Journ. ofexper, Med., I9i5, vol. XXIf, p

coaguler, en position inclinée, une première fois à 85" jusqu'à solidification complète, une deuxième et une troisième fois les joars suivants à 75'* seulement pendant une heure.

Pour l'ensemencement des crachats, on dilue ceux-ci (aussi frais que possible) dans une solution à 3 p. loo de soude, on les porte à Féluve à 37** pendant une demi-heure, on neutralise au tournesol avec une quantité suffisante d'acide chlorhydriquc, on centrifuge et on répartit le sédiment avec une pipelle effilée dans les tubes de culture.

C, Spengler (de Davos) ^ avait fait connaître en igoS un procédé ingénieux basé sur ce fait que les vapeurs de formol exercent beaucoup plus rapidement leur action antiseptique sur les microbes saprophytes que sur les bacilles tuberculeux. Voici comment il opère :

Dans le fond d'une boîte de P^/n" préalablement garni d'une rondelle de papier filtre occupant toute l'étendue de la boîte, on étale environ 3 cent, cubes de crachats sur une couche de 2 millimètres et demi d'cpaisseur, que l'on saupoudre de pancréatine destinée à faciliter la digestion du mucus. L'intérieur du couvercle est garni lui-même d'une autre rondelle de papier, qu'après Faction de la pancréatine (5 à 6 heures d'éluve à 37°), on arrose avec 3 à 5 gouttes de solution commerciale de formol, puis on expose la boîte à la température de 20-26'* pendant deux heures. Tous les microbes sont alors tués, sauf le bacille tuberculeux, qu'on peut ensemencer directement sur sérum coagulé glycérine pour obtenir des cultures pures.

S. Pjatkowski 2, s'inspirant de cette méthode, procède de la manière suivante :

Le mélange microbien à étudier est ^mulsionné dans 10 ce. d'eau ou de bouillon ; on y ajoute 2 à 3 gouttes de formol et on agile énergiquement le contenu du tube. Une demi-heure après, on ensemence le liquide (ou mieux une partie du produit de sa centrifugation) sur gélose ordinaire d'une part et sur gélose glycérinée d'autre part, puis on agite de nouveau le tube, et on répète les réensemencements de quart d'heure en quart d'heure. On obtient ainsi une série de tubes dont quelques-uns peuvent donner une culture pure d'acido-résistanls. tous les autres microbes ayant péri sous l'action du formol. Beaucoup de bacilles acido-résistanls non tuberculigènes poussent rapidement sur la gélose ordinaire. On les différencie ainsi d'emblée.

G. Spexgleh a indiqué qu'on peut stériliser incomplètement les crachats, de façon à tuer par la chaleur tout ce qui n'est pas le bacille tuberculeux, en prélevant, avec une anse de platine, gros comme une noisette d*un crachat nummulaire et en approchant cette masse de la flamme, de manière à la rôtir sur toute la surface sans qu'elle se détache de l'anse.

I. Zeitsch. f. Hyg., vol. XLII, p. 90-1 1 4. a. Deutsch. mcd, U'oc/t., 9 juin 190^.

On renouvelle deux ou trois fois Topera tion et la stérilisation voulue est atteinte. On porte alors Tobjet ainsi flambé sur le sérum glycérine et on Ty écrase. Ce mode opératoire est élégant, mais il exige une certaine habitude. La méthode à Tanliformine est certainement beaucoup plus simple et plus pratique.

Je citerai encore le procédé étudié par F. W* Twort 2, qui réalise l'isolement direct du bacille tuberculeux par ïéricoline, glucoside bactéricide pour les microbes associés. On plonge un fragment de crachat dans une solution aqueuse à 2 p. 100 de cette substance, on porte à 38** pendant i heure et on ensemence ensuite directement sur le milieu à l'œuf de DoRSET.

Ou bien encore le procédé de F. Dn-Taonn et W. Schultz * qui consiste à mélanger les crachats, préalablement dilués de leur volume d'eau, avec 10 % de sol. de potasse caustique à i5 p. 100, et chauffés 10 à 20 minutes au bain-marie à 47-50"* pour homogénéiser. A 3o ce. de celle émulsion, on ajoute ensuite i ce. 5 à 2 ce. de solution à 2 p. 100 d'oxy chlorure de fer. Il se forme un précipité qu'on recueille et qu'on ■étale sur lames, sans qu'il soit nécessaire de centrifuger.

Toutes ces méthodes, sauf celle de Uesse et celle de C. Spengler, sont applicables à l'isolement des bacilles tuberculeux des matières fécales, de l'urine et des produits purulents provenant de cavernes pulmonaires, de pneumothorax ou d'abcès. Pour les matières fécales, celle à l'antiformine convient le mieux. Il faut opérer sur 10 gr. environ de matières que l'on dilue dans 20 ce d'eau stérile et qu'on laisse pendant I heure en contact avec 3o ce. de solution d antiformine à 20 p. 100. On agite fortement le mélange, on centrifuge aseptiquement, on lave le dépôt dans l'eau salée physiologique stérile, on centrifuge une deuxième fois, on décante et le culot restant est ensemencé sur les divers milieux de culture solides (sérum coagulé, pommes de terre, œuf de Dorset, ceuf de Lubenau, pommes de terre biliées).

Avec les urines, il faut centrifuger d'abord une assez grande quantité . de liquide (100 ce. environ) Le djépot est repris par quelques centimètres cubes d'eau additionnée d'une égale quantité d'antiformine à 20 p. 100, et on opère comme il a été dit ci-dessus

I. Cenlr. f Bakt. I. orig,, LXXIX. 3i mars 1917, p. 166. a. Cenlralbl. Bakt.^ vol. XLIV, p 65, 1909.