DE LA MÉTHODE DES COUPES M1CUOSCOPIQUES

La texture des ganglions s'étudie au moyen de coupes fcrès-minces, pratiquées dans différents sens au sein de leur substance. Pour obtenir des coupes instructives d'un organe, il faut employer différents procédés que nous allons éuumérer, puis décrire le plus brièvement possible. Il faut : 1° durcir l'organe; 2° le fixer clans une position déterminée; 3° le couper; 4° soumettre les coupes aux réactifs chimiques et les colorer. Enfin, dans un dernier chapitre, nous dirons quelques mots des moyens de conservation qui s'appliquent aussi bien aux préparations dilacérées qu'aux coupes microscopiques.

I. Durcir les ganglions. — Une coupe très-mince ne peut se faire que sur des organes durcis. Quelques ganglions offrent, lorsqu'on les prend immédiatement après la mort, une consistance assez ferme pour que le durcissement ne soit pas indispensable ; tels sont : le ganglion cervical supérieur du veau, les ganglions rachidiens de la plupart des mammifères, etc.; mais les ganglions du plexus solaire, les ganglions crâniens, etc., doivent nécessairement être rendus plus durs.

Jacobson parait être le premier qui ait utilisé l'acide Khromique pour l'examen microscopique du système feerveux; Hannover, qui avait étudié sous sa direction, en vulgarisa l'emploi. Pour durcir les ganglions ner-

veux, on commence par les plonger dans une solution très-légère, 1 partie d'acide chromique pour 100 parties d'eau distillée ; on renouvelle celte solution tous les jours en augmentant progressivement la dose de l'acide, jusqu'à ce qu'elle en contienne 4 ou 5 parties pour 100 d'eau. En trois ou quatre jours les petits ganglions sont assez durs pour être coupés; vingt jours ou un mois suffisent pour les plus gros. Quand on emploie l'acide chromique comme moyen durcissant, il y a un écueil à éviter, c'est de trop laisser durcir le ganglion qui devient cassant, à cassure granuleuse, et qui se pulvérise sous l'instrument tranchant: son tissu est comme brûlé par l'acide.

Au lieu d'acide chromique on peut employer le bichromate de potasse clans la solution suivante :

Eau distillée 380 grammes.

Bichromate de potasse. ... 10 — Sulfate de soude 2 —

M. Vulpian a signalé ( 1856 ) le perclilorwe de fer comme moyen de conserver et de durcir les pièces du système nerveux. Il conseille de commencer par une solution au 20me ou au 30rae, pendant un mois ou six semaines, puis de concentrer la solution jusqu'au 12,ne environ d'un perchlorure de fer à 45°. Cette solution, que j'ai employée souvent, est très-favorable pour durcir les ganglions, et surtout pour les conserver presque indéfiniment, sans que l'on ait à craindre qu'ils s'altèrent, comme cela arrive souvent lorsqu'on les laisse trop longtemps tlans une solution chromique.

L'alcool absolu pur ou étendu d'eau distillée par moitié ou par tiers est un moyen de durcissement trèsexpéditif; un jour ou deux suffisent.

La congélation vantée par M. Itoudanovsky ( 1865 )

doit donner de très-bons résultats. Je n'ai pas ou occasion de m'en servir.

II. Fixer le ganglion dans une position déterminée . — Lorsque les ganglions, qui ne sont point naturellement durs, ont acquis une consistance assez ferme pour résister au tranchant du rasoir, il faut les fixer solidement, de manière que celui-ci puisse les couper précisément dans le sens qui semblera le plus avantageux pour l'étude, soit en long, soit en travers. On comprend que des organes aussi ténus que la plupart des ganglions ne sont pas faciles à manier, si on n'en grossit pas le volume ou si on ne les accolle pas à des corps saisissables. Pour atteindre ce but, voici les procédés que j'ai employés: Après avoir retiré le ganglion à couper de la solution qui a servi à le durcir, je le dispose en étendant ses branches sur du papier buvard, où je le laisse sécher à l'air libre pendant une heure ou deux. Lorsque sa surface est bien privée d'humidité, je le trempe clans de la paraffine fondue, dont la température de fusion ( 42° ) n'est pas assez élevée pour en altérer la substance; puis je le retire immédiatement pour laisser solidifier à sa surface une première couche de paraffine. En trempant ainsi le même ganglion à plusieurs reprises, j'obtiens bientôt un petit bloc de paraffine contenant mon ganglion, dont je connais la position exacte, c'est-à-dire, où sont ses faces, ses extrémités, les points d'émergence de ses principales branches. Ce petit bloc de paraffine est encore trop petit pour être tenu facilement entre les doigts, je le fixe alors au moyen d'un peu de la même substance fondue sur un bouchon de liège, on je Le dispose dans la cavité d'un tube en laiton, et j'y coule autour du ganglion une certaine quantité do paraffine fondue. Après la solidification de celle-

ci, je relire du tube une petite bougie contenanl à une de ses extrémités le ganglion nerveux disposé dans le sens précis où je veux pratiquer mes coupes.

Au lieu de paraffine, on peut se servir de divers encollages (que l'on trouve à acheter chez M. Bourgogne à Paris), au moyen desquels on colle les ganglions à couper sur du liège ou sur de petits morceaux de bois tendre. Il faut toujours appliquer sur l'objet plusieurs couches de ces encollages (1), lesquelles demandent plusieurs heures, quelquefois plusieurs jours pour sécher ; tandis que la paraffine est immédiatement solide, et que mon procédé a au moins l'avantage d'être expéditif.

III. Les coupes que l'on peut faire à imam levée, suffisantes pour l'étude de la plupart des tissus, sont souvent bien défectueuses pour celle du tissu ganglionnaire. En effet, il s'agit non-seulement d'avoir une tranche très-mince, mais encore de l'avoir souvent dans une grande étendue, afin qu'elle comprenne les nerfs qui s'irradient du ganglion, et que l'on puisse suivre, si c'est possible, la marche des tubes nerveux entre les globules ganglionnaires et leur abouchement avec ces éléments anatomiques. Or, il est presque impossible, quelque habitude que l'on ait de ces sortes de préparations, d'exécuter à main levée des coupes aussi parfaites qu'il le faudrait. Pour obvier à cette imperfection de la main, j'ai fait construire, par» MM. Robert et Colin, un microtome qui ne diffère de celui de M. Follin que par la facilité avec laquelle je fixe dans son intérieur l'objet à couper. J'ai parlé de ma manière de faire de petites bougies cylindriques de paraffine avec

(l) Tous ces encollages ont pour base des mélanges de solutions concentrées de sucre ou de gomme avec de la gélatine dissoute.

un on plusieurs ganglions pris dans celle substance. Le calibre des moules de lailon qui servent à les fabriquer esl égal au calibre du tube de mon microlome, de sorte que les bougies entrent exactement clans ce tube. Une de leurs extrémités (celle qui ne contient pas le ganglion) repose sur une sorte de piston de cuivre H\c à la vis micrométrique, piston qui mon Le avec cette vis, et par suite pousse le cylindre de paraffine, dont l'autre extrémité (celle qui contient le ganglion) arrive au niveau d'un plan d'acier poli. Supposez que je fasse glisser une lame bien affilée sur ce plan, je couperai tout ce qui le dépassera; si je fais monter la vis micrométrique d'un trentième ou d'un cinquantième de millimètre, l'extrémité de la bougie fera saillie au-dessus du plan d'une quantité correspondante, et si je rase ce plan avec la lame d'un cou leau, j'aurai une coupe delà paraffine etde l'objet qu'elle contient, d'une épaisseur égale au vingtième, au trentième ou au cinquantième du millimètre. La paraffine se casse et se pulvérise, mais la coupe de l'objet reste. — On peut remplacer le cylindre de paraffine par un petit cylindre de bois tendre de même diamètre ; à une de ses extrémités on fixe le ganglion par un encollage, on place tout le petit système dans le microtome, puis on pratique les coupes comme je viens de le dire.

J'ai aussi étudié quelques coupes de ganglions que j'ai fait exécuter par M. Bourgogne, dont l'habileté dans ce genre de préparation est de réputation européenne (1).

(I) La méthode des coupes, dans l'étude des ganglions, doit toujours être contrôlée par celle des dilacérations, si l'on ne veut s'exposer à des erreurs. C'est ainsi que M. Roudanowski (1865, p. 235), qui n'a étudié que des coupes faites dans un seul sens, a cru voir des anastomoses eutre les cellules ganglionnaires, au moyen do prolongements qu'elles s'enverraient réciproquement, anastomoses qui n'ont été signalées que par lui et que nous n'avons pu retrouver.

IV. Emploi des réactifs et des moyens de coloration. — Une fois la coupe microscopique oblcnue, on la transporte immédiatement dans un peu d'eau distillée, ou on la laisse tremper douze ou vingt-quatre heures. On la soumet ensuite aux réactifs chimiques et aux agents de coloration pour en faciliter l'étude.

Je ne répéterai point ici ce que j'ai déjà dit de l'action des agents chimiques (page 59), que l'on combine et que l'on diversifie de mille manières ; ainsi Clark a trouvé qu'un liquide composé d'une partie d'acide acétique et de trois parties d'alcool jouit de la propriété de rendre transparentes les coupes du système nerveux ; Moleschott a trouvé une liqueur analogue, etc.; je ne veux indiquer que quelques moyens de coloration.

Les pièces qui ont été durcies dans l'acide chromique sont légèrement teintes en jaune et peuvent se passer d'autre coloration.

Les substances colorantes habituellement employées sont : l'eau iodée, la teinture d'iode, une solution d'iode dans l'acide iodhydrique, la solution ammoniacale de carmin, la fuchsine dissoute dans l'eau alcoolisée ou acidulée par l'acide acétique ou dans la glycérine, l'aniline dissoute dans l'eau alcoolisée. Le procédé de coloration est le même pour toutes : lorsque les coupes ont trempé dans l'eau distillée, on les plonge clans le liquide colorant, où on les laisse en général toute une journée. L'expérience apprend bien vite à ne se servir que de liquides peu chargés du principe colorant , parce que les matières organiques azotées le fixent en grande abondance, et se colorent avec une intensité plus nuisible qu'utile à l'observation.

J'ai essayé de colorer des préparations de ganglion avec des solutions très-étendues de nitrate d'argent (1 partie pour 400 ou 800 parties d'eau distillée), méthode préco-

aisée par Recklinghausen pour d'autres tissus, sans en avoir retiré le moindre avantage.

Lorsque les ganglions ont été durcis dans une solution de perchlorure de fer, on peut les colorer par un procédé bien simple que je crois avoir employé le premier et qui m'a donné d'excellents résultats. On laisse tremper les coupes pendant au moins une journée dans l'eau distillée, que l'on renouvelle souvent afin d'enlever la plus grande partie du composé ferrique qui les imbibe; puis, les ayant transportées dans un verre de montre plein d'eau distillée, on y laisse tomber une goutte d'acide gallique. Au bout.de quelques instants, la réaction commence : les bords de la coupe prennen t une teinte d'un noir bleuâtre, et au bout d'une heure toute la coupe a la même coloration. Lorsqu'on l'examine au microscope , on voit que, si les détails des éléments anatomiques sont un peu masqués, les globules et les tubes ont pris une couleur noirâtre qui leur donne une netteté de contour et un relief surprenants. Mais ce qui est surtout bien remarquable, c'est que les éléments nerveux seuls sont colorés, et qu'ils se présentent comme disséqués au milieu du tissu lamineux et de la matière amorphe d'interposition qui sont restés incolores. Ce fait peut sans doute s'expliquer ainsi : à la suite de lavages successifs dans l'eau distillée, lés éléments nerveux ont la propriété de retenir plus longtemps la solution de perchlorure de fer qui les imbibait, et l'acide gallique intervenant, les colore sans agir de la même manière sur le tissu lamineux et la matière amorphe qui ont abandonné leur sel ferrique. C'est d'après une coupe qui avait été colorée par ce procédé que j'ai dessiné la figure 11 (pl. II). En employant ce procédé, il y a un écueil à éviter, c'est d'avoir une coloration noire trop intense qui ne permet plus de rien distinguer; aussi, pour peu que la coupe no soit pas très-mince, pour peu

qu'on ne l'ait pas fait dégorger longtemps dans L'eau distillée et qu'on ne l'ait pas soigneusement lavée, il vaut mieux avoir recours à un autre moyen de coloration.

DE LA CONSERVATION DES PRÉPARATIONS l)E GANGLIONS.

Lorsqu'on est tombé sur une dilacération ou sur une coupe instructive, lorsqu'on l'a soumise à des réactifs chimiques et qu'on l'a colorée, il faut la conserver.

Il va de soi que toutes les préparations qui ont été soumises à des agents désorganisateurs , comme les acides minéraux concentrés, les bases caustiques en solution saturée, ne peuvent se garder.

Les procédés de conservation pour toute pièce anatomique en général se distinguent en deux catégories, suivant qu'on se propose de la conserver humide dans un liquide imputrescible, miscible à l'eau, ou de la priver de son humidité pour la conserver par un vernis.

Dans le premier cas, les milieux dont on se sert le plus habituellement sont l'eau alcoolisée, la glycérine, une solution plus ou moins concentrée de sucre ou de gomme arabique, une solution de chlorure de calcium, d'acide arsénieux, etc. On fait avec du bitume de Judée une petite cellule sur une lame de verre , on laisse tomber dans son centre le liquide conservateur qu'on a choisi; puis on y dispose la pièce microscopique ; on la recouvre du petit verre mince , dont on mastique le bord avec du bitume ; et l'on a ainsi une préparation qui se conservera indéfiniment.

Dans le second cas, il faut priver la petite pièce microscopique de son humidité, afin que le vernis puisse l'imbiber et la rendre transparente comme une membrane desséchée. On ne peut songer pourtanl à la priver d'humidité par une dessiccation complète, parce qu'elle se rac-

cornirait, se déchirerait et deviendrait complètement impropre à l'étude. Il faut la faire sécher le plus possible, sans cependant qu'elle perde sa souplesse; puis on la traite par un mélange à parties égales d'huile de lin siccative et d'essence de térébenthine, que l'on étend sur sa surface à plusieurs reprises, avec un pinceau. Au bout de deux ou trois heures, l'eau a été complètement chassée et a été remplacée par le mélange que je viens d'indiquer.

La pièce microscopique qui, à l'état humide, était presque opaque, est devenue transparente et suscep tible d'être pénétrée et conservée par un vernis. Celui que l'on emploie le plus habituellement est le baume du Canada, rendu presque liquide par l'essence de térébenthine rectifiée. Au lieu du mélange précédent, on peut employer, pour chasser l'humidité, un mélange à parties égales d'alcool absolu et de créosote. C'est un moyen plus expéditif : en un quart d'heure les pièces sont devenues translucides; mais il m'a semblé moins favorable que le précédent, en ce sens qu'il rétracte trop le tissu et déforme les éléments anatomiques.

Le procédé de conservation dans les vernis, en rendant les parties transparentes, de la même manière que les membranes des pièces anatomiques sèches, a l'immense avan tage de permettre d'observer des coupes plus épaisses de ganglions et de suivre, dans certains cas, pendant un plus long trajet un prolongement de globule ganglionnaire (1).

(i) Les images photographiques exécutées par M. Duchenne (de Boulogne), d'après des coupes do ganglions, ne représentent leur texture que d'une manière très-imparfaite. En effet ces images, d'ailleurs toujours diffuses, ne donnent pas la sensation de la profondeur et du relief qui permet d'interpréter la forme des globules ganglionnaires, et de suivre leurs prolongements entre les fibres nerveuses, au-dessus ou au-dessous des globules voisins.