I. — a, lECHNiaUE USUELLK

Pour étudier la forme et la constitulion des hématies, il est indispensable d'éviter les altérations mécaniques et chimiques de ces éléments. Pendant longtemps on se bornait à ajouter à la gouttelette de sang posée sur une lame de verre un peu d'eau ordinaire ou distillée et de recouvrir d'une lamelle avant de l'examiner. De cette façon, on produisait à la fois des modifications chimiques (gonflement) et des altérations mécaniques (déformation). Plus tard on préparait le sang de la façon suivante : on plaçait une gouttelette de sang sur une lame de verre employée comme porteobjet et on secouait fortement celle-ci, afin d'étendre le liquide en une couche aussi mince que possible et de le faire sécher très rapidement.

a) Dessiccation lente,

G. SchmidS par exemple, étalait le sang sur une lame et le séchait rapidement.

Jetées sur un corps solide, les hématies s'étalent, s'alTaissent et se déforment; d'où modifications des dimensions et de la forme.

Welker * examinait et mesurait les hématies alors qu'elles étaient encore contenues dans leur plasma et recouvertes d'une lamelle qu'il bordait de baume de Canada pour empêcher l'évaporation {loc, cit., p. 262). Le poids de la lamelle comprimait et déformait les hématies.

Martin Bethe^ préparait le sang de la façon suivante : après avoir posé la lamelle couvre-objet sur la lame porte-objet, il laissa tomber une goutte de sang sur les bords des deux lames. Le sang s'infiltrait de lui-même entre les deux lames. La pénétration des

i. Die Diagnostik vtrdâchtlicher Flecke in Criminalfdllen, Leipzig, 1848.

2. Grosse, Zabi, Volam, Oberflftche und Farbe der Biutkôrperchen bel Henschen und bel Tbieren, Zeit$chrift f, rationnelle mecitcin, 3' série, t. XX, p. 257, 1864.

3. Beitr&ge zur Kennloiss der Zabl-und Maasverbâltnisse der rothea Blulkôrpercheo, MorphoL Arbeiten de SchwalbCy t. I, p. 207, 1892.

572 ÉD. REITERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFÈRES,

hématies entre deux lames, auxquelles elles adhèrent, a pour effet de les aplatir et de les déformer.

Pour étaler le sang en une couche mince et pour obtenir une bonne fixation par la chaleur, on procède, depuis Hayem elEhrlich, de la façon suivante : on touche la gouttelette de sang obtenue par piqûre avec les bords de deux lamelles couvre-objet appliquées Tune sur l'autre ; dès que le sang a pénétré dans l'espace capillaire, on sépare les deux lamelles et on les soumet à une température de 106° avant de renverser la lamelle sur la lame porte-objet. D'autres étalent le sang en une couche mince en se servant d'une aiguille ou d'une baguette de verre qu'ils promènent horizontalement sur la lame qui supporte le sang. Ensuite ils passent la lame sur la lampe à alcool. De telles manipulations, que je ne crains pas de qualifier de grossières, conservent peut-être la structure du proloplasma, mais déforment manifestement l'hématie.

Pour éviter la compression, il est des histologistes qui interposent entre lame et lamelle, avant d'y faire pénétrer la goutte de sang, de minces objets (fibres musculaires, cheveux, paraffine, ciment). Mosso (loc'cit.y p. 12) a montré que les hématies maintenues dans un espace capillaire et en Tabsence de toute compression, modifient leur forme et s'altèrent : le contact des hématies avec le verre suffit pour altérer ces éléments.

Les hématies sont, à mon avis, de petites masses de consistance gélatineuse, et, elles représentent des éléments éminemment altérables et vulnérables. Bien que les hématologistes soient tous d'accord sur ce point, ils emploient et préconisent des procédés d'une brutalité sans exemple : on fait des tartines de sang qu'on aplatit ou dessèche; puis on se fonde sur ce mode de préparation pour estimer la forme et les dimensions de ces éléments figurés.

Il n'est pas douteux que la chaleur est un des meilleurs fixateurs de l'hémoglobine et mérite d'être employée pour contrôler les résultats d'autres méthodes; mais gardons-nous d'y avoir recours pour déterminer la forme des éléments. A quoi peuvent servir les précautions les plus minutieuses que recommandent les hématologistes, quand ils commencent par déformer les éléments avant de les fixer? Le sang obtenu par piqûre ne doit pas être étalé sur lame avant d'être fixé; si nous ponctionnons les vaisseaux et prélevons le sang à l'aide d'une pipette pour le porter dans le liquide

fixateur, nous lésons et déformons les hématies et nons ne fixons plus que des formes altérées.

b) Examen du sang dans Us liquides indifférents et les fixateurs.

Gomme Hermann Franz MûUer* le fait remarquer avec raison^ on ne peut faire fond sur les résultats annoncés par les auteurs quand leur méthode d*examen est défectueuse.

Le sang se conserve-t-il plus ou moins longtemps dans certains liquides, dits indifférents ou conservateurs ?

Max Schuitze employait le liquide amniotique additionné d'iode.

Rindfleisch et Boettcher préféraient Thumeur aqueuse ou la lymphe. Arnold se servait d*une solution de 0,6 p. 100 de NaCl et colorait au vert de méthyle. Brandt étudiait le sang humain dans le blanc d'œuf frais.

Il en est qui ont conseillé d'employer certains médiums gras, pour y conserver le sang et étudier la forme réelle des hématies.

Lôwit [Archiv f. experiinent. PathoL u. Pharmakol, t. XXVIII, p. I889 1888) préconisait un mélange d*huile de ricin et d'huile de foie de morue.

Plehn [Aetiologie und Klinische Malariens tudien, Berlin, 1890) préférait Thuile de paraffine dans laquelle les hématies conserveraient leur forme normale peadant deux ou trois jours.

Freund, puis Triolo employèrent Thuile de vaseline.

D'autres donnent la préféi*ence à l'huile d'olive pure.

J'ai expérimenté avec l'huile de vaseline, l'huile de paraffine, ainsi qu'avec celle d'olive« J'ai laissé tomber le sang du vaisseau ouvert dans Tune ou l'autre de ces huiles. En imprimant quelques secousses au verre de montre qui contient l'huile et les quelques gouttes de sang, on peut facilement mélanger le sang à l'huile . A Taide d'une pipette, on porte ensuite le sang et l'huile sur la lame pour l'étudier au microscope. Les hématies s'allèrent rapidement dans l'une et l'autre huiles; au bout de peu de temps déjà, îl y en a i>eaucoup qui ont pris une forme étirée, d'autres sont devenues polyédriques, anguleuses ou épineuses. En un mot, les médiums gras déforment et altèrent très vite les hématies; de plus, ces éléments s'y décolorent, de sorte qu'il n'y a que désavantage à recourir à ces médiums pour l'étude de leur forme. Quant à vouloir s'en servir pour comiaitre la structure des hématies, ce serait du temps perdu.

1. Die Uethodeo der Bltttaatersachuog, CentralblaU f. aUgin. PûUtelêgie u. fmlkêl. Anat.j t. UI, p. 193 et 240, 1892. Je renvoie i ce trtuil po«r rindex biUiogi«f»lùqte.

jouiif. DE l'anat. et de u physiol. — T. xui. 37

574 ÉD. RETTERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFÈRES,

De bonne heure, on songea à fixer et à colorer les élëmenls da sang comme on fait des tissas en général.

L'acide osmique a été introduit en hématologie parMaxSchaltze et passe pour l'un des meilleurs fixateurs du sang (Voir p. 875 les méfaits qu*on lui impute).

Le bichlorure de mercure constitue l'élément essentiel des liquides de Pacini et de Hayem.

Mosso {loc. cit. y p. là) démontre que la solution de bichlorare de mercure, telle que remployait Pacini (2« formule, bichlorure de mercure 1 gramme, chlorure de sodium 2 grammes, eau distillée 200 grammes) conserve le mieux la forme des globules rouges da sang de poisson. Les hématies, il est vrai, s'y décolorent et le sérum du sang se coagule.

LOwit employait le chlorure de platine qui fixe bien, mais laisse sortir Thémoglobine des hématies.

On a eu recours aux coupes pour étudier le sang.

Biondi fixe le sang dans Tacide osmique où il se forme un dépôt; après une ou vingt-quatre heures, il transporte avec une pipette le sang sur l'agar; il fait les coupes dans Tagar ou la paraffine.

Sprong obtient le sang par piqûres et le fixe dans le liqoide de Flemming. Après lavage et déshydratation, il l'enrobe dans la celloïdine.

Pour étudier la thrombose, Eberth et Schimmelbusch ' excisent les vaisseaux sanguins après ligature et les portent dans ralcool.

Deetjen {Archives de Virchow, t. LXIV, 4901) fait bouillir de Tagar dans Teau et cette solution filtrée et additionnée de metaphosphate de soude et biphosphate de potasse est étendue, puis séchée sur la lame porte-objet. Avant d'y mettre la lamelle où est déposée la goutte de sang, il chauffe à 40^ la lame couverte d'agar. Pour fixer ensuite les éléments du sang, il fait couler entre lame et lamelle du liquide de Flemming ou de Tacide osmique.

Deckhuyzen * reçoit le sang dans une solution isotonique de sel marin 0,90 à 0,95 p. 100 et prend le sang de la solution avec une pipette.

Deckhuyzen conseille de plus remploi de Tosmacet 3/1 ou 9/i (3 ou 9 parties d'acide osmique à 2 p. 100 et une partie d*acide acétique à 6 p. 100 contenant 1/8 p. 100 de bleu de méthylène). On colore

. 1* Virchow't Archivy t. CIII et CV, 1886. 2. AnaUmitcher Anzeigert t. XIX, 1901.

ensuite, avec rhémaloxyline ou l'hématoxyline au fer et les couleurs d*aniline.

Ces divers procédés ne sont pas courants ; car, pour les classiques, la technique de ta coloration du sang a pour base la dessiccation préalable du sang.

Avant d'exposer le procédé de flxation de Weidenreich, il convient de dire un mot de l'action de Tacide osmique sur les hématies. Selon les uns, l'acide osmique fixerait les hématies, comme les autres éléments, dans leur forme; pour les autres, l'acide osmique gonflerait ou ratatinerait les hématies.

Weidenreich ( Voir VhisioHque, p. 899 et 604) a comparé le diamètre des hématies fixées par l'acide osmique à celui des hématies préparées par voie sèche. Constamment les hématies fixées par l'acide osmique présentent une diminution de diamètre.

Ce fait exprimerait pour Weidenreich une diminution de volume ; Jolly (Folia haematologica, t. III, p. 184), au contraire, y voit les indices d'une augmentation de volume.

Il s'agit de raisonner pour s'entendre : les classiques prennent comme étalon le plus grand diamètre des hématies quand celles-ci sont fixées par dessiccation ou écrasées entre lame et lamelle. Ce sont là des formes altérées : ni les solutions de sel marin, ni les fixateurs, tels que l'acide osmique, les solutions de sublimé, ou les mélanges de sublimé et de chlorure de platine né montrent des hématies aussi longues; la masse d'un corps dépend de ses trois diamètres, et, pour apprécier celle des hématies, les auteurs n'en considèrent qu'un seul.' Or, le procédé de préparation qu'ils emploient a toujours pour effet d'aplatir l'hématie et d'allonger l'un des diamètres. C'est ce dernier qui serait, à leurs yeux, le diamètre normal.

F. Weidenreich * a essayé de fixer les éléments du sang avant de les dessécher, pendant qu'ils sont fixés ou avant que ceux-ci soient étalés. Il craint, d'autre part, de recevoir le sang dans le fixateur.

Voici le procédé qu'il préconise : il met 8 centimètres cubes d'acide osmique additionné de 10 gouttes d'acide acétique dans une petite cuvette et y place les lames porte-objet bien nettoyées. Il recouvre d'une cloche et les y laisse 2 minutes au moins. On fait une piqûre au doigt, on fait glisser la lame de verre (face exposée aux vapeurs osmiques) sur la petite goutte de sang et l'on reporte

1. Eine nene éinfache Méthode znr Darslellung von Blutlrockenprâparaten, Folia haernatologica, 3' année, 1906, p. 1.

576 ÉD. RETTERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFfeRBS,

la lame dans la cuvette pour Texposer de nouveaa aax vapears d'acide osmique, comme dans une chambre humide. Après dessiccation, on passe la lame deux ou trois fois sur une flamme, pour Tarroser, pendant une minute, d'une solution de permanganate de potasse et la laver finalement à l'eau distillée. i

On peut colorer ensuite de diverses façons.

Sur ces préparations, les hématies sont biconcaves et cupuliformes. On en voit qui commencent à se mettre en pile. Lorsque la goutte de sang est exposée à Fair avant d*étre étalée, les formes biconcaves sont plus nombreuses que les hématies cupuliformes.

L'acide osmique gonflerait les hématies d'après certains auteurs. Weidenreich prouve que non.

11 met une goutte d'acide osmique sur le doigt et fait la piqûre du doigt sous l'acide osmique. Les hématies pénètrent dans l'acide osmique à mesure qu'elles sortent des vaisseaux ouverts. Dans le sang ainsi fixé, les hématies sont cupuliformes. C'est là leur forme naturelle et non le résultat du gonflement. Pour s'en convaincre, il suffit de faire une préparation de sang d'après la méthode classique : alors toutes les hématies restent biconcaves même si on y ajoute une goutte d*acide osmique. Au lieu de gonfler, l'acide osmique rapetisse plutôt les hématies, ce dont on s'assure, dit l'auteur, par la mensuration des hématies examinées dans leur plasma, d'uoe part, ou fixées de l'autre, par l'acide osmique.

Les expériences et les mensurations que j'ai faites après l'emploi de l'acide osmique, comparé aux autres fixateurs, m'ont prouvé que l'acide osmique fixe les hématies dans leur forme et en conservent les dimensions réelles, sans les gonfler ni les ratatiner. Voici un résumé de mes constatations sur le sang du cobage et du chat. Pour le fixer, j'ai fait tomber le sang du vaisseau directement dans une solution d'acide osmique à 1 p. 100; d'autre part, j'y ai plongé pendant vingt-quatre heures un fin vaisseau ligaturé aux deux bouts. Les hématies du cobaye fixées par l'acide osmique soat les unes sphériques 3, 4 ou 8 u) ; d 'autres hémisphériques, longues de 8 {JL 5 à 6 (& et larges de 2 a 3 à 4 (jl; d'autres encore sont lenticulaires ou discoïdes et présentent un grand diamètre de6 à 7 ^ sur â à 3 ft de large. La portion hémoglobique parait sombre, tandis que le ménisque anhémoglobique a une teinte rosaire et est limité parie contour sombre de l'ombilic hémoglobique. Les hématies du chat de tout âge, fixées pendant vingt-quatre heures dans l'acide osmique

à i p. 100, possèdent la même forme et les mêmes dimensions qu'au sortir du sublimé platinique. L'acide osmique ne gonfle, ne ratatine ni altère en aucune façon les hématies. Celle opinion erronée provient, je le répèle, d'un point de départ et d'un raisonnement faux. On a considéré jusqu'aiiyourd'hui comme normales la forme et les dimensions des hématies préparées par les procédés habituels qui ont pour effet d'aplatir, d'allonger et de déformer ces éléments par pression mécanique. Pour éviter cette méprise, il faut, je ne saurais trop y insister, fixer les hématies avant de les mettre en contact avec un corps solide.

b, — Ma méthode o'exaken des hématies.

Pour prévenir les altérations mécaniques, il faut recevoir le sang dans la solution ou le fixateur avant de le déposer sur la lame de verre. La plupart des hématologistes ne tiennent aucun compte des altérations produites par le contact, et, le plus souvent, ils tirent le sang des vaisseaux avec une seringue de Pravaz.

fixation. — J'ai songé à combiner l'action du chlorure de platine préconisé déjà par Lôwll pour l'élude du sang à celle du bichlorure de mercure dont les effets fixateurs sont bien connus.

Ce mélange dit de Rabl se compose : 1*^ d'un volume de chlorure de platine à 1 p. 100; 2« d'un volume de sublimé (solution saturée aqueuse); 3*" d*un volume d'eau distillée. Il est très pénétrant, il fixe bien, durcit, et ensuite, après avoir été bien lavés à l'eau puis à l'alcool, les éléments sont faciles à colorer.

Pour effectuer la fixation des hématies, sans lésion mécanique, on peut procéder de deux façons différentes * :

A. -— S'il s'agit d'un animal, on ouvre une veine ou l'on fait une incision assez large pour que le sang s'écoule et tombe dans le fixateur contenu dans un flacon ou un verre de montre. Chez l'homme, on fait à la pulpe du doigt une piqûre assez profonde pour que le sang sorte, non pas en bavant ou en suintant, mais par larges gouttes qui tombent d'elles-mêmes dans le fixateur. Dès que le sang touche le fixateur, il se coagule instantanément : il reste une pellicule à la surface de la solution; mais la plus grande partie gagne le fond, où il se forme un caillot qui adhère au vase. Au

1. Voir mes notes à la Société de Biologie, 46 join, 7 et 21 juillet 1906.

578 ÉD. REITERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFÈRES,

bout de vingt-quatre ou quaraute-hait heures, od détache el caillot, on le fixe avec une épingle sur un morceau de liège, on le passe à l'alcool, puis on Tinclut dans la paraffine pour le débiter en coupes, qu'on colle sur verre. Après avoir débarrassé les coupes de la paraffine, on les lave à l'eau courante pour les colorer ensuite. Au lieu de faire des coupes, on peut faire des frottis qu'on colle également à Teau albumineuse.

B. — Sur l'animal vivant, ^n dénude une veine sous-cutanée ou abdominale (à parois minces). En deux points, distants de quelques centimètres, on passe un fil et, après ligature, on enlève le tronçon vasculaire qu'on plonge immédiatement dans le fixateur. Après un séjour de un ou deux jours, puis lavage à l'eau et à Talcool, on fait des frottis ou des coupes, comme précédemment. Grâce à Tobligeance de M. Alglave, Tilloy et moi-môme {Soc de Biologie, M juillet 1906) nous avons eu également à notre disposition plusieurs tronçons de veine saphène interne d'un homme de quarante-neuf ans, excisés sur le vivant et fixés frais.

C. — Il n'existe pas de mélhode qui permette d'étudier le sang vivant hors des vaisseaux. Le contact des hématies avec la lame de verre ou l'objectif à immersion déforme instantanément ces éléments. Sur l'animal vivant, l'examen des fines membranes (mésentère ou ailes de chauve-souris) entraine des compressions et des déformations mécaniques. Il faut donc recourir à des liquides, tels que les sérums ou les solutions de sel physiologiques à divers degrés de concentration, sans perdre de vue qu'il n'existe pas de liquide conservateur ou indifférent pour les hématies. Ces liquides permettent d'éviter les lésions mécaniques et d'étudier pendant quelques minutes, à l'objectif à immersion à eau, les hématies sans altérations chimiques par trop considérables. Sur ce point, je sois d'accord avec Hamburger qui a étudié d'une façon approfondie les propriétés osmotiques des hématies : il avoue qu'il n'existe pas de solutions indifférentes; quelle que soit la proportion de la solution saline, elle modifie toujours plus ou moins les hématies. L'isolonie varie môme selon l'espèce animale et l'âge de l'animal.

Le contact de l'air n'est pas indifférent non plus : le sang contenu dans une solution de NaCl à 0,9 p. 100 entre lame et lamelle montre des hématies bien conservées pendant plusieurs jours, alors que le môme sang conservé dans la môme solution, mais à Tair libre, présente des hématies crénelées ou épineuses .

LEUR DiVELOPPBMENT ET LEUR VALEUR CELLULAIRE. 579

IL — Exposé des faits*.

a) Fixation et Coloration. — La figure V (PI. VIII) représente un certain nombre d'hématies de Cobaye (veinule intestinale ligalurée et traitée suivant le procédé indiqué plus haut, mélange de Rabl, etc.)

Les hématies a, b et c sont vues de face : l'hématie a est teinte en violet foncé sur sa plus grande étendue, ses bords seuls montrent un liséré rouge. La face tournée vers Tobservateur est donc constituée par une substance qui a partout de rélection pour Thématoxyline au fer, sauf le liséré périphérique qui se colore par le rouge Bordeaux. En comparant de telles hématies avec des préparations fixées par le liquide de Zenker ou par voie sèche, on s'assure que la portion violette est composée de protoplasma hémoglobique, et, la portion périphérique ou rouge de protoplasma peu ou point hémoglobique. Nous dirons donc que Thématie a présente, sur Tune des faces, une masse centrale hémoglobique et un liséré anhémoglobique. Les hématies 6 et c de la figure V sont vaes par la face opposée à celle que montre Thématie (a). Outre le liséré anhémoglobique, on remarque, au centre, un point clair, teint en rouge.

Pour se rendre compte de la répartition de la substance hémoglobique, il est nécessaire d'examiner de champ les hématies fixées et colorées de la même façon. Les hématies d, e et /'se présentent sous cet aspect : il est facile de voir que dans les formes d et e, la portion hémoglobique affecte la forme d*une nacelle ou d'une cloche. Le corps de la nacelle occupe les deux tiers de l'épaisseur de Tune des faces, tandis que les extrémités de la nacelle se recourbent vers l'autre face sans arriver au contact. En se recourbant Tune vers l'autre, les deux extrémités contiennent et embrassent une sorte de bouchon coloré en rouge. Cet épaississement ou ménisque anhémoglobique n'occupe pas l'intérieur même de l'hématie; il est excentrique et périphérique par rapport à la

l.Lesprincipaax résaltats ont^lé annoncés dans des notes préliminaires : 1" Retterer, De la forme des hématies des Mammifères et de lears parties constitoantes, Soe. de Biologie^ 16 jnin 1906, p. 1003; 2' Des hématies da chat et de lears parties constituantes, Ibid., 7 jaillet 1906, p. 9; S** Retterer et 6. Tilloy, De la forme de la taille des hématies humaines et de leurs parties constituantes, /6id., 21 juillet 1906, p. 111.

S8Q iD. REITERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFÈRES,

nacelle hémoglobique. De plus, il se continue de toutes paris avec le liséré anhémoglobique ou pellicule corticale de l'hémalie. La comparaison des diverses formes (a, 6, c, d et e) vues, sous divers aspects, prouve que la pellicule corticale s'étend sur toute la surface de l'hématie; mais on ne la voit nettement qne sur les bords et au niveau du ménisque anhémoglobique. L'hématie /, enfin, dont Tépaisseur n*atteint que la moitié de la longueur, ne possède qu'un mince liséré anhémoglobique, sans épaississement sur les faces qui sont légèrement excavées.

Si l'hématie / est du double environ plus longue que large, qu'elle approche de la forme discoïde, c'est, nous le verrons plus tard, qu'elle a perdu la plus grande partie de son protoplasma anhémoglobique. L'hémalie f (le développement le prouve,) représente un élément vieux par rapport aux hématies a, i, c, d et e de la figure V. Les formes a, b, c, d, e se rapprochent plutôt de la sphère, de l'hémisphère ou de Tellipse^ tandis que la forme /représente un disque très épais. Au total, les hématies du Cobaye adulte sont des solides et non point des surfaces.

Les hématies du chien, du lapin et de l'homme possèdent des formes et une constitution identiques à celles du Cobaye. Je n*ai pas cru utile de faire reproduire des séries de dessins analogues à ceux de la figure V. Cependant on a représenté (fig. IV) la forme d'une hématie humaine (veine saphène interne du sujet de quarante-neuf ans) : cette hématie vue de champ rappelle l'hématie / du Cobaye; elle en diffère par la minceur de sa portion hémoglobique et l'épaisseur considérable de la portion anhémoglobique qui, sur chacune des faces, forme un ménisque à surface externe très convexe. En étudiant attentivement ces deux ménisques il semblerait que la substance anhémoglobique commence à se raréfier et à se résorber vers le centre de chacune des faces. C'est la résorption ou ta fonte du protoplasma anhémoglobique qui me parait déterminer la transformation des hématies sphériques, hémisphériques ou elliptiques en hématies lenticulaires ou discoïdes. La minceur de la portion hémoglobique semble indiquer de plus que le protospiasma hémoglobique perd, à un moment donné, l'hémoglobine pour dégénérer en une masse anhémoglobique.

Décrivons de suite la figure III qui représente deux hématies humaines de sang reçu dans une solution de sel marin à 0,10 p* iûO et examinées immédiatement à l'objectif à immersion à eau. La

portion hémoglobique est dessinée en sombre, tandis que le liséré anbémoglobique et Tépaississement anhémoglobique de l'une des feces sont figurées en clair. Il est évident que ces deux hématies humaines correspondent aux formes d ei.e du sang de Cobaye.

Lorsque les hématies sont fixées lentement dans Tintérieur du vaisseau grâce à Tépaisseur des parois qui rend la pénétration du fixateur fort difficile (veine saphène interne variqueuse), elles prennent nne orientation spéciale : elles se disposent de lelle façon que le grand axe des hématies reste parallèle au grand axe du vaisseau. De plus, la concavité de la portion hémoglobique de l'hématie regarde l'axe du vaisseau et le ménisque anhémoglobique de toutes les hématies est tourné de ce côté.

Cette orientation me semble déterminée par la pesanteur spécifique différente des portions hémoglobique et anhémoglobique : sous rinfluence du repos et de la situation horizontale du vaisseau, les hématies qui flottent dans le plasma tendent à se placer de telle sorte que leur ménisque anhémoglobique en occupe le sommet ou point culminant. C'est dans celte position que le liquide fixateur atteint l'hématie et le fixe dans sa forme.

Lorsque le sang est sorti des vaisseaux, les hématies s'altèrent avant de se déposer. Dans ces conditions, elles ne se disposent pas en strates horizontaux, leur ménisque anhémoglobique tourné en haut. Leur portion anhémoglobique s'altère, devient visqueuse et s'agglutine à celles des hématies voisines. On croirait voir des godets empilés les uns dans les autres. C'est là un phénomène qui rentre dans le groupe de ceux qui déterminent la réunion en piles des hématies (voir p. 612).

b) Examen du sang dans des solutions de chlorure de sodium de concentrations variées. — Pour éviter tout contact du sang avec un corps solide, on fait une piqûre profonde au doigt, qu'on plonge dans des solutions de chlorure de sodium à 0,5, 0,6, 0,7 ou 0,9 p. 100. Le sang coule directement dans la solution et se dépose au fond du vase où on le recueille avec une pipette pour Tétudier de quart d'heure en quart d'heure. Afin de prévenir toute déformation de cause mécanique, on dépose le sang de la solution dans une excavation pratiquée sur la lame porte-objet. On l'examine avec l'objectif à immersion à eau sans le recouvrir d'une lamelle, ou bien, après l'avoir recouvert d'une lamelle, et lutée à la paraffine, on n'emploie qu'un grossissement moyen (objectif 7 de Stiassuie^

582 ÉD. RETTERER. — DES HÉMATIES DBS MAMMIFERES,

par exemple). J'ai fait Texamen da sang de cinq personnes de Fàge de vingt-six, quarante et cinquante ans.

Examinées de suite après que le sang a été reçu dans une solution de chlorure de sodium à 0,5 on 0,6 p. 100, les hématies humaines sont sphériques, hémisphériques, elliptiques, otalaires ou lenticulaires. Les formes des hématies sont plus variées dans les solutions de chlorare de sodium qu'après fixation par le soblimé platinique. Les sphériques ont S à 6 {a; les hémisphériques, les elliptiques ou les ovalaires ont un grand diamètre de 7 à 9 |i et on petit diamètre de 3 à 4 {i. Les lenticulaires peuvent atteindre une longueur de 8 à 9 {i, mais leur petit diamètre se réduit alors à 2 oa 3tx.

Malgré leur forme et leurs dimensions variables, elles se composent d'une portion hémoglobique qui flgure une cloche, une nacelle ou un croissant d'autant plus large que Thématie est moins longue. La portion hémoglobique (fig. III, pi. VIII) est limitée par un contour ou ligne sombre qu'entoure une auréole claire, aahémoglobique de quelques dixièmes de {&. Sur les hématies sphériques et hémisphériques, le protoplasma anhémoglobique s'accamule en un amas ou ménisque biconvexe dans la concavité de la nacelle hémoglobique. Souvent, comme dans la figure III, il fait une saillie en forme de pointe. Les hématies elliptiques, ovalaires ou lenticulaires diffèrent entre elles par le développement plus ou moins considérable de la portion anhémoglobique, qoi figure un ménisque saillant sur les premières formes et se réduit i un corpuscule clair, occupant la concavité des hématies lenticalaires.

Lorsque les hématies sont très nombreuses dans la préparation et se touchent par leur circonférence tout en flottant dans la solation, elles se déforment réciproquement. Aux points où elles arrivent en contact, elles montrent des facettes, au niveau desquelles elles semblent réunies entre elles par des lignes claires. La partie hémoglobique et sombre des hématies et les lignes claires rappellent l'image d'un épithélium sur lequel on aurait obtenu avec le nitrate d'argent une imprégnation positive. Les lignes claires résultent manifestement de l'agglutination et de la fusion des zones corticales, anhémoglobiques.

Dans la solution à 0,8 ou 0,6 p. 100 les hématies conservent pendant une heure environ une forme et des dimensions sembla-

bies à celles des hématies flxées dans le soblimé platiniqae. Elles s'y décolorent très vite et se hérissent d'épines ou deviennent crénelées.

Dans la solution à 0,7 p. 100, les épines semblent partir de la portion hémoglobique et y apparaissent plusvite et plasnombreases.

Dans la solution à 0,9 p. 400, les crénelures et les épines se montrent immédiatement, surtout si on laisse la solution, qui contient le sang, exposée à Tair. Si, par contre, on monte immédiatement le sang, avec la solution de sel marin dans Texcavation de la lame porte-objet et qu'on lute la préparation, les hématies y conservent leur forme pendant plusieurs jours. Je ne saurais dire si c'est l'absence d'oxygène ou la faible proportion, bien vite épuisée, de chlorure de sodium qui produisent cet effet.

Les hématies des mammifères domestiques se comportent dans les solutions de chlorure de sodium comme les hématies humaines. Ces faits montrent que, dans les solutions salées à 0,9 p. 100 de NaCl environ, l'hémoglobine est mieux conservée, fixée pour ainsi dire; mais la forme de la portion hémoglobique se modifie puisqu'il y apparaît des saillies et des épines. Les solutions plus diluées (0,5 à 0,6 p. 100) maintiennent plus longtemps la forme et les dimensions bien que l'hémoglobine sorte de la portion hémoglobique et se dissolve dans la solution salée.

On a fait de nombreux essais avec les solutions salines (chlorure de sodium, sulfate de soude, bichromate de potasse, etc.) pour déterminer le degré de concentration qui maintienne les dimensions normales des hématies. Depuis les recherches de Yries, on sait que chaque espèce de cellule végétale exige une solution de concentration spéciale, dans laquelle elle ne gonfle, ni se ratatine. Dans une telle solution elle n'absorbe ni perd de l'eau; la solution est isotonique. Dans les solutions diluées (hypotoniques)^ la cellule gonfle, tandis qu'elle se ratatine dans les solutions concentrées (hyperisotoniques).

Peut-on comparer l'hématie à une cellule végétale? Peut-on assimiler Técorce anhémoglobique de l'hématie à la membrane ou paroi d'une cellule végétale?

Les propriétés et la nature de ces deux formations me semblent bien différentes : dans l'hématie, la pellicule périphérique est composée de protoplasma ductile et visqueux, tandis que la cellule végétale est entourée d'une membrane cellulosique très résistante.

584 ÉD. RETTBREa. — DES HÂMÀTIES DES MAMMIFÈRES,

Il me semble difficiie d'assimiler ces deux formations au point de vue de la structure ou de la perméabilité.

D'autre part, il est difficile de déterminer le degré de concentration d'une solution saline qui maintienne les dimensions de rbëmatie. On a l'habitude de considérer comme normales les dimeosions qu'on observe dans le sang examiné dans son propre sérum on préparé par dessiccation. Or, nous avons vu (p. 571) que le conlacl de l'hématie avec la lamelle suffit pour déformer cet élément et que tous les résultats obtenus de cette façon sont faussés par le mode de préparation même.

Les observations et les considérations précédentes concordent avec celles que Weidenreich a faites dans des conditions analogues. mais à des points de vue tout différents.

Weidenreich *, après avoir décrit le premier des hématies campanuliformes dans le sang circulant, a déterminé le degré de concentration d'une solution de chlorure de sodium conservant cette même forme. C'est une solution de sel marin à 0,65 p. iOO. D'autre part, la congélation montre que le degré de concentration du sérum du sang normal est de 0,9 p. 100. « Ces faits établissent, dit Weidenreich, que la concentration seule ne safOt pas pour maintenir la forme des hématies; outre les phénomènes osmotiques, il est d'autres facteurs qui contribuent à maintenir la forme des hématies. »

En résumé, tant que la solution saline reste isotonique au suc cellulaire d'une cellule végétale, celle^i y conserve ses dimensions: elle n'augmente ni ne diminue de volume. Pour ce qui est de l'hématie anucléée des mammifères, les points de comparaison sont bien plus difficiles à établir, car l'examen du sang à l'état frais ne peut se faire et nous sommes obligés de prendre comme point de repère les résultats fournis par le sang fixé.

Les patientes et remarquables recherches de Hamburger nous montrent une foule de faits intéressants, mais ne lèvent pas tous les doutes. En voici quelques exemples.

Hamburger ^ a mesuré les hématies du cheval dans le sérum du sang, dans la solution isotonique (NaCl 0,92 p. 100) et dans des solutions de concentrations variées.

1. Bas Schicksal der roten BluticOrperchen im normalen Organismus, Anato»*»^ Anzeiger, t. XXIV, p. 186, 1903.

2. Otmotitcker Druck und lonenlehre, 1 1, p. 197, Wietbaden, 190â,

LEUR DéVELOPPEMENT ET LEUR VALEUR CELLULAIRE. 585

Voici le résultat de 40 measaratioos.

Hématies de cheval dass le sérum de sanf? de cheval, (i |x, 4

Naa2 p. 400 5 ,1

— 0,6 — Japlupart des hématies ont perdu leur

hémoglobine.

Hamburger (loc. cit., l. I, p. 199) dit : c< Quelles que soient les solutions (salines ou sucrées) qu'on emploie (sérum dilué d'eau, lymphe normale ou pathologique), les hématies y perdent constamment leur fonne biconcave et leur grand diamètre y diminue ».

Ces modifications ne persistent pas^ car si Ton remet dans le sémm sanguin les hématies qui ont séjourné dans les solutions salines, elles reprennent leur forme biconcave et se disposent de nouveau en piles.

Selon Hamburger (t. I, p. 172), le sang qui n'est pas défibriné exige une solution plus concentrée que le sang défibriné pour que Thémoglobine ne sorte pas des hématies. Ceci serait dû à ce fait, qu'an contact de Tair, le sang défibriné est plus riche en oxygène que le sang qui n'est pas défibriné.

Hamburger (loc, cit., p. 200) note que les hématies perdent leur forme biconcave dans la lymphe qu'il a rendue isotonîque ou dans une solution isotonique.

Elles y prennent une forme sphériqoe. Il ajoute qu*il ne peut expliquer le fait.

Hamburger conclut ainsi : La solution saline la moins concentrée qui conserve l'hémoglobine dans les hématies n*est niUeneol indifférente pour l'hématie, car celle-ci y gonfle. Il faut une solution plBS concentrée pour que le volume de l'bémaiîe soit maintenu.

Pour les hématies des mammifères, la concentration du sel marin oscille autour de 0,6 p. 100 lorsqu'elle conserve aux bémaiies leur hémoglobine. Pour les maintenir dans leur forme, il faut une solution contenant 0,9 p. 100 de chlorure de sodium.

La solution de 0,6 p. 106 de NaCl n'est pas physiologique pour les hématies humaines.

Pour expliquer ses résultats. Hamburger émet Thypothèse suivanle : l'hènatîe se composerait d'un réseau protoplaamiqne dont les mailles contiendraient une substaace fluide. €'est ce contenu

586 ÉD. REITERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFÈRES,

iDtraglobuIaire qui attirerait Teau, àTexclusion du réseau protoplas. inique. L'écorce protoplasmique de l'hématie serait perméable à Teau seulement et non point aux cristalloïdes.

C'est là une structure hypothétique, destinée à expliquer les phénomènes osmotiques; nous verrons (p. 887 et 603) que laflxation et les colorations conduisent à des conclusions tout autres. A mon avis, les solutions salines agissent selon leur degré de concen^ tralion sur les hématies comme agents soit altérants^ soit fixateurs. Si Thémalie est si difficile à conserver dans sa forme, c'est qu'elle représente un protoplasma très niou, qui, comparé au protoplasma des cellules fixes de l'organisme, est arrivé à un stade très avancé de révolution, stade intermédiaire entre l'état solide et l'état fluide.

c) Résultat, — Le sang des mammifères adultes et bien portants possède des hématies de formes diverses : sphériques, hémisphériques, elliptique.^, ovalaires et discoïdes. Chacune de ces formes, comme le montre le développement, correspond à un stade évolutif déterminé; Thématic sphérique représente ;rétat jeune ou initial.

L'hématie des mammifères adultes et bien portants, c'est-à-dire anucléée, se compose d'une portion hémoglobique centrale ou axiale et d'une portion anhémoglobique, corticale : la première a la forme d'une nacelle; pour combler la concavité de la nacelle, la seconde s'épaissit et se renfle en un ménisque anhémogiobique qui fait souvent saillie extérieurement. Les classiques, prenant rhémalie anucléée pour une cellule entière, quoique modifiée, ont décrit le ménisque anhémogiobique comme le reste du noyau : pendant que le prétendu corps cellulaire se chargerait d'hémoglobine, le noyau s'atrophierait. Par le développement (voir 2« partie), nous verrons que cette assimilation est inexacte; en réalité, la portion chromatique du noyau devient hémoglobique,' tandis que la substance achromatique du noyau se transforme en une portion anhémogiobique dans laquelle on distingue : l"" une couche corticale et i^ un ménisque (prétendu reste nucléaire, noyau atrophié, corpuscule endoglobulaire, nucléoïde, substance chromatophile endoglobulaire, etc.) (voir l'historique, 2' partie).

Les hématies anucléées des mammifères sont entourées et limitées par une enveloppe de quelques dixièmes de (&, formée de protoplasma transparent, anhémogiobique, ductile et visqueux. Le développement nous renseignera sur l'origine et la nature de cette enveloppe (voir 2« partie) qui est d'autant plus épaisse que

l*hématie est plus jeune. Elle peut, sur l'hématie vieille, disparaître par fonte et alors Thëmatie, réduite au croissant hémoglobique, devient lenticulaire ou discoïde.

Pour déterminer la forme réelle des hématies des mammifères, il faut tenir compte des deux portions hémoglobique et anhémoglobique. Si Ton examine les hématies dans un liquide prétendu conservateur ou un sérum et qu'on ne porte son attention que sur la portion hémoglobique, celle-ci figure un disque, une nacelle ou une cupule (fig. III, pi. VIII), de moitié ou du tiers environ plus long que large. Si l'on ne tient pas compte de l'écorce et surtout du ménisque anhémoglobique, la portion hémoglobique ligure un croissant, une cupule ou une cloche. Weidenreich (voir Thistorique) a montré des faits qui sont exacts, mais qui se rapportent uniquement à la portion hémoglobique. Il néglige l'écorce et le ménisque anhémoglobiques, de sorte que ses conclusions ne sont pas conformes à la réalité.

Par la fixation du sang d'après ma méthode et la double coloration, il m*est facile de justifier cette opinion. La portion colorée en violet foncé (hémoglobique) des hématies 6, c (vues de face) et rf, e (vues de champ, flg. V) figure bien une nacelle ou une cloche; mais le ménisque anhémoglobique (rouge) qui en remplit Texcavation fait également partie de Télément et concourt à déterminer sa forme. Celle-ci n'est pas une sphère parfaite, puisque les diamètres ne sont pas égaux : ils sont Tun à l'autre comme S ou 6 est à 7. Mais il est d'autres formes : la figure IV montre un disque hémoglobique allongé et très mince dont les faces sont revêtues chacune d'un ménisque anhémoglobique. L'hématie figure un corps elliptique. Le dessin f de la figure Y représente une masse hémoglobique renflée aux deux extrémités, à faces aplaties et dépourvues de protoplasma anhémoglobique. A mon avis, je le répète, l'hématie /"est un élément vieux dont la substance anhémoglobique a disparu par fonte.

Le développement, je le dis par anticipation, confirme ces conclusions : l'élément originel, qui est un noyau, est sphérique; à mesure que la chromatine subit la transformation hémoglobique la chromatine prend la configuration d'une nacelle et le nucléoplastna se réduit de plus en plus autour de ce centre hémoglobique.

Les aspects différents qu'offrent les hématies sont dus à leur constitution qui varie dans leurs parties centrale et périphérique. Si l'on met l'hématie au point, de façon que son ménisque anhémo-

588 ÉD. REITERER. — DES HÉMATIES DES MAMMIFÈRES,

globique soit au foyer de Tobjectif et qu'on aperçoive en même temps le croissant hémoglobique et la peUicnle corticale, le ceaùre parait clair, la cupule hémoglobique devient sombre et son bord clair. Si Ton éloigne Tobjectir, le ménisque central anhémoglobîqae n'est plus visible et Ton n'aperçoit plus que la cupule hémoglobique qui parait sombre et la pellicule anhémoglobique qui lui constitue une bordure claire.

Plaquettes du sang. — Existe-t-il dans le sang, outre les leucocytes et les hématies, des parties figurées constituant une troisième forme d'éléments sanguins? Il est difficile de répondre à cette question. Lorsqu'on étudie à l'objectif à immersion à eau une goutte de sang reçue dans une solution salée (0,4, 0,5 à 0,9 p. 100 de chlorure de sodium), on ne voit au début que des leucocytes et des hématies. En prolongeant l'observation, on voit les hématies et les leucocytes émettre des saillies et des pointes qui se pédiculisent, deviennent libres et constituent des corpuscules les uns colorés, les autres incolores. Je me suis toujours demandé si ce sont là les plaquettes du sang. En examinant le sang circulant du mésentère du Cobaye, j'ai entrevu des plaquettes analogues, mais je suis resté dans le doute, parce que les vaisseaux sont toujours plus ou moins comprimés lorsqu'on fait cette observation; de plus, il est possible que la stagnation momentanée ou partielle du sang soit la cause de la production de ces plaquettes. La plupart des sérums, liquides conservateurs ou indifférents, produisent des effets analogues (voir historique, p. 616).

Le sang reçu directement dans le fixateur (liquide de Zenker ou solution de sublimé platinique), puis examiné sans coloration ou après coloration, ou bien encore le sang fixé par ces liquides fixateurs dans l'intérieur d'un vaisseau, montre des images différentes. Les leucocytes et les hématies présentent une forme bien déterminée, sans crénelures ni saillies, ni pointes d'aucune sorte. Dans rinlervalle de ces deux sortes d'éléments figurés existe un réseau de fibrilles dont les mailles sont entrecoupées de mille manières. Aux points où les fibrilles se rencontrent ou se croisent, existent des amas arrondis ou étoiles représentant les points nodaux du réseau ou réticulum. En colorant de diverses façons ces préparations, avec rhématoxylioe de fer et an rouge Bordeaux, par exemple, j'ai toujours vu les points ou grains nodaux se teindre comme le réticulum fibrineux; jamais je n'y ai distingué de noyau ni de pro-

toplasma cellulaire. En un mot, je n'ai pas réussi à me convaincre de l'existence d'une troisième forme d'éléments figurés du sang. Comme nous le verrons à l'historique, pour observer cette troisième forme d'éléments figurés (granulations libres, hématoblastes, plaquettes du sang, thrombocytes) il faut faire subir au sang des manipulations variées. Or, si les histologistes décrivent à ces éléments une configuration et une structure différentes, cela me parait tenir au mode de préparation même. En un mot, les plaquettes du sang me semblent être un artifice de préparation ou des fragments détachés des hématies ou des leucocytes. Il est possible encore qu'en vieillissant, en s'usant, pour ainsi dire, les hématies et les leucocytes se réduisent à des particules de plus en plus fines, les unes hémogiobiques, les autres dépourvues d'hémoglobine et qui simulent une troisième forme d'éléments figurés du sang (voir l'historique p. 615).