B. — MÉTHODE PHYSIQUE. ANALYSE SPECTRALE

À I. — Spectre de l’urobiline pure. LE Les réactions spectroscopiques de l’urobiline sont trés nettes. Celle qui domine est l'existence d’une

bande FN située dans le vert et le bleu

cyané entre les raies db. et F, Cette bande est située

| entre la race 5102 et 485 à (1). Flle laisse un léger

espace à droite de Ja raie à et peut dépasser à droite la raie F. Les bords de la bande d’absorp-

tion sont moins foncés que la partie centrale, située

vers 500 k., c'est-à-dire plus près de F que de 0.

Ce spectre s’observe dans l'urine acide, et dans les solutions diluées ç'est-à- -dire au deux-c entième environ, et même moins x tandis que dans les solu- | tions concentrées, au dixième par exemple, à une 4 “épaisseur de un centimètre on ne yoit dans Île. | spectre. que lorangé et le jaune. IL y a de B HEC,

obseurité moindre et au milieu de la plage DàE une demi dDeu ne, mais le reste est tout à fait

obscur. LIRbERrTE 4 Le" Quand on rend 1e solutions. alcalines, et sur-

# tout en y ajoutant du chlorure de zine, là bande

est déplacée, elle se porte vers. Ja gauche, c'est-à-

dire environ entre 510 et 517. Cette bande a d’ail- leurs une obscurité moindre que la. précédente. Cette description due à Hénocque est la plus précise qui ail été donnée depuis Jaffé. La bande Caractéristique est donc entre b et F. Elle n’est pas la”

(4) Couramment on trouve dans les livres que la bande d'absorption se trouve au niveau de telle division du micromètre 140 par exemple. Cela ne signifie rien puisque la position de l'échelle graduées, ses dimensions varient avec chaque appareil. Fantôt on fait coïnçider ] le-0 tantôi le 400 avec la raie “D. Il est nécessaire d'établir pour chaqne spectroscope une courbe qui permettra de trouver la longueur d'onde correspondant à une division quelconque du micromètre. Voir l'agenda du chimiste.

(Hachette 1898). |

à à ++ tr + Ye

; a mais elle RARE première AR on dilue ke les solutions. Elle doit être regardée comme carac- — téristique. Les | 1} ie à ne.se yoient avec le spec-

“troscope que si on peut superposer un spectre de

comparaison, qui apparaît plus large etmontre qu il

L #38 absorption aux deux extrémités de la bande Pere lumineuse. L'obscurcissement large à droite de F

VRP

Le figuré par divers. auteurs est dù à des impuretés Eee) à des pigments biliaires.

Technique de la recherche au spectroscope.

L’urine peut être examinée directement, autant 24 que possible dans des cuves de verre à faces paral- : lèles et sous des épaisseurs variables. Mais les matières colorantes (sang, bile, etc.) obscurcissent souvent d’autres régions du spectre. Il est donc préférable d'isoler l'urobiline pour l'examen au spectroscope. C’est l'absence de cette précaution qui est cause en partie de la confusion de l'uro- biline avec d’autres pigments.

Mayet (1) recommande de précipiter l’urobiline par Jacétaté basique de plomb. On décompose ensuite le précipité par de Talcool contenant de l'acide oxalique. La solution obtenue est desséchée après filtration, et le produit repris par J'alcoo! aci- dulé avec de Facide sulfurique.il est débarrassé ainsi des substancés qui nuisent à la pureté de son spectre. Un autre procédé dû à Salkowski consiste à

précipiter l'urine par un lait de chaux et excès de

(A) Mayet. — Traité de séméiologie, p. 745.

chaux par l'acide carbonique : Il n’est pas pratique.

Le même auteur a indiqué le suivant, que préco-

nise encore Hénocque : ‘Agiter l'urine avec parties égales d’éther pur, séparer dans un entonnoir à robinet. A l’éther ajouter quelques gouttes d'alcool et examiner la solution au spectroscope. L’éther, malheureusement, ne dépouille pas l'urine de toute l’'urobiline. On ne peut donc pas faire de dosages même approximatifs par ce procédé.\ Le procédé de Cordier consistant à agiter 20 em* de chloroforme avec 100 cm? d'urine acidulée par 5 em? de HCI, à séparer ensuite le dissolvant, filtrer, évaporer ét reprendre par l'alcool absolu a le même inconvénient, Aussi Denigès (1) a-t-il proposé de

. . # . dépouiller l’urine de ses pigments parasites par: “une solution de sulfate mercurique, qui laisse

l’urobiline dans l'urine, et en précipite les autres

pigments. D’après cet auteur, la solution suivante convient admirablement.

Oxyde mercurique. .. 5 gr.

Acide sulfurique... . . 20 » Had. TOR HPATOO NE)

Dans la pratique, on sépare les corps étrangers, en ajoutant 10 em d'urine à 5 du réactif, on agite, ° on filtre, au bout de 5 à 6 minutes la liqueur claire peut être examinée au spectroscope; l’examen se

fait sous des épaisseurs différentes. Jaffé allait de 3 à 6 cm.

(1) Soc. Biologie, 1897, p. 287.

QD mms

SE OT 2e

MANU ES. 1. ProcéDés pr RO

Les procédés les plus exacts consistent à “isoler F. l'urobiline, et à la doser par pesée. Malheureuse-

qu exceptionnellement.

; déterminé d'urine qu'on sie avec de l'acide sul- Ki ; furique ou acétique, on sature ‘ensuite avec le sulfate Kd ammoniaqué Dès que le liquide s'est reposé pen- +: dant. quelques heures, toute l'urobiline se dépose “+ en flocons roses qu'on recueille sur un filtre. On

; lave avec une solution saturée de parties égales

de chloroforme et d'alcool. Le mélange est traité ré plusieurs fois de suite par de l’eau dans un enton: R noir à robinet. Enfin dans un becherglass préala-

blement pesé on évapore le chloroforme au bain- “marie, Le résidu desséché à 100° est extrait avec \ de Péther. On filtre la solution éthérée d’urobiline, on laisse évaporer, on traite à nouveau par ‘Palcool, qu’ on évapore finalement : le résidu dessé-

ché est pesé.

Procédé Viglezio (2). — On prend 300 eme. d'urine

franche acidifiée avee de l'acide sulfurique où acé- ‘7 tique, et on sature au sulfate d’ammoniaque (230-

2 240 Bn: Après RERAOn PEAU une heure, on

(4) Voir Traité de Chimie Physiologique. Trad. Schlagdenhaufen, ete. (2) Lo Spérimentale LXV. — Mya a donné un procédés’en rapprochant beaucoup. Sa technique est bien exposée dans Legrain, Ann. des Mal. - Gén. Urinaires 1891.

ment ils sont peu pratiques, on n'y aura recours

Ë $ Procédé Hoppe Seyler (1 Es — On prend un volume

filtre : : té filtrat ne doit plus donner de trace Lcoe \ “vbiline à lexamen: spectroscopique direct. On lave”

plusieurs fois avec la solution saturée de sulfate

d'ammoniaque et enfin on laisse: sécher. Des À |

Le pigment est alors recueilli avec 100 à 300 eme. "

d’ alcool. Cette solution est placée dans une pipette. 4

de Mohr graduée. On met ensuite dans une petite

cuvette contenant 10 cme. d'alcool à 60?, deux gout-

tes d’ammoniaque et deux gouttes d’une solution :

de chlorure de zine à { ou. 2° Jo. On y fait alors

écouler la solution d'urobiline, jusqu’ à ce que l'on

puisse constater l’ apparition de la fluorescence dans

la petite cuvette, et on note la quantité de la solu-

tion. En laissant encore écouler le liquide (deux à

trois fois plus) on peut constater l'apparition de la bande entre b et F. Ces deux chiffres servent à ®

déterminer la quantité d’ urobiline d après une for-

mule établie par Viglezio au moyen de dosages pra-

tiqués sur une solution titrée au centième d’uro- 4

biline opicnRe par la méthode de Jaffé. Cette: or-

mule est a 22. Si l'on a pris sur 300 eme. d’ex- 4

st RES UT

it trait leds ihe 0, 15 c'est-à- dire 15 centièmes. de

$ . J mc. pour obtenir a fluorescence a =, 54

Ce Role nécessite done l'emploi d’une. burette graduée en centièmes de centimètre cube. Le:

moment où apparaît la fluorescence est difficile à apprécier. Aussi les erreurs sont-elles fatales. Ce. procédé ne peut être ‘employé que pour des opérateurs très exercés.

me: 7 ) : | Procédé Siumenshur . Cette Méthode ame. trique déjà signalée, est Sn sur la comparaison

à avec. des solutions graduées d'avance : L'impossids de. les. conserver rend ce procédé illusoire. Procédé Bogomoloff | FREE 21m méthode est basée

] d'une part sur les Reno de coloration que

| présente l'urine contenant de l’urobiline, de l’autre

#SUTySeE, réactions spectroscopiques. Lorsque P urine est colorée en vert émeraude par une solution de

Loultéto de cuivre, elle donne un trouble brun jau- nâtre. Si la. réaction est acide, le. chloroforme en extrait ‘une matière couleur jaune rouge, présentant une bande d'absorption entre .b et F;: 5: l'urine est

alealine. le trouble est rouge cramoisi, et avec le . chloroforme on extrait une matière ue de ceite couleur présentant une bande entre E et F.

Ur est vraisemblable que dans ces réactions le sulte de cuivre sépare l’urobiline de sa combinai-

son avec les phosphates. En ajoutant à ces phé- | pamènes la notion de la faible acidité de l’urobiline, l’auteur s’est proposé de la titrer comme un acide. Comme indicateurs de l'apparition de la .Féaction, Bogomolof emploie la couleur de la solu-

tion, l'analyse spectroscopique et, d'autre part, les .

modifications de ces réactions avec le sulfate de cuivre et le chlorure de zinc.

1° acidité de lurobiline est dix fois plus faible

que celle de lacide oxalique, et par conséquent en

“ (1) D'après Hénocque. Spectroscopie biologique, II, p- 28.

St "

apparaître avec le spectroscope la bande d’ absorp-

employant la solution centinormale de soude il en

faudra pour saturer 1 gr. d'urobiline, dix fois moins

que pour 1 gr. d'acide oxalique. Ne Ÿ Comme Purobiline reste en solution avec es.

phosphates, il faut d’abord les précipiter par la

solution de soude. La quantité de cette solution ®

nécessaire pour amener la neutralisation de Purine

fait d'autre part déterminer l'acidité totale de d'urine.

Enfin la quantité de.soude nécessaire pour rendre #

alcaline cette urine neutraliséé donnera la quantité

d'urobiline. Pour faire l'examen spectroscopique,

on remplit deux petites éprouvettes graduées, ou ‘

godets, de 4 à 2 cm. de diamètre, avec de l'urine

(quantités égales dans chaque éprouvette) puis on verse goutte à goutte dans l'un d'eux la solution :4

centinormale de soude. On essaie la réaction jusqu” à. L

ce qu'elle devienne neutre. On note la quantité

employée. À ce moment, on ajoute avec le plus. grand soin la solution alcaline pour Dre de nou veau la réaction alcaliné: Aussitôt celle-ci obten e,

l'urine prend une coloration verdâtre et l’on. voit

tion de l’urobiline alealine. On peut comme moyen

de contrôle faire la détermination sans spectroscope. Pour cela, on ajoute à l'urine du chloroforme

et lorsqu'elle est rendue acide l’on y ajoute quel-

ques gouttes d’une solution de sulfate de cuivre à

ss

0,1 o/o, le chloroforme se colore en rouge cra- | € STRESS

moisi.

js 1 F4 x NET * 4 On reprend cette mixture et on la neutralise.

EC Le

rine devient alcaline. Era He une coloration

verdâtre. Additionnée d'une solution de chlorure

de zinc, elle est verte, tandis qu’elle devient rouge nus par le sulfate de euivre. Si l’on a noté la quantité de centimètres cubes dune solution titrée “. centinormale, nécessaire pour rendre l'urine alcaline, en -multipliank ce chiffre par le coefficient 0, 00063 on à la quantité d’urobiline contenue dans

pa: quantité d'urine employ ée pour l'analyse.

| procsnes PHYSIQUES DE DOSAGE

Les méthodes chimiques étant très compliquées, 4 on S: est adressé au spectroscope espérant trouver,

soit par comparaison avec des Solutions d’ urobiline,

soit par Papparition d’une bande d'absorption minine, un procédé commode de doser l’urobiline. C'est dans ee but qu'ont été créés les spectroscopes à épaisseur variable de Moitessier, de Yvon, le | microspectroscope de Hénocque, etc. D'après ce dernier auteur ces procédés ne donnent aucune

Le je Le , st4 . ‘ indication rigoureuse, ils permettent de se rendre

compte tout simplement s'il ÿ a beaucoup ou peu d’urobiline dans le liquide à analyser. Il ne faut pas leur en demander davantage. Gautrelet a dé-

nonimé pompeusement « uropigmentomèetre » un spectroscope à épaisseur variable, gradué de telle

facon qu'il suffit de lire sur un disque horizontal

Î ÿ (4) L'urine humaine, p- 538.

divisé pour avoir atiédiatementt la quimirité d'uro-

biline par litre. C’est simple, trop siniplé nièmez: Vieillard l’a ainsi critiqué : « Jamais, dit-il, on ne : fera admettre à quelqu'un dé sérieux que l’urobiline |

ou tout autre pigment puisse se doser par cette

méthode... La science qui se respecte n’admet pas”.

de semblables compromis avec Pa peu près et la fantaisie. » Ily a trop de facteurs qui interviennent

pour fausser le résultat: d’abord une équation pér=.

sonnelle pour chaque opérateur, en second lieu les

variations dues aux instruments qui ont des pouvoirs

dispersifs différents, audegré d'intensité delalumière,

à la présence d’autres pigments qui absorbent "

plus ou moins les rayons lumineux, etc. Pour s'en rendre compte il suffit d ‘examiner. une solution contenant. de l'urobiline en s’éclairant plus ou

moins bien, en ouvrant et fermant la fente du

spectroscope, etc: on aura des variations énormes dans la bande d'absorption. Il n’est donc pas étonnant, Gautrelet ait obtenu des résultats plutôt extra-

qu’en employant” une telle méthode,

ordinaires. Nous n’en tiendrons aucun compte. Peut on prendre au sérieux les travaux d’un pharmacien qui conclut d’une analyse d'urine « congestion du lobe de Spiegel ou du lobe carré du foie » (ete

pour ne citer que ces déductions grotesques ?

2 , 5 \ His Les procédés de dosage par le spectre minimum

(4) Voir, Revue des mal. de la nutr ition 190-1896. D de l'urobiline.

AA EPA de

Ééroeiié à À a n nbiÉ

is |

ie

pour les raisons indi-

| préconisé be Déroide)(l};

quéés plus haut, ne peut être adopté. IL consiste à

diluer l'urine jusqu’à ce qu'on obtienne un spectre minimum correspondant à une quantité ne

connue durobiline. | nr Mr

“re spectrophotomètre peut dofiién des résultats meilleurs, uiais son emploi nest pds à la portée : de tous, de plus il importe d’avoir toujouts une D: solution type, pure d urobiline, pour. comparaison.

Les méthodes spectroscopiques peuvent donc.

M mous donner des indications approximatives, ren- __ seignements suffisants pour les besoins de la cli-. nique. I ne faut pas demander à un appareil plus

qu'il ne peut donner.

Ain résumé, en clinique, pour la re de : SU À l'urobiline, la réaction du chlorure de zine ammoniacal jointe à l’examen du spectroscope suffisent ; | pour les besoins journaliers, à condition de bien : connaître toutefois la technique Pre ces deux rechér- L: ches. | | F BAT Ouand il y a coexistence de pigments biliaires, QAR : d la méthode de Hayem, ou mieux le procédé de Lépi- wi nois, qui permet d'isoler les pigménts rendront des Un services. bex

Les autres méthodes, sont ou trop compliquées, ë ou trop sujettes à induire en erreur. Pour le dosage, les méthodes de Viglezio et surtout celle

(1) Echo médical du Nord, 16 jan. 1898. é

Sy pps Seyler qui est É on exacte pourront être z

Re PlaTES Elles ne le seront qu'exceptionnellement.

e. WT eut, là plupart du temps, de savoir s'il V5 TE

… beaucoup, peu ou pas d’ urobiline ; le petit- spectros- :

cope de poche. de préférence celui de Vogel qui.

permet mieux Pope mn grâce à un | spectre de. comparaison, suffira largement sans qu'il

soit nécessaire de recourir à des” appareils déli- ;

cats... ou trompeurs. jrs HE RSR NES