e c. d’eau distillée pour fournir une émulsion.
79 1 cc. de cette émulsion est injecté à chacune des ? rates femelles adulles castrées sur lesquelles auparavant on a recherché le cycle vaginal et la complète disparition de cellules desquamées où kératinisées indicatrices du rut.
On fait l’injection en 3 fois avec un intervalle de 3 à 4 heures. Cette injection se fait à la base de la queue.
Laver la seringue avec 1/2 cc. de sérum physiologique el l’injecter.
8° Dans les 24 heures on fait un frottis du mucus vaginal
el un autre 48 el 72 heures après.
Cette recherche de la folliculine qui se pratique surtout dans le sang, ne peut donc être utilisée en médecine légale. Au contraire, la réaction suivant la technique de Bourg pourra peut-être être utile au médecin légiste dans les cas de
ménopause, comme nous le verrons plus loin.
CHNPPDR ET
