V. — GERMINATION ET DÉVELOPPEMENT

Cutinisés ou non, enkystés ou minces, colorés ou incolores, chlamydospores ou conidies, les divers éléments sont susceptibles de germer. Berlese, qui a pu, lui aussi, le constater, à décrit minutieusement quelques-unes des

phases du développement et en a conclu, en comparant ses germinations à celles de Lœw et de De Bary, qu'il avait vu une forme différente, répondant à une espèce distincte. Ses observations ont porté sur les éléments cutinisés et sur les formes-levures (gemmathons), qui sont en somme des conidies. Il montre que si les éléments sont peu où pas cutinisés la germination se fait par amincissement et décoloration de la membrane et formation directe des filaments : la paroi reste simple. Si, au contraire, l’élément est fortement cutinisé, la cuticule extérieure éclate par le gonflement du protoplasma {et j'ajoute du mucilage sous-jacent), et la cellule apparaît avec sa paroi interne mince et incolore, émettant aussitôt des tubes de germination qui bourgeonnent rapidement. Et cela semble mettre d'accord de Bary, disant que la membrane cellulaire a deux couches, et Lœw, admettant qu'elle n’en à qu'une seule.

Fig. 46. — Germination sur eau de pomme de terre : 1, après trois heures ; — 2, six heures ; — 3, neuf heures ; — 4, douze heures ; — 5, deux jours. a. — Germination sur eau de pomme de terre. — La

germination de ces formes-levures ou de ces conidies peut s’observer facilement dans les cultures en cellule sur eau

de pomme de terre.

La conidie se gonfle, devient granuleuse, puis aux deux pôles ou à un seul et souvent latéralement se montre un petit bourgeon qui grandit rapidement (fig. 46).

La cellule s'est quelquefois cloisonnée : si le bourgeon ne se sépare pas, le point de contact avec la cellule mère s'élargit: une deuxième cellule se forme à la suite, et bientôt se constitue un petit filament à éléments assez épaissis, et qui, dès le premier jour, commence à bourgeonner latéralement, en donnant des conidies qui se détachent au fur et à mesure de leur formation. Si bien que, dès le deuxième jour, autour du filament ramifié se trouvent des groupes considérables de ces conidies. On conçoit avec quelle rapidité une pareille production épuise un milieu de culture. Berlese dit qu'une génération ne se produit que lorsque l'autre est tombée. Je n'ai pas observé ce fait nettement.

Si au lieu d’une forme-levure c’est une cellule de fumago qui a été semée, les phénomènes sont fort analogues. Les groupes bi- ou tricellulaires germent parfois comme une seule cellule, et donnent un seul tube. Les éléments qui doivent se séparer poussent séparément. La cellule eutinisée se gonfle beaucoup : la couleur brun noir ou brunchocolat pâlit, devient verdâtre, quelquefois même disparaîit presque. Puis, sur un point, généralement à une extrémité, la membrane s'amincit et il apparaît un petit bourgeon, qui dès lors se comporte comme celui de la forme-levure : ilestseulement plus gros; le filament qu'il produit est d’abord peu rameux, assez irrégulier quelquefois, rarement droit, mais d'ordinaire se contourne plus ou moins. La formation de conidies est la même que plus haut. Ces conidies sont surtout fournies ici par les premiers articles et les groupes en sont réunis autour du centre de germination. Elles se forment parfois dès que le tube apparaît, et restent très peu de temps attachées aux filaments producteurs.

Aussitôt détachées, ces conidies germent en levure.

En réalité, c'est cette Yégélation en levure qui est la règle dansles cultures sur pomme de terre.

Au début, et si la substance n'est pas trop acide, aucun

filament ne se constitue et chaque bourgeon formé se détache Pour en produire à son tour un ou plusieurs autres : mais, en somme, si l’on examine de près ce phénomène, on y voit seulement un cas particulier de l'accroissement en fila-

Fig. 47. — Forme-levure germant et bourgeonnant.

ments. La forme-levure semée porte d'ordinaire plusieurs bourgeons très diversement placés (fig. 47).

Ce sont, en somme, des Dematium pullulans dont les articles se séparent au lieu de former une série, des Dematium à filaments unicellulaires, si l’on peut s'exprimer ainsi. La forme, les dimensions, la vie ultérieure des conidies est identique dans les deux cas. Si les bourgeons formés se réduisent à un, ou plus rarement à deux, c’est la végétation ordinaire des levures.

Les conidies sont portées sur les parties latérales des cellules mycéliennes, de préférence vers le sommet, près de l'attache de l’article suivant, mais sans règle absolue. Sur la dernière cellule, si la spore est unique, la conidie est parfois terminale; s’il y en à deux, elles sont placées le plus souvent de chaque côté du sommet, et très près de lui.

Sur les rameaux, la forme est fréquemment un peu atténuée à l'insertion et la largeur un peu plus grande à l'extrémité distale.

Une fois détachées, les levures sont ordinairement ovales ou plutôt subcylindriques à extrémités arrondies (EL SANS fig. 1 et 11).

Les conidies formes-levures se séparent avec une si grande rapidité qu'on les voit rarement en place, même

dans les cultures sur gélatine. On peut suivre au microscope cette séparation.

Le temps que met une forme-levure en milieu nutritif et à la température de 20 à 25° pour apparaître, se former et se détacher, est d'environ une heure (1).

Dans les filaments à développement rapide, les conidies forment des groupes le long des filaments, ou se couchent parallèlement à leur direction. Comme elles sont à leur tour le point de départ d'une multiplication en progression gé0métrique, il se forme des amas sphériques et allongés, transformant l'ensemble du filament en une sorte de chapelet (culture sur gélatine en cellule) (fig. 50, p. 181). Dans les liquides ordinaires, elles se répandent partout.

La formation sur le mycélium est si rapide que, contrairement à ce que l’on a dit, les levures ont toutes à peu près les mêmes dimensions, tant à la pointe du filament que sur son trajet. Au moment où elles se détachent, elles ont environ 6 à 8 » sur 3 ou 4. Puis elles se gonflent souvent et deviennent plus ou moins arrondies, quand elles vont germer en levures ou si elles commencent à se colorer.

Bientôt en effet, surtout s’il se produit un commencement de dessiccation, les levures ou les premières cellules des filaments tendent à se cutiniser.

Le phénomène débute fréquemment par une augmentation de volume et par un léger étranglement de la cellule en son milieu: la teinte devient grisâtre, très pâle, puis de plus en plus foncé, un peu verdâtre. La dessiccation relative diminue aussi la végétation en levure, et multiplie la forme filamenteuse grèle. A la fin même, les branches les plus fines deviennent souvent irrégulières et portent des formes-levures mal venues, plus petites et plus arrondies.

Si le liquide reste abondant, les filaments ont, au contraire, une tendance à se dissocier. Au bout de quelques jours, les cellules assez lâchement unies se sé-

(1) C'est le résultat exact auquel est arrivé Berlese de son côté.

parent et continuent d’ailleurs à bourgeonner latéralement, réalisant ainsi la forme de Dematium unicellulaire. indiquée ci-dessus comme primitive. Les articles et les levures restent plus gros, plus vigoureux : leur double contour se détache nettement, et des granulations protoplasmiques abondantes s'y montrent dès le début.

Sur le tissu émergé de la pomme de terre, les phénomènes sont analogues. Mais certaines formes-levures cessent de bourgeonner au bout de quelques jours, grossissent démesurément, d’abord en conservant leur forme, puis en tendant à devenir Sphéri- pig. 48. — Culture sur pomAe de ques, et constituent des sortes de A bal Brossies, etenkystes granuleux, volumineux, qui restent longtemps incolores (fig. 48). Puis la cutinisation se produit, et la pomme de terre noircit. Enfin, la végétation filamenteuse à cellules renflées et diversement cutinisées recouvre complètement la pomme de terre, toujours mêlée d’ailleurs aux diverses formes précédentes. C’est la’ végétation sur #ilieu-type que je décrirai plus loin.

Lorsque la cellule à l'étude est conservée hors de la chambre humide et subit, par conséquent, un commencement de dessiccation, les phénomènes changent. La cutinisation des membranes tend à se faire beaucoup plus rapidement, et au lieu de continuer à végéter en levure, ou en Dematium pullulans, les cellules, cutinisées ou non, germent en filaments fins : l'aspect de cette germination est tout différent. Lorsque la cellule pousse en levure, le bourgeon qu'elle forme est renflé, arrondi dès le début comme une petite sphère, où un petit corps ovalaire, appliqué par un point sur la cellule productrice. Quand celle-ci doit germer en filaments fins, elle se hérisse de petites aspérités cylindriques généralement assez nombreuses qui la déforment et ne se renflent jamais. Certaines cellules des filaments se différencient d’une façon identique (fig. 49). Dans les

180 LOUIS PLANCHON.

conditions de dessiccation relative ci-dessus indiquées, les filaments en question s’allongent beaucoup, mais restent grèles et très irréguliers, présentant sur tout leur trajet

Fig, 49. — Culture sur pomme de terre en cellule. Filaments en voie de dessiccation.

des débuts de ramification qui leur donnent une surface inégale.

Au centre d'une goutte de liquide en cellule, mais hors de la chambre humide, la végétation est en levure et des fumago se produisent lentement, mais sur le bord de la gouttelette s’allongent des filaments fins et irréguliers. Si l’on remet cette préparation dans la chambre humide, on voit souvent ces filaments se dissocier en cellules isolées qui végètent dès lors en levure.

Pendant ce temps, des éléments identiques conservés dans la chambre humide continuent à végéter en levure, et donnent seulement quelques rares filaments dont les cellules initiales offrent un double contour, mais ne sont pas encore nettement cutinisées. En tout cas, la cutinisation est beaucoup plus lente, comme sur le tissu même de la pomme de terre.

En somme, les variations portent surtout sur la eutinisation plus ou moins rapide et sur la production de filaments. Il est certain que la question de l'humidité est ici prépondérante. ‘

b.— Germination sur gélatine nutritive. — Les cultures en cellule sur gélatine nutritive poussent avec une très grande rapidité. Les formes-levures germent en longs filaments sur lesquels on voit, dès le début, se former de petites conidies, isolées d’abord, ou en petits groupes, puis se multipliant rapidement sur place en amas volumineux autour

des ramifications du filament primitif. À ce moment (dès le lendemain du semis parfois), ces amas font littéralement disparaître dans leur masse de longues régions des fila-

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\ \2 À [l Fig. 50. — Germination en cellule sur gélatine nutritive: 1, après quatre heures ; — 9, après huit heures; — 3, après treize heures ; — 4, après deux jours.

ments et la culture a tout à fait l'aspect représenté par Laurent dans son mémoire (1). Chaque conidie a pris l'aspect d'une forme-levure ovoïde (fig. 50).

(4) Laurent, loc. cit.

182 LOUIS PLANCHON.

Il est fréquent, après quelques jours (une semaine environ) de voir le Dematium cesser de bourgeonner et se fragmenter, chaque article continuant à donner des levures : celles-ci poussant à leur tour, la culture sur gélatine prend alors un aspect différent du premier : au lieu de quelques filaments assez longs, chargés de formes-levures,

elle est remplie de fragments courts et

ere x TUE ‘ep 7 Q tortueux souvent irréguliers, conidifères pi N aussi, mais moins abondamment (fig. 51). NN

> Bientôt la division ne se fait plus qu’en (/ 37 levure.

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À ce moment, de nombreuses goutte- Fig. 51.— Fragmentation lettes huileuses apparaissent dans les RDS cellules dont quelques-unes commencent à se cutiniser. Les filaments qui persistent s’épaississent fortement : les levures grossissent et se colorent : elles existent seules sur les bords de la culture. Quelquesunes se déforment comme sur la pomme de terre, et deviennent volumineuses, granuleuses, plus ou moins sphériques, épaisses, s’enkystent en un mot. Dans les milieux où la cutinisation est énergique et rapide, elles forment les kystes noirs, isolés, ou développés sur le parcours des lilaments, et que l’on rencontre si fréquemment chez cette espèce.

On retrouve ces deux formes, Dematium pullulans et levures, dans les cultures sur gélatine en boîte de Pétri.

À la longue, le milieu nutritif s'appauvrissant, les cellules se Fig. 52. — Dégénérescence des déforment souvent au lieu de Re se cutiniser, constituent de vagues filaments, ou végètent isolément. Elles sont irrégulièrement arrondies, pleines de gouttelettes huileuses, ont double contour, une cutinisation faible ou nulle ; quelques filaments, dont les cellules granuleuses sont séparées

par des intervalles incolores et vides, y sont mêlés. C'est une forme de dégénérescence (fig. 52): à ce moment, la gouttelette de gélatine a disparu à peu près (15 jours). D'autres fois, les cellules très granuleuses se désagrègent et les granulations sorties s’agglomèrent en amas irréguliers; il ny a plus aucun filament; c’est une autre forme de dégénérescence.

e. — Germination sur acide gallique. — Faisons maintenant germer les formes-levures sous le couvre-objet, dans une gouttelette de la solution d'acide gallique à 1 p. 100, c'est-à-dire dans un milieu à végétation anormale. La germination commence bientôt, en courts filaments, ou en levure, mais d'ordinaire les cellules se dichotomisent presque régulièrement en donnant un double bourgeon à l'extrémité supérieure, bourgeon qui se dichotomise à son tour : les cellules ainsi formées seséparent, maisaprès être assez longtemps restées dans leur position caractéristique.

La croissance estlente.

Il se produit quelques filaments assez malgres donnant parfois des conidies de Demnalium pullulans qui végètent en levure après Fig. 53. — Germination suracide gallique : a, après s'être détachées. Ces un jour; — b, trois jours; — c, quatre jours ; — filaments sont granu- d, viugt jours; —e, vingt-deux jours. leux et semblent bientôt en voie de dégénérescence. Au bout de quelques jours (4 où 5), si la dessiccation se fait sentir, ils deviennent irréguliers, anguleux, tout en continuant à porter quelques spores. En même temps, la cutinisation commence avec ses caractères normaux, soit sur les levures, soit sur la base des filaments. Le contenu des cellules est granuleux et tend à se colorer. La culiui-

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sation se fait sur des végétations caractéristiques, ci-dessus indiquées, et dont la disposition générale peut être comparée à celle d'un rameau d'Opuntia (fig. 53). Ces cellules contiennent de nombreuses granulations. Enfin, si la dessiccation se produit dans la préparation, ces cellules se désagrègent et la cutinisation continue souvent très forte. Les cellules sont alors sphériques, avec de gros globules, et mêlées d’ailleurs à des levures ordinaires mais riches aussi en globules intérieurs.

Cellules initiales. — Les cellules initiales (conidies formes-levures gonflées et cutinisées, ayant germé dans le liquide) restent parfois très nettes et faciles à retrouver même après assez longtemps (eau distillée de tilleul). Dans ce cas, elles sont plus grosses et plus colorées que les cellules qui en partent, et d'ordinaire divisées en deux par une cloison transversale. Elles paraissent terminales ou intercalaires suivant qu'un ou deux filaments en sont partis. Souvent, avant de s’allonger, la cellule primitive donne un court chapelet de grosses cellules arrondies ou ovoïdes fortement cutinisées.

Dans les cultures, on retrouve ces cellules initiales fréquemment mêlées à des levures grossies et cutinisées.