I. — MÉTHODE DE LA DIALYSE

Elle est basée sur ce fait que Talbumine ne passe pas à travers les membranes dialysanles tandis que les peptones, les acides aminés et leurs composés, l'urée, etc., franchissent plus ou moins aisément certaines de ces membranes.

Si Ton plajce dans un dialyseur approprié l'albumine pure d'un organe sain quelconque (foie, rate ou rein par exemple), et le sérum d'un sujet sain, ni les albumines de cet organe sain ni celles du sérum sain ne passent à travers la membrane. Mais si l'organe est malade, les ferments que renferme normalement le sérum décomposent plus ou moins les albumines de cet organe malade, et les produits de la décomposition (peptones, acides aminés, etc.) peuvent être décelés par certains réactifs chimiques dans le liquide de dialyse.

La mise en œuvre de cette méthode nécessite l'emploi de dialyseui-s parfaitement imperméables aux albumines et perméables aux peptones. Elle nécessite aussi une préparation particulièrement difficile et délicate de la pulpe d'organe dont il doit être fait usage.

L'organe doit être recueilli à l'état très frais, débarrassé de tissu conjonctif et de sang, puis divisé en petits fragments qu'on réduit en pulpe aussi fine que possible avec un broyeur. On place cette pulpe dans un nouet de toile ; on la lave à grande eau pendant plusieurs heures en la comprimant de temps en temps jusqu'à ce qu'elle soit débarrassée de tout ce qui n'est pas du tissu parenchymateux, et surtout de toute trace de saog. On la prive ensuite de sa graisse en la traitant par un courant lent de tétrachlorure de carbone dans un appareil de Soxhlet, jusqu'à ce que le liquide sorte parfaitement limpide et clair.

On la jette enfin par petites portions dans l'eau bouillante pour enlever tous les produits de décomposition des albumines qu'elle peut con tenir. On laisse bouillir cinq minutes, on jette de nouveau sur un filtre qu'on lave dans un volume d'eau distillée au moins loo fois supérieur à celui de l'organe initial et on recommence cette ébullilion et ce rinçage 5 à lo fois de suite.

On s'assure qu'il ne reste plus aucune substance susceptible de faus ser la réaction, en effectuant un contrôle à la ninhydrine de la manière suivante :

On fait bouillir doucement 2 grammes de pulpe, par exemple, avec 10 centimètres cubes d'eau distillée, pendant cinq minutes, dans un tube

à essai. On jette sur un petit filtre et, à 5 centimètres cubes du liquide filtré, on ajoute i centimètre cube d'une solution de ninliydrine à I p. loo, puis on fait bouillir de nouveau quelques instants. Si aucune teinte violacée n'apparaît, c'est que la préparation est bonne. Dans le cas contraire il faut recommencer les ébullilions dans Tcau et les lavages successifs.

C'est à peine si 200 grammes d'organe laissent ainsi 2 grammes de produit utilisable. Celui-ci est immergé dans un petit flacon contenant de l'eau distillée bouillie qu'on recouvre d'une couche de toluol pour empêcher l'évaporation et les contaminations microbiennes.

Les dialyseurs doivent être soigneusement vérifiés quant à leur imperméabilité parfaite aux albumines et quant à leur perméabilité aux peptones. On peut effectuer ce contrôle soit avec une solution de blanc d'œuf, soit, plus sûrement, avec une solution de caséine à 5 p. 100 dont la moindre trace passant à travers la membrane peut être décelée par l'acide sulfurique, qui détermine alors un trouble (Swart et Terwen) *.

En ce qui concerne la perméabilité aux peptones, il est recommandablc de recourir à une solution de peptone de soie (peptone-séricine) titrée à i p. 100.

Le tube dialyseur étant placé dans une fiole d*Erlenmeyer contenant 20 centimètres cubes d'eau distillée, on y introduit 2 ce. 5 de cette solution de peptone. On recouvre d'une couche assez épaisse de toluol le contenu du dialyseur et celui de la fiole, et on porte à l'étuve pendant 16 à 20 heures.

Après ce délai, on prélève à la pipette, dans la fiole, 10 centimètres cubes de liquide, qu'on verse dans un tube à essai et qu'on additionne de

0 ce. 2 d'une solution stérile et fraîchement préparée de ninhydrine à

1 p. 100. On fait bouillir doucement pendant une minute en agitant le liquide, qui se colore en violet si la dialyse de la peptone s'est effectuée convenablement.

Les dialyseurs dont il doit être fait usage étant ainsi dûment vérifiés un à un, on les passe rapidement à l'eau bouillante et on les conserve dans Teau distillée, sous une couche de toluol.