COLORATION DES COUPES

Les fragments d'organes dans lesquels on veut étudier les rapports des bacilles tuberculeux avec les éléments cellulaires doivent être découpés en petits, cubes de o ce. 5 d'épaisseur et fixés d'abord par Valcool à 60°. On les fait passer ensuite successivement, en 2^ heures, dans la série des alcools à 70^^ 80°, 90° et absolu. On peut aussi les fixer d'emblée dans la. solution de formol à 10 p, 100 pendant 24 heures, puis les plonger dans Valcool absolu. Les inclusions se font ensuite dans la paraffme suivant la technique histologique habituelle {alcool-xylol, xy loi pur, xy loi-paraffine, paraffine).

Les coupes, collées sur lames au moyen de l'albumine thymolée, doivent être aussi minces que possible. On les plonge danç l'éther pour dissoudre la paraffine, puis dans l'alcool absolu, dans l'alcool à 80', dans l'alcool à 60°, dans l'alcool à 40**, dans l'eau distillée, et on les immerge enfin dans la solution de Ziehl où elles doivent rester au moins une heure à 87**, ou 24 heures à la température du laboratoire. On les décolore ensuite avec l'alcool chlorhydrique (i ce. d'HCl dans 100 ce. d'alcool à 70"*) ou mieux par le chlorhydrate d'aniline en solution aqueuse à 2 p. 100 suivie d'un lavage à l'alcool à 96** ; on lave à l'eau ; on recolore par le bleu phéniqué de Kûhne pendant une minute, on lave de nouveau à l'eau, on déshydrate rapidement par l'alcool absolu, on éclaircit à l'essence de girofle, et après un dernier et abondant lavage au xylol çn monte dans le baume de Canada. Les bacilles se détachent nettement en rouge sur le fond bleu de la préparation.

Il peut y avoir intérêt, pour l'étude des coupes, à colorer par diflférenciation les noyaux cellulaires. En ce cas on traite d'abord la coupe par Yhématoxyline de Delajield diluée au tiers, pendant deux minutes ; on lave soigneusement à l'eau ; on colore ensuite par le Ziehl comme il a été dit ci-dessus, une heure à 87**, etc..

La méthode de Herman-Caan * est aussi très recommandable. En voici la technique :

Colorer d'abord la coupe au carmin chlorhydrique {Carmin de Mayer) pendant 10 minutes.

Différencier à l'a/coo/ cWoMjrfnçae à i p. iOO (i ce. d'HCl pur pour 100 ce. d'alcool à 70°) jusqu'à ce que les noyaux soient nettement apparents ;

Laver ; colorer environ deux heures avec une solution de krystall violet au carbonate d'am.moniaque (3 parties de solution à i p. 100 de

I, CentraWl.f. Dakt,, 1909, vol. XLIX.

carbonate d^ammoniaqoe dans Teau distillée et i partie de solution à 3 p. ICO de kryslall'violet dans Talcool à g5*) ;

Décolorer pendant quelques secondes par une solution dacide nitrique à 10 p, 100, pois passage à Yalcool à 95** jusqu'à ce que la couleur du carmin réapparaisse ;

Dessécher ; monter au baume.