B. - TUBERCULINE DE ROBERT KOCH. — SA PRÉPARATION

L'étude des lésions produites parles cadavres de bacilles tuberculeux, comparativement chez les animaux sains et chez les animaux déjà tuberculisés, a conduit Robert Koch à la découverte de la tuberculine 2. Ce savant avait constaté que les effets provoqués par les injections sous-cutanées de bacilles morts sont tout différents chez ces

I. Société d'études sur la tuberculose, déc. 1918. a. Deutseh, med, Woch.j 1891, p. 101.

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derniers. Alors que les cobayes sains supportent, en faisant un simple abcès local, des doses fortes de ces bacilles, de très petites quantités de ceux-ci suffisent à tuer les cobayes tuberculeux en 6 à 48 heures. Si la dose est assez faible pour ne pas entraîner la mort, on voit se produire au point d'inoculation une zone de nécrose cutanée plus ou moins étendue ; et si Ton répèle les injections de doses encore plus faibles, rétat général des animaux tuberculeux s'améliore, les ulcères d'inoculation se cicatrisent, les ganglions primitivement engorgés diminuent de volume et l'évolution de la maladie semble subir un temps d'arrêt.

Supposant aussitôt que cette action était due à une substance toxique qui était mise en liberté par les bacilles morts, Robert Koch chercha à Texlraire. Dans ce but il se servit d'abord de cultures sur gélose glycérinée raclées, sur lesquelles il versait une solution aqueuse de glycérine à 4 p. loo ; il chauffa le mélange au bain-marie jusqu'à réduction au dixième de son volume, puis sépara par filtration les bacilles du liquide.

Mais bientôt il adoptait la technique que Ion utilise encore pour la préparation de ce que l'on appelle aujourd'hui la vieille iaberculine ou tubercaline brute de Koch, et qui était primitivement la suivante :

On verse un litre de bouillon de bœuf légèrement alcalinisé, contenant lo grammes de peptone et ^o à 5o grammes de glycérine, dans un grand ballon à fond plat, de telle sorte que celui-ci ne soit plein que jusqu'au tiers environ de sa capacité. On stérilise à l'autoclave à 120**. Après refroidissement, on ensemence avec un fragment flottant de culture On porte à l'étuve à 38°. Après 6 à 8 semaines, lorsque le voile, complètement développé, tend à se disloquer à la surface du liquide, on évapore au bain-marie jusqu'à réduction au dixième et on filtre à travers une bougie de terre poreuse (Berkefeld) ou de porcelaine (Chamberland), La luberculine ainsi obtenue est claire, sirupeuse, de couleur brun foncé.

Dans la plupart des laboratoires, cette technique primitive a été avantageusement modifiée : on stérilise d'abord à la vapeur à 100** les cultures avant de les concentrer au bain-marie, et on effectue la filtration du liquide concentré à travers un double filtre de papier épais (papier Chardin) qui relient la plus grande partie des corps microbiens.

Une dose de o ce. i à o ce. 3 de cette luberculine doit tuer en 6 à 2^ heures les cobayes infectés depuis /i semaines par l'injection souscutanée de 1 centigramme de culture de bacilles tuberculeux, quantité ordinairement suffisante pour amener la mort de ces animaux en 8 à 10 semaines. A l'autopsie de ces cobayes on trouve, au point d'inoculation des bacilles et aux alentours, une infiltration rouge, œdémateuse, qui s'étend aux ganglions correspondants. La rate, le foie, les poumons et l'intestin grêle présentent des taches de couleur rouge foncé ressemblant à de petites ecchymoses et qui sont dues à des ex Ira vasa lions*

TOXINES. EXO ET ENDOTOXINES. - TVBERCVLISES 73

sanguines. Les capsules surrénales sont augmentées de volume et congestionnées.

C'est VON Bergman qui, le premier, en 1890, employa chez l'homme la tubeiculine comme moyen diagnostic d'une tumeur de la joue.