Caractères m lturai

Le B. histolyticus est un anaérobie strict. Un de nos échan- 1 illons est extrêmement difficile à cultiver en bouillon. Les autres laces sont moins exigeantes, mais il est cependant préférable de ne les ensemencer qu'en bouillon irais ou régénéré par r5 minutes d'ébullition.

Bouillon Martin glucose à 2 p. 1000. — On voit apparaître un trouble uniforme <pii s'accentue après ->\ heures d'étuve. Les microbes tombent cl forment un dépôt pub érulent au fond du tube. Le milieu s'éclaircil en quelques jours ; cependant, un de nos échantillons auto-agglutine en ■> \ heures et forme un dépôt floconneux qui se tasse peu à peu dans le fond du tube.

L'odeur des cultures est légèrement fétide, siri ye/ir/is ; il n'v a pas de dégagement de gaz dans le bouillon.

Bouillon Martin non sucré. — Le II. histolyticus pousse aussi bien en bouillon non sucré qu'en bouillon sucré. Les caractères culturaux sont les mêmes.

Planche V. — /?. histolyticus. Colonies en gélose profonde gtucosée nitraiiV. Souche /.'■>.. — 1 çl •'. Colonies de ''1 heures. — .'i et '), Colonies de £8 heures. — 5, 1 olonies de '■'< jours,

l'i \\<,in: V

Bouillon Martin non sucré, additionné d'un cube de blanc d oeuf . — Les cultures sont abondantes el rapides ; le cube de blanc d'oeuf esl lentement attaqué sur les bords el rendu transparenl après quelques semaines d'étuve. Il linii par être presque complètement différé.

Gélose profonde glucosée nitratée. — Cultures d'aspecl assez. constant. Les colonies jeunes (12 à >'\ heures), de couleur gris jaunâtre, onl de 1 à 2 mm. de diamètre. Examinées au micros-

Fîg. 2.'i. — H. histolyticus, Souche God..; Colonie en gélose profonde glucosée, aspect de /|8 heures.

cope, elles présentent un noyau central irrégulief, entouré d'une auréole de filaments ramifiés et enchevêtrés (PL V). L'aspect de ces colonies rappelle un peu celui des colonies du même âge de B. sporoffènes. En vieillissant, les filaments périphériques s'accroissent et le centre opaque de la colonie s'éclaircit. Les colonies, nettement du type arborescent, ressemblent alors à celles du H. œdematiens (fig. 23).

Il n'y a pas de formation de gaz dans la gélose.

Gélose inclinée.

Le //. histolyticus donne 1111 semis de

colonies arrondies et transparentes, rappelant les colonies de streptocoque, niiiis présentant cependanl un centre un peu moins transparent, grisâtre.

Gélatine. — Le B. histolyticiis pousse à •>•>" dans la gélatine glucosée mi non glucosée. Les colonies en gélatine son! arborescentes, floconneuses (en flocon d'ouate). La gélatine esi rapidement et totalement liquéfiée.

Lait tournesolé. — Il est décoloré en ■>. à \ jours d'étuve; il coagule en lins grumeaux qui tombent au fond du tube et subissent une digestion complète : en huit à dix jours, il est transformé en un liquide clair, jaune ambré, à odeur à peine perceptible.

Sérum coagulé. — Le B. histolyticiis attaque le sérum coagulé, mais inégalement suivant les souches. Certains échantillons le digèrenl totalement et rapidement; d'autres beaucoup

plus lentement .

Milieux à la viande. — Le B. histolyticiis pousse facilement en eau physiologique — viande de bœuf et en bouillon Martin — viande de bœuf. Dans ce dernier milieu, la culture est plus rapide et [dus abondante; le cube de viande est rapidement attaqué après deux ou trois jours d'étuve; les faisceaux musculaires sont divisés, puis, la digestion du tissu conjonctif se poursuivant, les fibrilles sont dissociées à leur tour et tombent dans le fond du tube en formant une bouillie rougre.

(i. — Propriétés biochimiques

i° Propriétés saccharolytiques. — D'après II. Henry, le B. histolytjicus fait fermenter le glucose, le lévulose, le maltose. Il ne doit [tas attaquer fortement le glucose, car ses cultures sont aussi riches en milieu non glucose qu'en milieu glucose. Dans les milieux liquides, pas de dégagement gazeux. [De même, pas de gaz en gélose de \ Villon.

2° Propriétés protéolytiques. — Il liquéfie la gélatine, l'oval-

bumine, la caséine, le sérum coagulé. D'après II. Henry, les substances protéiques sont transformées en acides aminés, niais la décomposition n'est paspoussée plus loin, contrairement à <■«• «j u »• l'on observe pour le H. sporogenes, le B.-putri/icus, etc..

I ). — Poi VOIR V\ I lloia.M

Le B. histolyticus est pathogène pour tous les animaux de laboratoire : cobaye, lapin, souris, rat. Ce dernier animal es cependanl moins sensible.

Le pouvoir pathogène es1 très différenl suivanl les souches étudiées. Sur six souches identifiées, trois se smii montrées forte* meut pathogènes ; une faiblement : deux étaient à peu près dépourvues de toute virulence.

i° Culture totale. Cobaye. — L'injection infra-veineuse de i à 2 ce. de culture de 24 heures en bouillon Martin tue le cobaye en quelques minutes : trois à cinq minutes après l'injection, l'animal, qui présente nue dyspnée intense, tombe sur le côté, est pris de violentes secousses spasmodiques des membres antérieurs et postérieurs et entre dans le coma; la morl survient en une dizaine de minutes.

Un demi-centimètre cube détermine une crise semblable, mais [•lus lente, débutant après une incubation d'une dizaine de minutes; la mort survient en vingl inimités environ.

Après l'injection d'un quart de centimètre cube de culture totale, l'aniinal est pris de dyspnée, les poils se hérissent, puis le cobaye se rétablit. La mort survient en 12 a 18 heures. A l'autopsie, on ne trouve que peu de lésions; à noter surtout l'hyperémie des organes sous-diaphragmatiques.

L'injection intra-péritonêale est mortelle aux mêmes doses. Immédiatement après l'injection, l'animal est pris de secousses de la tête dues aux contractions violentes et spasmodiques des muscles du cou. Il esi agité el pousse des cris plaintifs. La mort survient dans la nuit. A l'autopsie, on trouve des lésions caractérisées par l'hyperémie intense des organes sous-diaphragmatiques. L'exsudât est hémorragique. La rate est hypertrophiée el friable, d'un

rouge noir: les capsules surrénales sonl hémorragiques; le foie, congestionné et unis ; les poumons sont normaux.

L'injection intra-musculaire cuisse) de la culture totale provoque les lésions caractéristiques de ce microbe. Immédiatement après l'injection de un à deux centimètres cubes, l'animal est pris de violentes secousses des muscles de la tête et du cou et pousse îles cris plaintifs.

Au boul de quelques heures, la cuisse est tuméfiée, la peau est rouge violacée; un léger œdème, mou et dépressible, envahit une partie de l'abdomen. Si l'on sacrifie le cobaye à ce stade, on constate, en incisant la lésion, l'existence d'une nappe hémorragique dans le tissu conjonctif sous-cutané. De gros caillots rougeframbroise s'échappent de l'incision. Le tissu conjonctif souscutané et péri-musculaire est fortement altéré, en voie de digestion intense. La lésion se prolonge par un œdème séreux hémorragique 0,111 envahil le tis^u conjonctif de la paroi abdominale.

Si on laisse évoluer la lési [uelques heures encore, la digestion du tissu conjonctif périmusculaire se poursuit; les muscles, puis les faisceaux musculaires sonl dissociés et liquéfiés, ce dont on peut se rendu' compte à la palpation du membre. A la suite de cette histolyse, qui atteint tous les tissus depuis le derme jusqu'à l'os, l'épiderme rouge-violacé cède et la lésion s'ouvre spontanément, souvent déjà au boul de 1 2 à 10' heures. Il s'en échappe une bouillie hémorragique, constituée par les tissus digérés. Le fémur, le tibia et le péroné sonl complètement dénudés et le cobaye s'appuie alors sur sou squelette pi. color. \ III, fig\ 2). L'articulation du genou est fréquemment atteinte: parfois même. le revêtement cartilagineux de l'articulation est décollé et le membre se détache spontanément auto-amputation inflammatoire). Fait curieux, malgré ces lésions locales considérables, le cobaye peut sun i\ re douze à \ inut-quatre heures.

Cette histolyse n'est pas putride el ne s'accompagne /ms de production de gaz.

\)[\ côté opposé à la lésion, on constate l'existence dans le tissu conjonctif altéré d'une nappe hémorragique qui est limitée par un œdème rouge, séreux.

Les muscles de la paroi abdominale sont à leur tour détruits ;

l'intestin n'esl souvent recouverj que par la fine séreuse périlonéale. Parfois, le péritoine m\r. el une partie «les anses intestinales faii hernie dans la lésion (pi. color. VII).

Dans la bouillie musculaire pullulent un nombre considérable de bacilles mobiles; ordinairement, les spores ne se forment pas in vivo ou seulement en très petit nombre dans les lésions déjà anciennes.

Le microbe est toujours présent dans I exsudai périlonéal. Il se présente sous forme de diploliaeilles souvenl assez longs i fig. 22 I. (Cependant on n'obsene pas de filaments à la surface du foie des animaux.

Un à 2 ce. de culture totale tuent le cobaye en t8 à ->.'\ heures, 1/2 à 1 '\ de ce. amène la mort de l'animal en 2/1 à 48 heures. Quelques heures axant la mort le cobaye est déjà froid, son poil se hérisse; il meurt par arrêt respiratoire.

U inoculation sous-cutanée de culture totale produit des lésions caractéristiques, mais beaucoup moins graves.

Quatre centimètres cultes de culture injectés sous la peau provoquent la formation d'une ulcération large comme une pièce de deux francs, à bords réguliers, décollés. Le fond de l'ulcération est rouge vif (pi. color. VIII, fig. t). Autour de la lésion, la paroi abdominale est décollée, hémorragique. Le cobaye survit.

Lapin. — Le lapin est extrêmement sensible au II. histolyticus. Deux à cinq centimètres cubes de culture injectés dons In veine d'un lapin de deux à trois kilos foudroient l'animal en 10 à i .""> minutes. Le lapin présente à peu près les mêmes symptômes que le cobaye : dyspnée intense, paralysie des pattes antérieures, secousses violentes el coma. 1 ce. tue le lapin dans la nuit.

L'injection intra-musculaire de 1 à ."> ce. de culture de -ik heures dans la cuisse «lu lapin détermine des lésions tout à fait semblables à celles observées chez le cobaye : digestion du tissu conjonctif péri et intramusculaire, hémorragie el petits caillots de sang, puis digestion des muscles qui sonl transformés en bouillie hémorragique; le fémur esl dénudé.

La mort survient en 24 heures (5 ce] ou en 26 à £8 heures i ce. |. La lésion peut s'ouvrir spontanément avant la mort, comme

chez le cobaye.

ITi DEUXIÈME PARTIE

Soi kis blanche. — La souris est égalemenl très sensible. i 2 ce. de cuit un- dans la cuisse de cet animal amène la morl en quelques heures; t/4decc. en >4 heures; i io ce. en deux à trois jours. Les Lésions sonl les mêmes que celles observées chez le coba\ e.

Rat blanc. — Le rat est l'animal le moins sensible. L'injection intra-musculaire de 3 à ."> ce. de culture totale tue cet animal en trois à quatre jouis. Les lésions sont limitées à la digestion

du tissu conjonctif sous-cutané ci à l'hémorragie. Les muscles sont peu altérés.

Conservation du pouvoir pathogène. — Dans les cultures en bouillon blanc d'oeuf mises à la glacière, le pouvoir pathogènese conserve pendant quelques mois. I ne de nos souches, très pathogène pour le cobaye en décembre (Qi5 elle tuait le cobaye à la dose de i 2 ce. dans la cuisse), ne provoqua plus que de faibles lésions chez cel animal en août luit) : io ce. de culture injectés dans les muscles provoquèrent seulement des lésions hémorragiques consécutives à une digestion partielle du tissu conjonctif; l'aniinal survécut et guérit. Par contre, ce microbe était encore pathogène pour la souris : ■> ce. de culture tuaient cet animal en i."i heures; i ce. provoquait des lésions qui se sont ouvertes spontanément au bout de i'\ heures.

2° Toxine. — Pour obtenir une bonne toxine, il faut utiliser des cultures très jeunes, autant que possible des cultures de de iS->'i heures. Lorsqu'on dépasse ce délai et qu'on laisse plus longtemps la culture à l'étuve à 'S-]0, on constate très rapidement l'affaiblissemenl et la disparition de son pouvoir toxique et même de sa virulence. Si on place une culture de 18 à ->'\ heures à la glacière, la toxine peul se conserver intacte pendanl toà iS jours au moins.

La toxine du II. histolyticus doit être comptée parmi celles qui [lassent le plus difficilement à travers le filtre de Chamberlain!, la plus grande partie de la toxine restant sur le filtre.

Ainsi, i à •> ce. de liquide clair centrifugé provenant d'une culture jeune de II. histolyticus tuent un lapin de 2 à 3 kilos en moins de i o minutes par inoculation intraveineuse. Si l'on filtre le

ils MICROBES DES INFECTIONS GAZEUSES l~-">

liquide sur une bougie de Chamberland, il faul injecter au humus m ce. pour obtenir le même résultat.

Cette toxine reproduil aussi bien /// vitro que in vivo i < mis les phénomènes observés avec la culture.

Ainsi, nous axons déjà mentionné que le li. histolyticus digère le blanc d'oeuf; or, ^a toxine filtrée possède égalemenl cette propriété. La digestion du cube de blanc d'oeuf in vitro à '■>-" esl pins lente, mais aussi complète el aussi constante que celle fini' l'on observe avec une culture microbienne.

D'autre pari, le filtrai de B. histolyticus liquéfie rapidement la gélatine comme le microbe lui-même.

Enfin, les lésions que Ton produil chez les animaux injectés avec la culture sonl égalemenl dues aux produits de sécrétion «lu microbe. Le cobaye, le lapin, la souris, injectés avec la toxine, présentent des lésions hémorragiques très étendues.

Nous avons observé «les lésions analogues chez le cheval qui nous sert à préparer un sérum anti-histoly tique.

L'injection sous-cutanée (région du cou de .'><> à loo ce. de toxine provoque constamment, pendant les trois premiers mois de l'immunisation, de l'œdème el la formation d'une énorme poche liquide, atteignant souvent le volume des deux poings. La peau qui recouvre la poche liquide s'amincit considérablement et, cïiniquement, on peut conclure à l'existence d'

poche purulente en imminence de rupture. Cependant la poche ne se rompt pas ei le liquide se résorbe petit à petit et finit par disparaître complètement au boutde huit à quinze jouis.

Les observations que nous avons faites précédemment chez le cobaye nous oui permis de penser qu'il s'agissait ici toUI simplement de collection hémorragique provoquée par la destruction de quelques vaisseaux «lu tissu sous-cutané produite par la toxine. La ponction de cette poche a montré en efFel qu'elle renfermait uniquement des globules rouges intacts, des grains pigmentaires provenant de la destruction «les hématies et un nombre considérable de leucocytes, polynucléaires et macrophages.

Ajoutons que le B. histolyticus ne secrète pas d'hémotoxines pour les hématies «1 homme, de mouton <'i de cobaye.

l'tLMIMK PARTIE

E. — Anticorps spécifiques

i° Agglutinines. — Nous avons commencé l'immunisation d'un cheval avec les corps microbiens (injection intra-veineuse de baciHes débarrassés de la toxine par centrifugation). Après avoir reçu jusqu'à plusieurs litres de culture, noire cheval donnait un sérum qui ne neutralisait même pas entièrement une dose mortelle de culture totale. Il était, par contre, assez fortement agglutinant vis-à-vis de l'échantillon homologue de B. histolyticus.

.Nous avons étudié l'action de ce sérum sur quelques autres souches de B. histolyticus que nous possédions. Les résultats obtenus ont été consignés dans le tableau XII.

Tableau Xlf. — B. histolyticus :

Agglutination par le sérum du cheval préparé avec la souche Lév.*

(Une croix indique une agglutination légère . deux croix une agglutination forte*

SOI i Ml S

DILUTIONS