CHEZ LES ANIMAUX VERTÉBRÉS DITS A SANG FROID

PAR

M. le dootear V. DBSPKI6NBS

LICBKCIB B8 SCIENCES CHEF DES TRATAU3L DE ZOOLOGIE A LA FACULTE DE MEDECINE DB LYON (laboratoire DB M. LR rROFBSSEUR LORTET)

Dans une science nouvelle comme la bactériologie , il ne saurait y avoir d'étude inutile, et telle qui aujourd'hui ne semble pas avoir de portée extra-scientifique, peut plus tard être la base de données intéressant au plus haut point l'hygiène ou quelque autre branche de Tart médical.

Ces considérations et aussi la conviction que tout travail, si dénué d'intérêt pratique qu'il puisse paraître, peut, à un moment donné, contribuer à éclaircir certains points de nos connaissances, nous ont décidée entreprendre des recherches sur la manière dont se comporte le bacille tuberculeux de Koch , chez les animaux vertébrés à température variable.

Nous nous sommes attaché dans nos expériences à considérer les faits sans parti pris ; les cas douteux ont été considérés par nous comme nuls ; en un mot, nous nous sommes borné à observer et nous l'avons fait avec toute la conscience désirable.

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Notre étude se propose d'établir diverses propositions. En première ligne, les animaux « à sang froid » sont-ils susceptibles d'être contaminés par le bacille tuberculeux de Koch? Pour que cette infection se produise, une température élevée est-elle nécessaire, ou peut-elle avoir lieu à la température ordinaire? Enfin, un dernier point consistait à déterminer ridentité de la tuberculose de ces vertébrés inférieurs avec celle des mammifères.

Nos premières recherches datent du mois de juillet 1889, mais elles ont été faites dans des conditions défectueuses; aussi n'y insisterons-nous pas, et nous garderons-nous de tirer aucune conclusion des résultats qu'elles ont donnés.

A cette époque, nous avons expérimenté sur deux espèces de poissons, la tanche et la perche, puis sur quelques tortues terrestres et paludines, enfin en dernier lieu sur des grenouilles. Ces divers animaux étaient maintenus à la température du laboratoire, dans leur milieu habituel.

Nous utilisions, pour nos inoculations, une culture pure de bacille de Koch; mais celle-ci était très âgée et avait perdu toute action, comme nous l'ont démontré ultérieurement de nombreuses inoculations à des cobayes.

Comme procédés d'inoculation, nous avons tour à tour employé le dépôt de la culture sur agar glycérine, soit sous la peau, soit dans la chambre antérieure; dans quelques cas, cette culture délayée préalablement dans de l'eau ou du bouillon stérilisés, a été injectée dans le tissu cellulaire sous-cutané, dans la cavité abdominale, ou enfin dans la chambre antérieure.

D'une manière assez constante nous trouvions, chez les poissons soumis à ces expériences, de petites granulations soit à la surface des branchies, soit dans les organes internes, notamment le pancréas. Ces productions pathologiques, examinées au microscope après double coloration par le procédé d'Hermann, nous montrèrent un grand nombre de bacilles, en bâtonnets, les uns très longs et grêles, d'autres au contraire très courts et trapus, avec une infinité de formes intermédiaires ; aucun par son simple aspect morphologique ne pouvait faire songer au bacille de Koch ; quant à la réaction par la double coloration suivant le procédé d'Hermann, nous nous sommes assuré que Ton colorait ainsi beaucoup de bacilles et même des noyaux qui résistaient ensuite à la décoloration par l'acide azotique. A plusieurs reprises nous avons inoculé à des cobayes soit ces branchies avec leurs granulations, soit les organes suspects, mais jamais nous n'avons réussi à les rendre tuberculeux. Nous ne saurions en conclure déprime abord que le bacille de Koch ne se développe pas chez les poissons, à la température ordinaire; c'est un point de l'histoire de la tuberculose que nous nous proposons de reprendre plus tard en nous mettant dans de meilleures conditions.

Nous avons essayé de maintenir des poissons dans un aquarium bien aéré, chauiïé constamment à la température de 25 à 30% mais jamais nous n'avons pu conserver ainsi nos animaux plus de deux jours, et on ne pouvait évidemment obtenir un résultat concluant, dans un espace de temps si restreint; d'autant plus que les poissons non inoculés ne résistaient pas mieux que les autres.

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Avec des tortues inoculées dans la chambre antérieure, ou sous la peau, nous n'avons jamais eu de résultat ; plusieurs de ces animaux sont morts, mais sans présenter de lésion appréciable.

Pour ce qui est des grenouilles, nous avons obtenu dès Tabord des résultats plus encourageants. Nous avons pu assez aisément conserver jusqu'à huit ou dix jours ces animaux dans une chambre chaufTée d'une manière constante à la température de 25*. Pour éviter une dessiccation très rapide, nous avions soin de placer nos grenouilles dans un crislallisoir rempli d'eau, et fermé de façon à ce qu'elles ne pussent pas en sortir.

Dans de pareilles conditions, des grenouilles inoculées avec la culture pure sur agar glycérine, déjà mentionnée, sont mortes au bout de six à sept jours et l'autopsie révéla des faits qui présentent un certain intérêt au moins pour deux d'entre elles.

Observation 38. — Grenouille n" 5 (1" série). — Le 27 novembre 1889, à i heures du soir, on inocule cette grenouille en déposant sous la peau incisée une notable quantité de culture sur agar glycérine de bacille de Koeh. L*animal est placé dans une éluve à 25°.

Mort le 3 décembre i 889 à 11 heures du matin.

Autopsie, — 1° Au niveau de Tincision, on a une cicatrice irrégulière, de coloration jaunâtre.

2** De chaque côté de la colonne vertébrale, on constate une teinte ecchymotique notable occupant un triangle limité par Tanglc inféro-interne de cha(|ue omoplate, cette zone entoure un petit abcès d'aspect caséeux.

> Les autres organes sont normaux.

L'examen des préparations do Tabcès caséeux montra de nombreux bacilles de Koch parfaitement colorés par la méthode d'Ehrlich, et qui se retrouvaient également dans les préparations des muscles voisins raclés.

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Observation 40. — Grenouille n** 8 (1" série). — Le 27 novembre 1889 à 4 heures du soir, inoculation sous la peau d'une notable quantité de culture pure de bacille de Koch sur agar glycérine. L*animal est maintenu dans une étuvc à25^

Mort le 5 décembre 1889 à 5 heures du soir.

Atitopxie, — t® Cicatrice bien formée au point d'inoculation.

2^ Un petit abcès dans le tissu cellulaire sous-cutané, entouré d'une zone ecchymotique.

3"^ Rien ailleurs, sauf une congestion assez vive des poumons.

Des préparations faites avec l'abcès sous-cutané, montrèrent de beaux bacilles de Koch, parfaitement colorés par le réactif d'Ëhrlich. Dans le poumon, il fut impossible de distinguer s'il y avait des microbes.

Dans ces deux cas, il ne fut pas fait d'inoculation à des mammifères; nous ne les citons que pour mémoire, car ils ne sont pas absolument concluants. Il est probable pourtant que si les organes infectés avaient été inoculés à des cobayes, ceux-ci ne seraient pas devenus tuberculeux, à moins que le passage par l'organisme de la grenouille, ne donne une nouvelle virulence aux vieilles cultures du bacille tuberculeux de Koch, fait que nous n'avons pas encore pu constater expérimentalement.

Dans une nouvelle série d'expériences entreprises au mois de mars 1890, nous avons de nouveau employé des grenouilles. Mais avant de relater les résultats que nous avons obtenus, il nous semble bon de voir quels sont les travaux parus jusqu'à ce jour sur la tuberculose des vertébrés inférieurs. Ils se bornent à une seule observation qui a trait à un cas de tuberculose spontanée chez un serpent, observé par M. WalterK. Sibley, de Londres, et publié dans les

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archives de Virchow. L'intérêt qu'elle présente nous engage à la traduire ici in extenso (1).

11 m'a été impossible de trouver dans la littérature une observation quelconque de tuberculose chez les reptiles, pouvant être rapprochée des faits suivants. Aussi ai-je pensé faire œuvre utile en publiant ce cas très intéressant, qui peut éclairer d'une façon spéciale un point de Tétude de la tuberculose.

Un exemplaire de Tropidonolus nalrix^ var. murorum^ qui était originaire d'Italie, mourut dans un jardin zoologique après un séjour de quelques mois. On voyait extérieurement, du cùlé droit du corps, trois masses saillantes du volume d'une noisette. Elles adhéraient intimement aux côtes et Tuno d'elles englobait sept côtes dans sa substance. La peau était intimement unie à ces tumeurs, toutefois elle était manifestement saine. Après avoir incisé la peau, on pouvait voir en outre une série de nodules sous-cutanés qui atteignaient la taille d'un pois, mais qui pourtant avaient échappé jusqu'ici à l'examen extérieur. De semblables nodules se rencontraient disséminés sur tout le corps du reptile.

En pénétrant plus profondément dans l'intérieur du corps, on trouvait, également dans toute l'étendue de l'animal, de nombreuses granulations, localisées surtout entre les couches de tissu conjonctif lâche situé contre la colonne vertébrale. Ces foyers s'étendaient en avant de la colonne vertébrale, au voisinage du tissu pulmonaire, sans contracter d'adhérence avec la paroi de la plèvre; il existait seulement un nodule au niveau de la dilatation de la bronche, faisant corps avec la paroi de celle-ci. De semblables granulations, disposées de même, se rencontraient dans la capsule des reins.

Plus loin, dans la première portion de l'aorte, on constatait une série de petits foyers, presque confondus avec la paroi artérielle, et disposés en chaîne autour de cet organe

(l) Walter K. SiBLEY. De la tuberculose chez les vertébrés^ publication de rinstilut pathologique de Strasbourg (prof. v. Rccklinghaïuen), in Archives de Virchow. Baud CXVl, p. 104, 1889.

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qu'ils entouraient plus ou moins; celle dispostlion existait sur toute la longueur de la commissure, des deux courbures àa côté gauche, et se prolon^çeait j usqu'au delà du foie. Audessous de ce point, l'aorte présentait encore des petits tubercules.

A la coupe, tous ces noyaux se montraient constitués d'une substance caséeuse.

Le cœur el les poumons n'offraient aucune modification appréciable de leur structure.

Le foie semblait un peu plus volumineux, sa capsule était UQ peu épaissie, et le parenchyme hépatique était Iraïersé dans foule son épaisseur par des petits foyers atleiRnant à peine le volume d'une télé d'épingle. Quelques-uns pourtant étaient gros comme un pois, et à la coupe présentaient un conlenu caséeus. Beaucoup de ces nodules pouvaient être exprimés du tissu hépatique, ils se présentaient sous l'aspect de grains arrondis à côté desquels étaient placées des saillies moins considérables; après qu'on les avait chassés du parenchyme hépatique, il était aisé de reconnaître qu'ils occupaient de petites cavités k parois lisses. Ces masses prédominaient sur la face dorsale de l'organe, ils étaient plus rares sur la face ventrale. Fréquemment deux ou plusieurs de ces nodules faisaient corps avec 1» paroi des vaisseaux sanguins et surtout des ramifications de la veine porte.

La rate avait subi une modification telle, que sa structure i^lail méconnaissable.

Quant au pancréas, il n'offrait pas de lésion macroscopique spéciale.

Sur le tube digestif, on trouvait de dislance en dislance, à partir de l'extrémité postérieure du foie, quelques points épaissis, disséminés dans la paroi. Sur la face opposée de la paroi stomacale, quelques loyers se rencontraient également: à leur niveau, la membrane stomacale était épaissie par sa face exleine. Des adhérences intimes unissaient les anses de l'intestin grôle, et en ces points les vaisseaux sanguins étaient dilatés et congestionnés. Au rectum, la séreuse contenait de pelils foyers, mais la couche musculaire était intacte.

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Le mésentère et le péritoine ne présentaient pas de nodules.

Les reins et les organes génitaux renfermaient de petits foyers constitués exactement de la même façon que les autres.

Examen microscopique. — Les tubercules du foie, précédemment mentionnés, se montrent à la coupe, partout plus ou moins ronds. Les plus petits d'entre eux forment une agglomération de cellules arrondies, de faible dimension, englobées dans un tissu fascicule si peu abondant qu'elles ne semblent réellement pas délimitées par les cellules du foie immédiatement en contact : la plupart présentent des produits de dégénérescence, mais ceux-ci n'occupent pas toujours le centre du tubercule, fréquemment même ils sont multiples. Les plus grosses granulations sont constituées le plus souvent d'une petite zone hyaline et dégénérée, contenant des bacilles. Fréquemment, les bords de cette zone sont irréguliers et envoient des prolongements vers les zones voisines; le centre de ces foyers de dégénérescence est homogène, mais leur surface montre de nombreux grains, petits, se teignant fortement; plus en dehors, on constate des petites cellules clairsemées. Les foyers de dégénérescence avec leurs petits îlots dinQltration empiètent plus ou moins sur une zone extérieure de cellules assez volumineuses, émettant de très fins prolongements et dont, seuls, les noyaux se laissent un peu colorer. Ces cellules constituent un réseau peu serré, de structure fenètrée, dans les mailles duquel sont englobées, en plus ou moins grand nombre, des petites cellules arrondies. Ces grosses cellules ramifiées se colorent faiblement et sont fréquemment situées entre les prolongements déjà signalés de la zone de dégénérescence.

Dans cette zone de cellules ramifiées, on trouve fréquemment des foyers de dégénérescence encore plus petits. Les bords du tubercule sont bien formés d'un anneau fibreux, mais avec de petits îlots de tissu interstitiel. Presque immédiatement en dehors de cet anneau, les cellules du foie sont absolument normales.

Aux endroits où plusieurs nodules se rencontrent et ne

sont plus isolés au milieu de la substance du foie, chaque tubercule isolé présente une constitution identique à celle des nodules solitaires précédemment décrits. Les dimensions de la zone de dégénérescence de chacune de ces granulations confluentes, sont les mêmes que dans les tubercules solitaires.

Chose plus surprenante, dans tous les foyers, il n*y a ni cellules géantes ni cellules épithélioïdes.

Dans tous ces tubercules se rencontrent de nombreux bacilles tuberculeux. Dans les plus petits, ils sont disséminés régulièrement dans tout le tissu. Dans ceux qui présentent des zones de dégénérescence, les plus petits sont presque exclusivement formés de bacilles. On en trouve aussi en petit nombre dans d^autres points, par exemple sur la capsule fibreuse qu'ils imprègnent parfois, et parfois aussi on les rencontre dans les cellules hépatiques un peu altérées au voisinage immédiat du tubercule. Dans les nodules dont le processus dégénératif est encore plus avancé, les bacilles sont épars à la surface de cette zone, absolument comme je Tai décrit pour les oiseaux; par contre on n'en trouve plus dans les parties centrales et âgées de la zone nécrobiosée.

Dans quelques cas, on trouve des formations à centre hyalin et dégénéré, disposé en stratiOcations concentriques dont les couches ont une consistance variable. Ce centre est entouré immédiatement d*une épaisse couche très serrée de cellules épithélioïdes facilement colorables. Toute cette masse pathologique est absolument ronde et enfermée dans une capsule fibreuse; on n'y trouve de bacilles ni au centre, ni à la périphérie.

Les tubercules des autres organes et du tissu fascicule, présentent une structure absolument identique à celle déjà décrite pour le foie, aussi est-il inutile d'insister sur leur description.

Pour ce qui est des poumons, ils ne montrent aucune altération dans leur constitution, au contact immédiat des tubercules réunis à la surface interne de la plèvre.

La rate est presque entièrement formée de nombreux tubercules disposés en couches épaisses, au milieu desquels la pulpe splénique est restée à peu près intacte.

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Dans le pancréas, on voit quelques petites granulatioos, ordinairement au voisinage d'une branche artérielle.

Les seuls tubercules réellement caractéristiques qui ont attaqué la membrane muqueuse du tube digestif, sont ceux de la terminaison de l'estomac; ici Ton peut voir, dans le tissu de quelques replis, des nodules constitués sur le même type et riches en bacilles; d'autres se rencontrent isolément au fond des excavations limitées par ces replis, et siègent sans doute dans les couches superficielles de la membrane muqueuse.

Les petits tubercules sous-cutanés présentent à leur centre une zone nécrobiosée, proportionnellement plus considérable que celle des nodules des autres organes, les petits foyers d'infiltration sont également plus étendus. La partie centrale nécrobiosée est ordonnée en couches concentriques irrégulières, au milieu desquelles se trouvent des parties arrondies formées d'une substance hyaline. Plus loin, on voit, disséminées autour des nodules, des masses brillantes de substance albuminoïde qui entourent de petites cellules et fréquemment des globules sanguins et de la fibrine. Une infiltration considérable sous forme de petites zones entoure la masse nécrobiosée et pénètre même à l'intérieur de la couche de cellules brillantes à prolongements; on trouve encore des points dégénérés et hyalins et beaucoup devaisseaux probablement lymphatiques contenant de petits globules blancs et présentant une infiltration qui gagne les tissus voisins sous forme de traînées.

Les parties nécrobiosées ne contiennent que peu de bacilles; ils sont en grand nombre dans les îlots arrondis et hyalins de ce nodule; par contre, ils manquent dans les parties claires de substance albuminoïde. De même, on les trouve abondamment dans les foyers hyalins de la zone externe, et surtout dans le tissu conjonctif environnant les vaisseaux voisins, où ils sont en masse.

Les tumeurs adhérentes aux côtes sont caractérisées par une grande vascularisation et consistent, d'une part, en grosses masses brillantes de substance albuminoïde, mêlée à de la fibrine, avec beaucoup de petites cellules rondes et quelquefois aussi des globules sanguins; d'autre part, en un

tissu de constitution identique à celle qui a déjà été décrite pour les nodules du foie. Des bacilles se rencontrent encore dans toutes les parties hyalines, mais manquent au contraire dans les portions formées de substance albuminoïde.

A la coupe de Taorte et des troncs lymphatiques contigus, on trouve une prolifération considérable de Tendothélium le long d*une ligne qui correspond au point de contact du tronc lymphatique. Sur cette face de la paroi de Taorte, il existe de nombreux bacilles dans la couche musculaire et la séreuse.

Le contenu des troncs lymphatiques voisins montre une disposition semblable à celle des autres nodules.

Nous voyons, d'après cette description, qu'il s'agit d'un cas indubitable de lymphomes avec nécrobiose centrale; en outre, nous avons démontré la présence à leur intérieur de bacilles qui à l'aspect microscopique et vis-à-vis des colorants, se comportent absolument de la môme fagon que les bacilles de la tuberculose que l'on rencontre chez l'homme et les animaux supérieurs.

Par conséquent le diagnostic de « tuberculose généralisée », que nous donnions en tète de cet article, semble démontré d'une manière incontestable. Pour ce qui est de l'origine locale de cette affection, mon enquête ne m'a fourni aueun renseignement.

Pourtant, en ce qui concerne le siège des lésions, les foyers de l'aorte sont évidemment localisés dans les vaisseaux lymphatiques. De même, dans les organes profonds, ils sont manifestement comme greffés sur la paroi d'un vaisseau, et, chose étonnante, à la coupe les nodules se montrent constamment ronds, jamais ovales ni allongés. Puisque ces foyers des organes internes ressemblent absolument quant à leur structure à ceux situés dans les organes lymphatiques de l'aorte, nous nous croyons autorisé à conclure que le début de toute l'affection s'est fait primitivement dans le système lymphatique.

Le Centralblatt fiXr Bactériologie (1), qui donne un

(1) Centralblatt fur Bacleriologie und Paraiilenkunde, V Band, u9 23, U juin 1889.

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résumé de cette observation, ajoute le renseignement suivant, dont nous ignorons l'origine : « Celte contagion s'explique apparemment par cette circonstance que le serpent était conservé dans la couveuse du Jardin zoologique, par conséquent qu'il avait vécu à une température à laquelle le développement des bacilles tuberculeux est possible. »

L'auteur de l'observation ne dit pas s'il a inoculé les organes tuberculeux à des mammifères pour prouver qu'il s'agissait bien réellement d'une tuberculose identique à celle des vertébrés supérieurs.

Peut-être serait-il possible de rapprocher de ce cas un fait qui nous a été raconté par le directeur d'un établissement erpétologique de notre ville, M. Pernelet. Au dire de celui-ci, il aurait vu, une fois, à l'autopsie d'un crocodile mort pendant un séjour à Marseille, les poumons absolument farcis de tubercules et de cavernes. En l'absence de toute constatation scientifique plus précise, nous nous bornons à cette citation.

La Tuberculose chez les Batraciens.