III. — Discussion

Ces résultats dont les premiers ont été publiés en mars 1948, ont rapidement suscité l'intérêt de chercheurs étrangers. Nos travaux ont été repris, confirmés et développés par plusieurs auteurs :

1) Travaux ayant pour objet de vérifier la constance de l'acide désoxyribonucléique dans les noyaux.

En 1949, Mirsxy et Ris (174) publiaient une série de résultats sur la teneur en ADN des noyaux de diverses espèces animales. Ils étudiaient notamment quelques poissons, oiseaux et amphibiens chez lesquels ils retrouvaient la constance de l’ADN par noyau et sa teneur moitié moindre dans les spermatozoïdes. Cependant leurs résultats étaient nettement en désaccord avec les nôtres en ce qui concerne les Mammifères et en particulier le Bœuf. Ces auteurs trouvaient en effet dans le thymus de Veau, les ganglions lymphatiques de Veau, le rein et le foie de Bœuf les valeurs suivantes : Thymus de Veau : 7,15; ganglion lymphatique de Veau : 7,03 ; rein de Veau : 6,25 ; foie de Veau : 6,22 ; rein de Bœuf : 6,81 ; foie de Bœuf : 8,40.

Ils trouvaient d’autre part : 2,82 X 10° mg. pour le spermatozoïde. La teneur en ADN des cellules somatiques représenterait donc dans ce cas jusqu’au triple de la cellule haploïde, spermatozoïde.

Mirsky et Ris s’appuyaient sur ces résultats pour conclure que la constance de l'ADN par noyau et sa teneur moitié moindre dans les spermatozoïdes, vraies pour les Poissons et les Vertébrés inférieurs n’était pas réalisée chez les Mammifères où interviendraient des phénomènes plus complexes.

Comment expliquer cette absolue divergence entre nos propres résultats et ceux de Mirsky.

Nous avons répété plusieurs fois des dosages sur les organes de Bœuf et les spermatozoïdes et nous avons toujours vérifié nos premiers résultats. On pou-

(:) Nous remercions le Professeur Runnsrrôm qui à l’occasion de notre communication au 7e Cougrès International de Biologie cellulaire (Yale University, 4-8 sept. 1950) a eu l’amabilité de nous faire part des recherches alors toutes récentes effectuées dans son laboratoire.

cape perd

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vait évidemment trouver une explication dans la présence d’un grand nombre de noyaux polyploïdes dans les organes de l’animal étudié par Mirsxy et Ris. En effet, de nombreux auteurs (!) ont montré que certains organes, en particulier le foie chez les Mammifères, pouvaient contenir un certain nombre de noyaux polyploïdes. Cette polyploïdie, inexistante chez de jeunes animaux, apparaît à un certain âge, elle est particulièrement abondante chez les Rongeurs mais très faible chez d’autres Mammifères (Bœuf, Homme).

D'autre part, Ris et Mirsxy (202), en 1949, et plus tard SwirT (1950) (235) montrèrent par des analyses photométriques que les variations de l'ADN dans différents noyaux étaient en rapport avec différents degrés de polyploïdie. On pouvait donc expliquer les résultats de Mirsxy et Ris par une polyploïdie exceplionnellement abondante chez l’animal étudié. Le dosage chimique étant effectué sur un grand nombre de noyaux, il s'agirait donc ici d’un mélange de noyaux ayant respectivement la valeur diploïde, tétraploïde et octoploïde en AUN; la valeur calculée par noyau serait donc une valeur moyenne nettement supérieure à la valeur diploïde. Mais Mirsky et Ris eux-mêmes (174) ont exclu cette possibilité, car ils disent avoir, au cours de la numération, compté les noyaux polyploïdes (reconnaissables, disent-ils, à leur grande taille) et effectué la correction nécessaire.

Nous verrons dans le second chapitre comment nous avons pu démontrer nous-même grâce à la méthode de cytochimie photométrique, l’exactitude de nos premiers résultats. D'ailleurs, tout récemment Mirsky (176) a reconnu (?) qu'il ne pouvait s'agir de sa part que d’une erreur de numération et il admet comme définitive la constance de l'ADN des noyaux chez les Mammifères ainsi que sa teneur moitié moindre dans les spermatozoïdes.

Nous avons insisté plus haut sur les nombreuses difficultés que l’on peut rencontrer dans la numération des noyaux quand certaines précautions ne sont pas prises et nous avons volontairement insisté sur de petits détails de technique dont l’importance apparaît ici : une simple erreur de numération peut conduire à de graves erreurs d'interprétation. Quoi qu’il en soit, les résultats de Mirsky ne sont plus actuellement une objection à nos travaux, ils viennent au contraire les confirmer complètement. D’autre part, en 1950, Davipsow, LesLie et al. (84) ont vérifié la constance de l'ADN par noyau chez l'embryon de Poulet dans un très grand nombre d'organes.

Enfin, d’autres auteurs ont repris le même problème avec une technique bien différente de celle que nous avons employée : la technique de cytochimie photométrique utilisant le Feulgen et mise au point par Pozzisrer et son Ecole (193-194-195). Nous la décrirons en détails plus loin. Cette méthode qui permet de mesurer (en unités conventionnelles) l'ADN au niveau d’un seul noyau a permis à l’école américaine de confirmer absolument nos résultats.

Signalons que LEUCHTENBERGER (141), étudiant la dégénérescence pycnotique des noyaux normaux et néoplasiques chez la Souris, a noté que l'ADN de ces

(:) Voir à ce propos une publication de Teir (H.) (1944) (240) daos laquelle on trouve une importante bibliographie de cette ques'ion.

(?) Il s'exprime en ces termes : « This showed that Mirsky and Ris were probably in error when they supposed that beef cells were an exception to the many examples of constancy which they had found ».

L'ACGIDE DÉSOXYRIBONUCLÉIQUE DES CELLULES ANIMALES 33

noyaux restait stable, alors que les protéines diminuaient dans des proportions considérables. La perte de l'ADN ne se produit qu’à un stade avancé de dégénérescence.

Swirr (235) a étudié l'ADN des noyaux de très nombreux organes et tissus de la Souris : Foie, Pancréas, Thymus, Lymphocytes, cellules de Sertoli, tubes urinifères, épithélium du petit intestin, rate, neurones de la moelle épinière, cellules interstitielles du testicule ainsi que les spermatocytes. Ses résultats montrent très nettement que les noyaux de tous ces tissus ont la même teneur en ADN qui est exactement le double de celle des spermatides ; Swirr signale également dans le foie la présence d’une certaine proportion de noyaux ayant respectivement le double et le quadruple de la teneur en ADN des noyaux diploïdes ordinaires.

ALFERT (3) a étudié le cas particulier des ovocytes de Souris.

Tous ces résultats sont en parfait accord avec la théorie qui nous a servi d'hypothèse de travail. Seuls les auteurs belges, Pasreezs et Lison (188), utilisant une technique cytochimique (148) inspirée dans son principe de celle de Pozrisrer, ont rapporté chez le Rat des résultats nettement opposés à cette théorie. En effet, si ces auteurs ont trouvé dans la plupart des tissus du Rat (surrénale, estomac, rein, etc...) une teneur en ADN des noyaux qui est le double de celle des spermatozoïdes 2$, ils ont trouvé dans le foie et le pancréas des teneurs nettement inférieures à la valeur théorique 2$. Ces teneurs étaient à peine une fois et demie celles des spermatozoïdes pour les noyaux diploïdes, les classes tétra et octoploïdes ayant respectivement le double et le quadruple de cette teneur minimum en ADN. Ces résultats n’ont pas été confirmés par d’autres chercheurs. Nous verrons encore dans le chapitre II comment nous avons pu reprendre et étudier cette question par la technique cytochimique parallèlement à la technique chimique, et comment nos conclusions se sont trouvées en opposition avec celles de Pasreezs et Lison et en accord avec notre théorie.

2) Travaux suscilés par la découverte de la constance de l'acide désoxyribonucléique dans les noyaux.

Enfin, l'étude chimique de la constance de la teneur des noyaux en ADN dans une même espèce animale a d'autre part servi de point de départ à d’autres séries de recherches : en embryologie, en génétique et en cancérologie : |

— Davipson et Lescie (82) ont utilisé cette « constante » désoxyribonucléique comme indice permettant de déterminer le nombre de cellules dans un tissu, connaissant sa teneur globaleen ADN. Ils ont pu, grâce à cet étalon de référence, rapporter à l’unité cellulaire les variations de certaines substances (Azote protéique, Phosphore de l’acido-soluble, Phosphore de l’acide ribonucléique et Phosphore lipidique) au cours du développement embryonnaire.

— Marx et Puis (161), Cunninenam, Grirrin et Lucx (73), Price et Collaborateurs (192), Kzei et Collaborateurs (126-127), Davipson et Collaborateurs (83-85), Mérais et Manpez (164) et d’autres auteurs ont tenté d'appliquer