CHAPITRE IX

Du choix de la composition optima des trois solutions d’oxyhémoglobine utilisées dans notre expérimentation.

Il ressort des conclusions des chapitres précédents que les solutions d’oxyhémoglobine dans l’eau distillée quel que soit leur titre, ont des propriétés physicochimiques et une constitution minérale plus ou moins différentes de celles du plasma sanguin du chien.

Nous avons donc cherché à ajuster ces solutions de telle sorte qu’elles se rapprochent autant que faire se peut du plasma de cet animal, à ces divers point de vue.

Ajouter des sels minéraux à une solution est chose relativement aisée. En enlever est déjà plus difficile, Ajuster une composition physico-chimique à une autre est encore beaucoup plus compliqué. Dans ces divers cas, le problème ne se pose pas sous le même angle. Les mesures physico-chimiques nous ont, en l’espèce, imposé une formule optima que nous nous sommes ensuite efforcé d'adapter à la formule minérale du plasma.

Afin de synthétiser les faits, nous avons effectué les graphiques ci-joints :

1° Constantes physico-chimiques

Le graphique 8 a été établi de la façon suivante :

En absisses sont consignées les concentrations en hémoglobine pour 100.

En ordonnées sont portées les différentes valeurs mesurées : At, viscosité, densité, P. O. C., tension superficielle.

Chaque ligne représente, pour chaque élément, la

FMGQIE moyenne des valeurs mesurées pour chaque concentration,

autrement dit la variation moyenne de ce facteur en fonc-

tion de la concentration.

Sur chacune de ces courbes, un point entouré d’un cercle représente la valeur correspondante moyenne observée

dans le plasma sanguin.

OAe

DOpegues En Concentralion en M60 = 2 EL US (RER CR EC Re —— th mm 12 40 8 6 h F1G: 8. — Tableau récapitulatif montrant la variation moyenne des

différentes valeurs physico-chimiques des solutions aqueuses d’oxyhémoglobine en fonction de leur concentration et comparaison des valeurs correspondantes obtenues dans le plasma sänguin de chien (Un point entouré d’un cercle).

Si tous ces points encerclés etaient sur une même ligne verticale, la composition de la solution d’hémoglobine idéale, possédant les propriétés du plasma, serait par cela même définie, mais la figure nous montre qu’il n’en est point ainsi.

a) Quel que soit le titre en hémoglobine des solutions, leur abaissement cryoscopique est beaucoup trop faible, mais ceci peut être aisément corrigé par addition de sels minéraux.

PDO

b) Si la densité et la tension superficielle s'accordent pour une concentration de 6 p. 1.000, la pression osmotique colloïdale pour une telle concentration est un peu trop forte et surtout la viscosité trop faible.

Mais l’addition de CI Na nécessaire à l’abaissement cryoscopique va diminuer la tension superficielle, augmenter la densité, augmenter aussi, mais dans de très faibles proportions, la viscosité.

D’autre part, les chiffres mentionnés ne sont pas des nombres absolus, mais des moyennes laissant à droite et à gauche une marge de sécurité. Ce ne sont pas des points, ce sont des plages qui permettent de choisir un compromis.

On voit en effet que sous réserve d’un ajustement de labaissement cryoscopique par addition d’une quantité convenable de chlorure de sodium, ce sont les solutions d’hémoglobine à 6,5 p. 100 qui présentent les constantes physico-chimiques les plus proches de celles du plasma sanguin.

Nos expériences auront notamment pour but de rechercher si cette concentration, qui nous paraît ainsi théoriquement la meilleure, est aussi la mieux supportée par l'organisme; et nous serons amenés par là même à utiliser des solutions de titre et de compositions différents pour nous permettre d'établir des comparaisons.

C’est ainsi que nous avons employé à côté de solutions à 6,5 p. 100 des solutions dont le titre était le double ou la moitié de celui-ci, soit environ 14 et 3,5 p. 100. Ces solutions extrêmes présentent une viscosité, une densité, une pression colloïdale osmotique et une tension superficielle très différentes de celles du plasma sanguin de chien; et nous n’avons rien fait pour en changer les valeurs. Toutefois nous avons modifié l’abaissement cryoscopique dans certains cas en l’amenant à celui du plasma sanguin de chien, par addition de sels minéraux, afin d’étudier les variations de toxicité de ces concentrations en fonction de leur tonicité.

ATOS

2° Constantes chimiques

Nous nous sommes efforcés, dans un certain nombre de cas, d'amener la composition minérale de nos solutions d’hémoglobine à des valeurs semblables à celles de la composition du plasma sanguin.

P/en PO? plasmalique

F1G. 9. — Graphique permettant l’ajustement des constantes minérales des solutions aqueuses d’hémoglobine, à différents titres, à celles du plasma sanguin de chien.

Nous nous sommes servis à cet effet des courbes de la figure 9. Ces courbes construites sur le type de celles des constantes physico-chimiques (fig. 8) montrent la variation de la concentration des différents facteurs minéraux en fonction de la dilution.

Si nous portons les valeurs correspondantes obtenues dans le plasma sanguin de chien en horizontale, au niveau de leurs valeurs respectives, nous voyons que le graphique 9

He 150 DAME

permet, dès l’instant qu’il est établi à échelle convenable sur papier millimétrique, de connaître instantanément les quantités de sels minéraux à ajouter aux solutions d’hémoglobine pour les ajuster à la teneur normale en ions minéraux de ce plasma.

D’après ce graphique, on constate les faits suivants :

a) L’addition de K n’est nécessaire que pour les concentrations inférieures à 3 p. 100. Les concentrations supérieures en ont toujours un excès. Personnellement nous n’avons pas utilisé dans nos expériences de solutions d’hémoglobine titrant moins de 3,5 p. 100; et par conséquent nous n’avons pas eu à ajouter de sels de K à nos solutions.

b) L’addition de Ca est toujours nécessaire quel que soit le titre de la solution. Nous avons ajouté du CI Ca.

c) L’addition de P? ( est nécessaire pour les concentrations inférieures à 12 p. 100. Nous avons ajouté du phosphate dissodique.

Dans la pratique, nous avons opéré de la façon suivante :

Supposons que nous voulions chercher la quantité de chlorure de Ca à ajouter à une solution d’hémoglobine à 65 obtenue par dilution convenable d’une solution à titre supérieur.

Menons au point figuratif représentant la concentration de 6,5 une verticale. Cette droite coupe la ligne de la calcémie moyenne des solutions d’hémoglobine (ligne en pointillés inclinée) et celle du plasma sanguin de chien (ligne en pointillés horizontale). La figure étant construite de telle sorte que 1 millimètre représente 1 milligramme, le nombre de millimètres séparant ces deux lignes représente la quantité de milligrammes de Ca à ajouter à 1 litre de solution d’hémoglobine.

On calcule ainsi chaque élément.

Ces données sont établies p. 1.000 cc. de solution.

On constate que les quantités de phosphates et de calcium

nécessaires sont excessivement faibles et de l’ordre de quelques centigrammes. Donc, en pratique, la quantité de chlorure de sodium qu’il faut employer pour rendre nos solutions isotoniques n’est pas de ce fait influencée.

Notons en outre qu’il y a intérêt à ajouter séparément chaque élément dissous dans un volume d’eau convenable afin d'éviter la précipitation de phosphate de calcium.

Toutes les solutions dont on se sert pour réaliser ces ajustements doivent être stérilisées.

On prépare une fois pour toutes des solutions titrées des différents éléments, telles que 1 centigramme corresponde à 1 centimètre cube, sauf pour le chlorure de sodium où le taux doit être plus élevé, par exemple 10 grammes pour 100 cc.

En résumé, on trouvera dans le tableau ci-joint (tableau VIT) la composition finale des diverses solutions que nous avons employées dans la majeure partie des cas au cours de nos expériences. Les titres de ces solutions ont toujours été de 14, 6,5 à 7 ou 3,5 p. 100.

Comme on pourra s’en rendre compte en.se reportant au Chapitre Premier de cette deuxième partie, la composition minérale des solutions d’hémoglobine de bœuf à 14 p. 100 qu'ont utilisées dans leurs recherches Amberson et ses collaborateurs était voisine de celle des solutions de même titre que nous avons préparées à partir du sang de cheval. Ces auteurs ne sont pas attachés à déterminer toutes les propriétés physico-chimiques de leur préparation, comme nous avons fait. Ils ont mesuré cependant sa pression colloïdale osmotique; mais les chiffres qu’ils indiquent (55 à 60 mm. Hg) diffèrent sensiblement de ceux que nous avons trouvés pour la concentration en hémoglobine de 14 p. 100 (85 à 88).

Pratiquement, pour réaliser nos solutions d’hémoglobine, nous avons opéré de la façon suivante :

La solution aqueuse d’hémoglobine ayant été préparée

aussi concentrée que possible, et débarrassée de son éther, est titrée.

SUN RCE

En fonction de ce titre et du degré de dilution désiré, on calcule la quantité de substances à ajouter, à savoir :

1° La quantité d’eau.

2° La quantité des différents sels minéraux.

3° La quantité de chlorure de sodium.

Les sels minéraux sont prélevés dans des solutions mères stérilisées et ajoutées à la solution d’hémoglobine.

On complète en ajoutant le volume nécessaire d’eau distillée. La solution d’hémoglobine est prête pour l'emploi.

Dans certains cas, comme nous le verrons, tout en utilisant toujours des solutions de 14, 6,5 ou 3,5 p. 100 d’hémoglobine, nous n’avons pas cherché à ajuster ces préparations au plasma sanguin avec autant de rigueur que l’exigent les données du tableau ci-dessous. Ceci nous a permis de juger de la nécessité de cet ajustement.

Nos solutions ont toujours été maintenues à 4° depuis la fin de leur fabrication jusqu’à leur emploi. Ce temps ne dépassa jamais, d’ailleurs, un à deux jours. Sappey dit avoir expérimenté dans des conditions satisfaisantes avec des solutions faites depuis plus de quinze jours. Personnellement nous ne nous sommes pas attachés à l’étude du problème de la conservation de ces préparations.