V. — OBTENTION ET CONSERVATION DES SERUMS DE REFERENCE

Nous utilisons indifféremment, comme sérums de référence, soit les sérums de malades convalescents dont le premier titrage effectué er vue du diagnostic de grippe, a révélé un titre élevé, soit des sérums d'animaux infectés expérimentalement : le cobaÿe, animal non réceptif, élabore cependant des anticorps qui peuvent atteindre un titre élevé. Nous avons obtenu de bons résultats par instillation intra-nasale de 0,5 à 1 ml. de liquide allantoïque infecté sous anesthésie à l’éther : les anticorps atteignent leur titre maximum vers le 20° jour pour s’abaisser ensuite et disparaître vers le 100° jour. Si le titre obtenu par une primo-infection est jugé insuffisant, il est possible de provoquer une ascension plus importante par une deuxième instillation.

Nous avons représenté dans le graphique II les résultats de cette immunisation active. Dans ce graphique, un cas particulier doit être signalé : L'un des cobayes inoculé une première fois par le liquide infectant LEE (grippe B), présentait une montée d'anticorps qui s’intégrait normalement dans la courbe du titre moyen, puisque son sérum titrait 1/64 du 9° au 39° jour ; brusquement, sur deux prélèvements ultérieurs, nous avons vu le titre de ses anticorps s'élever au 1/128 puis au 1/256, bien qu'il n'ait pas subi de réinoculation, au lieu de redescendre comme le voudrait la courbe du litre moyen dressé par l'étude de l'ensemble des autres cobayes ; en revanche, ces deux résultats s'intègrent dans la courbe du titre moyen des sérums de cobayes réinoculés : nous en avons conclu que. ce cobaye avait été réinfecté, probablement par contact avec un de ses congénères expérimentalement réinoculés, et nous avons compté ces deux prélèvements aberrents comme appartenant à un cobaye réinfecté, pour la détermination des courbes de titre moyen. Ainsi reclifiées, les courbes d'évolution des titres moyens chez le cobaye expérimentalement immunisé montrent la concordance entre les résultats obtenus avec la souche PRS et la souche LEE ; pour celle-ci,

le graphique montre également l'effet de stimulation notable d’une réinoculation sur le titre.

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Graphique Il.

Nous conservons nos sérums de référence par congélation rapide à — 25° après répartition fractionnée en petits tubes scellés de 0,2 ml. environ, quantité suffisante pour une réaction ; de cette manière, les quelques millilitres de sérum obtenus à partir dun malade convalescent où d’un cobaye infecté nous permettent d’utiliser les même sérums de référence pendant très longtemps : Nous avons vérifié que la plupart de ces sérums conservés à — 25° conservent leur titre immuable pendant plusieurs mois (voir p. 83). Il n’en est pas de même des sérums conservés tels quels au réfrigérateur à 0+4°, qui deviennent rapidement anticomplémentaires.

Il faut noter qu'avant d’être introduits dans une réaction, les sérums doivent être inactivés par passage de 20 minutes au bain-

marie à 56° pour les sérums humains et à 62° pour les sérums animaux.