I. BACILLUS PERFRINGENS (Veillon et Zi/uer

Pour nous conformer à la nomenclature usitée |>;ir la majorité des auteurs français", nous désignons sous le nom de li. perfrinfjens Veillon el Zuber i8»)S un bacille identique auxgermes sui- \ anls :

Bacille d'AcuALME ( 1 891),

B. aerogenes capsulatus Welch el Xuttal (1892),

B. phlegmonis emphysematosœ Val. Fraenkel i S (>.'>) ,

B. Welchii Mua la ( [900) 1 ' .

Rappelons d'abord que le rôle du B. perfringens dans les infections gazeuses a été depuis longtemps établi par Eue Fraenkel mX(),'m — (il ILLEMOT (1898) — I II rsi.HMAW el Lindenthal [899 — W'ei.cu (1900) — Albrecm 1902) — Ka.mkn (1904), etc. ( '. 'esi ainsi que P. Simonds, dans une monographie récente (igi5 ■>'!/)• ;i pu réunir 17a cas de gangrène gazeuse ou de phlegmon gazeux d'avant-guerre (mortalité i5 0 0 environ) imputables) au B. perfringens.

Ce chiffre élevé nous explique l'importance qu'a prise le II. perfringens dans la littérature actuelle sur les infections gazeuses. En l'ait, depuis que l'un de nous a montré le rôle joué par ce bacille dans les premiers cas de gangrène gazeuse observés après la bataille de la Marne, les observations où Ton a signalé le B. perfringens se sonl multipliées. ,

Dans la littérature française, nous trouvons celles de : Doyen

et YaMANOI CHl ( iijiji — StEINHARDT-HaRDE (322) — RjEVERCHON

el Vaucher i-'ijii) — Orticônî {2jg} — Sartory et Simi.i.maw (3i4) — Lévy, Fourcade et Bollack (268) — N. Fiessinger (208).

11) Mn.ii.v a proposé le Qom de 5. Welchii pour le B. aerogenes capsulatus <!<• Wir.ui et celui de //. emphysemalo&um (Kruse) pour le bac. de Kraenkel.

LES Mil ROBES DES INFEI I IONS G \/.i.l SES 63

Dans la littérature anglaise, celles de : Wright (3jo) — Duu-

(.1 on, I i VBDNEB et BAWTREE (20l) — l'I.I Ml M, f '/.'>/ — M. Robertson (sg8) — K. Taylob (328) — Penhallow (284) — Goadby " ■•</ » — Hartley ( ■'■><) 1 ; Dans la littérature fusse, celles de : Margouliês-Aitoff el

Bu AllowsKY I >J1 ) — ( (HO! KÉVITCH ( / 8t ) \

I )ans la littérature italienne, celles de : ( i. de Angems [i-Gi 1 ;

Enfin, dans la littérature allemande, celles de : Franz ■■■>■>. — SuDECK l'.i-j')) — Derganz (i<jG) — Eug. Fraenkee (218) — KlOSE (254) — Kl PP t ■'>'<>/) — ■ R.ANFT (21) 3) — elc...

Tous ces auieurs sont d'accord pour attribuer au IL perfrini/rns un rôle capital dans la pathogénie dos infections gazeuses.

Nous axons eu l'occasion d'isoler ce microbe un grand nombre de fois cl nous en avons étudié avec soin une vingtaine de souches. .Nous avons principalement porté nos investigations sur les échantillons l'es plus pathogènes, qui provenaient de cas très graves ou mortels de gangrène gazeuse.

.Nous croyons cependant inutile de donner ici une description absolument complètede ce microbe, renvoyant pour la documentation d'avant la guerre à l'excellente el très complète monographie de P. SlMONDS.

A. Morphologie

Bacille épais, à bouts à peine arrondis, immobiles encapsulé, ne sporulant que dans certaines conditions de culture, prenait/ le dru m.

Forme et dimensions. — Dans les sérosités pathologiques ou dans les cultures très jeunes en bouillon, ce microbe est habituellement remarquable par ses formes courtes et trapues. A noter les extrémités à peine arrondies (sub-carrées) dont les angles sont légèrement émoussés. Fréquemment les bacilles sont groupés par paires, les deux éléments restant dans le prolongement l'un de l'autre ou formant un angle à 4"> degrés (fig. i, A . Dans les cultures âgées, on rencontre parfois des formes longues ou sinueuses.

(le type fondamental comporte cependant quelques variantes :

(il cm \ii;mi PABT1E

Deux lois nous avons observé des échantillons à bacilles habituellement et nettement incurvés, même dans les cultures très jeunes en bouillon glucose ifiV. 2).

Quelques souches forment de même des filaments extrêmement longs.

Enfin de grandes variations sont à noter dans l'épaisseur du

/ II* x*f

Fig. 1. - Deux échantillons de, B. perfringens en bouillon glucose à 2 p. 1000. — A, Echantillon Ain 7, culture de 24 heures. — B, Le même, culture de 8 jours. — C, Echantillon A /.'>'. culture de -i'\ heures. (Grossissemenl : <i|>j. Zeiss 1 / 1 ■» , <)c. !\\.

bacille. Si la plupart des germes étudiés onl une épaisseur de 1 >x ■>. à 0 p 8, nous avons parfois rencontré des échantillons plus grêles, dont l'épaisseur moyenne ne dépassait pas 0 / S à 0 [A 6. A noter ipie ces formes grêles ont des extrémités beaucoup plus nettement arrondies (v. fig. 1. C-).

(les variations de formes expliquent la grande difficulté qu'il 3 a à reconnaître le />'. perfringens sur les frottis colorés.

Mobilité, cils, capsule. — Tous les échantillons de l>. perfringens que nous avons étudiés étaient strictemenl immobiles.

Il mous est arrivé quelquefois de colorer très nettement la capsule «le ce microbe (mordançage par l'encre de fuschine el coloratiou par le Ziehl à chaud en utilisant des cultures jeunes sur gélose inclinée.

Nous n'avons jamais pu colorer «le cils.

Spores. — La question de la sporulation du B. perfringens a éié très étudiée et reste encore controversée. Les spores ne se

'iw' - ;

l'iif. 2. — Un échantillon de //. perfringens OÙ (lominiMil les formes Fii;'. 3. — Spores de H. incurvées. Souche Lech. ; bouillon perfringens. Souche glucose à ■> p. 'ooo ; culture de Lech.", culture de 3 jours z4 heures. (Grossissement : Obj. sur sérum de cheval Zeiss [/12, <)r. J). coagulé.

rencontreraient pas dans les milieux où le microbe produit de l'acidité ; il semble bien établi qu'il ne peul sporuler que dans les milieux neutres ou alcalins.

Dans les sérosités, on n'observe habituellement pas de spores.

Dans nos cultures, nous n'avons généralement pas pu en déceler, même dans des cultures en bouillon blanc d'cêuf non sucré, âgées de plus d'un an. Toutefois, nous avons eu quelques souches qui sporulaient plus ou moins rapidement dans ce

lit) Dtil XIÈMJS PARTIE

milieu; d'autre part, certains de nos échantillons onl sporulé abondamment sur sérum de cheval coagulé.

Pour démontrer la présence des spores, l'examen direct csi souvenl insuffisant. Il est exceptionnel que l'on puisse en observer sur des préparations colorées au Uram. Elles sont, de plus, 1res difficiles à colorer par le Xielil. Dans beaucoup de cas, on ne peut guère démontrer leur existence que par le chauffage i \ . ci-dessous).

Examinées dans les milieux où la sporulation est abondante par exemple, pour certains échantillons, le sérum de cheval coagulé), les spores se monlrenl ovalaires, elles attcignenl de grandes dimensions, sont presque toujours libres. Lorsqu'elles sont incluses dans le corps bacillaire, elles sont médianes ousublerininales cl débordent largement le corps du bacille (v. fig. 3).

Les spores (\\\ B. perfringens sont, en général, peu résistantes au chauffage. On sait qu'elles sont habituellement tuées à l'ébullition. Il nous esi cependant arrivé d'obtenir encore des cultures positives après chauffage à i iegrés, pendant3el même 5 minutes, de milieux richement ensemencés en partant de vieilles cultures en bouillon blanc d'œuf.

l'ourles sérosités, lechauffageà toodegrés, pendant i à W minutes, de tubes de bouillon largemenl ensemencés avec celles-ci, élimine presqu'à coup sur le B. perfringens. Cependant, nous avons parfois obtenu des cultures de ce bacille dans des tubes ensemencés avec des sérosités pathologiques et soumis à l'ébullition pendant .''> à -5 et même i i minutes. Il est possible que cerlaines souches possèdent des spores plus résistantes encore, puisque R.ODELLA et \. Minuit (d'après P. Simonds) ont signalé des échantillons de ce microbe dont les spores résistaient à i h. i ■> d'ébullition.

En résumé, s'il est exact que, dans certaines conditions, certains échantillons de B. perfringens puissent spôruler et queces spores soient parfois très résistantes à la. chaleur, dans l'immense majorité des cas, ni l'examen direct, ni le chauffage à (oo degrés des milieux préalablement ensemencés, ne peuvent démontrer la présence des spores dans les cultures en bouillon ou dans l'organisme.

I). — < LvH \< l ÈRES Cl I.M RAI X

Vous insisterons peu sur les caractères cullurau.x du />'. /»■/•fringens <pn sonl bien connus. Rappelons simplement ses principaux caractères dans les milieux usuels.

Bouillon Martin glucose à 2 p. 1000. — < lulture abondante avec production d'une grande quantité de gaz. Trouble persis.tant. La culture dépose leutemenl el progressivement en < j 1 1 < • 1— ques jours dans le fond du tube. Le dépôt esl bien tassé el l'on y observe la présence de pigmenl noir. Odeur butyrique. Réaction acide au tournesol.

Bouillon Martin non glucose additionné d'un cube de blanc deeuf. — Mêmes caractères de culture. Le blanc d'œufn'esl [>;is ou «-si seulemenl un peu attaqué sur les bords. Après plusieurs mois de séjour d'étuve, il peut devenir complètement transparent ; odeur forte, désagréable, mais non putride.

Bouillon au sang. — Hémolyse; le milieu prend une coloration brunâtre. Odeur butyrique prononcée.

Gélose profonde glucosée nitratée. — Développement avec grand dégagement <!<■ gaz el fragmentation de la gélose. Pousse parfois jusque dans l'eau de condensation à la surface du tube.

Colonies à bord limité, lenticulaires.

Nous avons observé certaines variations dans la forme <l<"s colonies. Souvenl celles-ci débutent par le stade « cœur jaune», puis, de l'encoche < I u cœur, naît mie protubérance <pu donne à la colonie une forme de brioche. Nous avpns représenté fig. \ divers aspects de colonies de B. perfrinyens.

Gélose en surface. — Colonies bien limitées arrondies, grises ,ni centre, plus transparentes sur les bords.

Gélatine glucosée. — Colonies <!<• même type qu'en gélose profonde. La liquéfaction esl lente el incomplète. Il faut parfois

l>l I \I1MI PARTIE

des mois de séjour à l'étuve pour que la gélatine son liquéfiée dans le i 3[ou le i l\ intérieur du tube.

pjo-, ', — Colonies de B.perfr ingens en gélose profonde glucosée oitratée : différents aspects d'une même souche (Chaz...).

Lait tournesolé. — Tanlôl le tournesol rougit, tantùl il se décolore complètement. La coagulation esl rapide, en masse; puis le cailloi se contracte, devienl spongieux, criblé de bulles de

I ES MICROBES Dl S INFEC1 IONS G Wli i - li!»

gaz ci surnage dans le petil lait clair. Cette réaction dans le lail esl caractérisl ique.

Le milieu a une odeur acide, butyrique.

Sérum coagulé. — Tics faiblemenl attaqué par quelques souches. Habituellement l'attaque est nulle même après plusieurs jours d'étuve.

Sporulation quelquefois assez abondante dans ce milieu. On \oii des formes renflées el des spores libres; quelques bacilles prenant le Gram renfermenl des spores (fig. 3).

Bouillon à la viande. — Culture peu abondante. Le milieu a une odeur faiblemenl l>m\ rique. Sporulation.

('.. — Propriétés biochimiques

i° Propriétés saccharoly tiques. — Ferment saccharolytique puissant, le B. perfringens attaque les substances hydro-carbonées avec dégagement de gaz el production d'une forte acidité.

I\ SlMONDS, qui a étudié à ce point de vue 20 échantillons provenant de diverses origines, distingue quatre groupes de li. perfringens.'

Groupe 1. — Fait fermenter l'inuline et la glycérine avec production île gaz el acidification du milieu. Pas de sporulation.

Groi pe 11. -- Fait fermenter la glycérine avec production de gaz et acidification du milieu, mais pas l'inuline. Sporulation seulement dans les milieux à l'inuline.

Groupe III. — Fait fermenter l'inuline, mais pas la glycérine. Sporulation dans les milieux à la glycérine.

Groupe IV. — Ne fait fermenter ni l'inuline, ni la glycérine. Sporulation dans les deux milieux.

Cette classification a été reconnue exacte par II. Henri ( 2$6 ) qui a étudié de nombreux échantillons de B. perfringens provenant des blessures de guerre.

D'après cet auteur le B. perfringens fait fermenter constamment : glucose, lévulose, galactose, saccharose, maltose, lactose, raffinose, niannose. amidon, dextrine el glycogène.

•^Propriétés protéolytiques. — Les propriétés protéolyti-

ques du B. perfringens sont extrêmemenl controversées. Nous avons vu qu'il liquéfie lentement la gélatine, très faiblemenl cl très lentement l'ovalbumine, pas du tout la caséine. Certains échantillons attaquent très lentement le sérum coagulé. Tissier et M \u ii.i.i.v i i i reconsidèrent le B . perfringens comme un ageril protéolytique énergique, surtout dans les milieux sucrés. I'. Simomis trouve qu'il produil peu d'ammoniaque, même si on l'ensemence en bouillon glucose.

La recherche de l'indol a donné des résultats contradictoires. Il nous parait bien qu'à ce point de vue les propriétés du B. perfringens sonl 1res variables suivant les échantillons étudiés.

Ajoutons que d'après Tissier et Martélly le B. perfringens, outre \\\\v Irvpsine et une amvlase, secrète une stéapsine qui saponifie les graisses.

I). — Pouvoir pathogène

Le pouvoir pathogène du B. perfringens, comme celui de tous les anaérobies rencontrés dans la gangrène gazeuse, est des plus variables.

Presque toujours, les souches isolées dans des cas mortels de gangrène gazeuse ont été très pathogènes pour le cobaye et oui conservé pendant des mois leur virulence.

Nous conservons le B. perfringens à la glacière en bouillon blanc.d/œuf non glucose. Le pouvoir pathogène est titré en injectant dans les muscles de la cuisse du cobaye des cultures de •i!\ beures en bouillon peptoné glucose à 2 p. 1000.

1" Culture totale. — Cobaye. — Dans les conditions d'injection précisées ci-dessus, r//j à 1 10 de ce. de culture de ll\ heures en bouillon glucose de nos souches les plus pathogènes tuent le cobaye en 1 2 à !\H heures.

L'inoculation intramusculaire est suivie de la formation locale d'un gros phlegmon gazeux. La peau est tendue, brun verdâtre ou rouge violacé, humide; les poils se détachent quelquefois sur toute la surface de la lésion, ce qui s'explique par l'action de l'hydrogène sulfuré produit par le microbe. A la palpation on perçoit la crépitation. A distance, dans la paroi abdominale

décollée, existe mie poche fluctuante distendue par les gaz. A l'incision, les gaz s'échappenl en émettant souvenl une odeur d'hydrogène sulfuré, parfois très prononcée.

Les muscles de la cuisse, dissociés par les gaz, dépouillés de leurs aponévroses, sont souvent partiellement digérés. Ils s'effritenl el s'écrasent sous le dos du scalpel. Cette myolyse es1 particulièrement remarquable lorsqu' (prie avec certains échantillons de B. perfringens . Les muscles, les vaisseaux; les débris d'aponévroses, sont baignés par une sérosité rouge acajou où pullulent les microbes. La paroi abdominale forme une grande poche limitée par les muscles qui sont clivés par les gaz. Les muscles abdominaux spn1 mis sale, en étal de myolyse avancée. La surface péritonéale est rugueuse et couverte dé gouttelettes de graisse. Une sérosité rouge acajou abondante occupe le bas-fond iliaque de la poche. Des débris d'aponévrose et de tissu adipeux nagent dans ce liquide rougeatre qui tient en suspension de grosses gouttes <le graisse. Un œdème rouge rosi-, infiltré de fines huiles de gaz, limite la périphérie de la lésion qui s'étend à la cuisse opposée, remonte jusqu'au sternum et atteint parfois la cavité axillaire du côté injecté (voir pi. color. I).

L'infection se généralise toujours ; les microbes, avant la mort du cobaye sont abondants dans la cavité péritonéale, le foie, la rate el les reins. L'hémoculture est toujours positive.

Il arrive souvent que les animaux inoculés avec de faillies doses de B. perfringens meurent en deux à trois jours : ils présentent fréquemment alors des signes d'obstruction intestinale. Des matières non évacuées s'accumulent dans l'ampoule rectale. Cette paralysie *\u gros intestin explique le passage fréquent dans la cavité péritonéale et dans le sang du cobaye de microbes d'origine intestinale. Chez ces animaux à mort retardée, il est eu effet de règle de trouver dans le sang du cœur de tels microbes associés au IL perfringens.

Ce tableau, qui correspond aux lésions produites par la plupart des B. perfringens que nous avons isolés, se complète par l'apparition de phlyctènes localisées surtout au niveau de la mamelle inguinale du côté injecté.

Des lésions à caractère un peu différenl ont été produites par l'injection au cobaye de cultures provenant de souches toxigènes.

Si I on injecte dans la cuisse de cet animal i ', de ce. d'une cul-

ture toxique de B. perfringens, la tuméfaction du membre s'accompagne de la formation rapide (déjà nettement perceptible au bout de 4 à ."> heures) d'un gros œdème sous-cutané, localisé à la partie inférieure de l'abdomen. Cet œdème, mou, dépressible, progresse rapidement et remonte souvent jusqu'à la fourchette sternale. Les cobayes présentent précocement des signes d'intoxication (hérissement des poils, adynamie, hypothermie). A l'incision, l'œdème est rouge rosé et se résout rapidement en une sérosité laquée.

Quant au phlegmon gazeux local, il évolue et aboutit à la formai ion des lésions précédemment décrites.

L'injection de la culture totale sans la peau du cobave produit des lésions assez comparables à celles qui suivent l'inoculation intramusculaire. Elle est pourtant moins sévère. .Mlle Raphaël (i 5g i en a donné une excellente description, ainsi que des lésions viscérales produites par le B. perfringens.

Lapin. — Il est classique d'admettre que le lapin est plus résistant que le cobave à l'infection par le B. perfringens.

C'esï ainsi <pie G. Bull et I. I'ki TCHETT (i jj) ont montré tout récemment que pour provoquer la mort foudroyante du lapin par inoculation intraveineuse de culture totale il faut en injecter de 7 à 10 ce.

En injectant i à 2 ce. de culture par kilo d'animal, le lapin meurt dans la nuit.

A noter les altérations du sang (destruction d'un grand nombre de globules rouges consécutive aux injections intraveineuses de culture totale).

Les inoculations sous-cutanées ou intra-musculaires ne provoquent pas habituellement la mort de l'animal. Elles sont suivies de la formation d'un œdème, accompagné ou non d'infiltration gazeuse. Le plus souvent les animaux se rétablissent ; parfois ils succombent au bout de plusieurs jours.

Souris. — La souris est très sensible à l'injection intraveineuse de la culture totale. 1/2 à 1 4 de ce. amène la mort en quelques minutes; i/io-i/20 en quelques heures. A noter souvent des symptômes d'hémoglobinurie.

L'injection locale, sous-cutanée, de 1 > ce. de culture amène en général la mort de la souris en ->J\ à l\H heures. Les lésions loca-

les diffèrent de celles produites chez le cobaye, 'm observe mi importait) œdème local, sans crépitation gazeuse el sans décollement de la peau. Celle-ci est humide, un peu verdAtre, el sou- \eni tachée desang au voisinage du méat urinaire. Dans les frottis de sérosité les microbes sont peu abondants.

Il semble que le II. perfrïngens suit peu virulent pour la souris; par contre cet animal est très sensible à son action toxique probablement hémotoxique .

Pigeon. — <i. Bull et I. Pritcheti ont repris récemmenl l'étude «lu pouvoir pathogène du H. perfringens sur le pigeon. Cet animal paraît être extrêmement sensible; o,o5 à o,ot ce. de culture totale, inoculés dans h-s muscles pectoraux, tuenl le pigeon en ii à 20 heures. Localement il y a production d'un phlegmon gazeux comparable à celui que l'on observe chez le cobaye. Les microbes mmii très abondants dans 1rs muscles.

20 Toxines. — a) Hémotoxines — Les propriétés hemotoxiques du IL perfringens sont mises en évidence par les lésions que l'on observe chez l'homme et chez les animaux (anémie extrême, coloration verdâtre des téguments, hémoglobinurie, etc..) et également par l'action qu'exerce /// vitro sur les globules rouges les produits de sécrétion du bacille.

( '.'est ainsi que Scu 1 i.iz:: ( i38) signale l'hémoglobinurié chez les lapins infectés par le B. perfringens. Ouranofi | 280), quia repris cette étude, en utilisant des souches de B. perfringens isolées par Choukewitch, note les mêmes symptômes chez les jeunes chiens et les lapins morts à la suite d'injections d'hémotoxine du B.. perfringens filtrat de cultures sur milieu à la viande).

De même, tout récemment, C. G. lit 1.1. et Ida W. Pritcheti observaient une diminution intense des globules rouges et d'importantes lésions sanguines chez les lapins et les pigeons inoculés dans la veine avec la culture totale ou le liquide centrifugé ou filtré provenant de cultures jeunes de li. perfringens.

Nous avons eu l'occasion d'observer, inconstamménl il est vrai, les mêmes symptômes chez les souris inoculées soit avec la culture totale, soit avec le liquide centrifugé provenant de cultures très jeunes de B. perfringens.

7i DEUXIÈME PARTIE

L'action in vitro de l'hémotoxine de B. fcerfringens sur les globules rouges dediverses originesesl très différente suivant les souches utilisées.

Korentchewsky( i f{3) trouve quelejB. pêrfringens secrète peu « > 1 1 pas d'hémotoxine.

IIkh i i h '/.'/■' >, Hiwi.ki i///'S'i. démontrent l'existence de l'hémotoxine en cultivant le microbe dans un bouillon au sang.

Kami \ i 126 obtient l'hémoloxine dans des cultures erïDouillon glucose.

Mi . Campbell ( / jo) rapporte cette action hémolytique à l'acide butyrique produit.

I'. SiMONDsa étudié l'action hémolytique de 17 échantillons de B. pêrfringens. Le pouvoir hémolytique de certains échantillons esl 1res inarqué ; pour d'autres il esl faillie un nul.

( '.<>si \ ei Troisier ( 18g 1 ont noté l'action hémolytique du B. perfringem isolé des plaies de guerre.

Il en est de même d'OuRANOFF, qui l'étudié sur des globules rouges de différentes origines (homme, chien, pore, bœuf, mouton, cheval, cobaye, lapin, rat blanc, souris blanche, poule et pigeon). Pour certains animaux, l'hémoglobine seule est dissoute (cobaye, lapin, poule, pigeon). Pour les autres, l'érythrocyte est totalement détruit. Le pouvoir hémolytique est variable suivant les souches. L'hémotoxine esl détruite par chauffage à (io degrés pendant 1 ■> heure. Ce fait, qui est d'accord avec les observations de Costa et Troisier, est eu contradiction avec celles d'HERTER. Ce1 auteur n'a pu détruire complètement l'hémotoxine par un chauffage prolongé.

Ajoutons que, d'après Oi ranoff, des cultures dépourvues de propriétés hémolytiques possèdent souvent des propriétés hémoagglutinantes.

Nous axons pu nous convaincre que les cultures de B. pêrfringens (cultures jeunes de i.~>-i(î heures en bouillon glucose étaient fortement hémotoxiques. Ainsi sur ij de nos souches, -j possédaient des propriétés hémolytiques marquées pour les hématies d homme, de mouton et de cobaye. 1 10 de ce. de culture totale hémolysait de 1 ■' à 1 ce. d'une dilution à 1 : 20 des globules rouges utilisés, l'ai1 contre, les cultures ài;ées de '(S heures possèdent des propriélés liémof oxiques beaucoup plus

I ES MU ROBES IM v INFI I I IONS G Wi l SES /•)

Faibles. Le tableau ci-dessous montre que sur les - échantillons utilisés, un seul a conservé un index hémolytique élevé.

I Mil EAI \

Propriétés hémotoxiques du B. perfringens {globules /////nains)