DEUXIEME METHODE

Nous avons essayé également de mettre au point une deuxième méthode de dosage microbiologique des Antibiotiques. Méthode qui, comme la précédente, est facilement réalisable tout en donnant de bons résultats.

Principe:

Réaliser une culture en boîte de PÉTRI sur un milieu gélosé de Bacillus subtilis ou de Staphylocoque doré. Recouvrir le milieu ensemencé d’une feuille de cellophane percée de 8 trous. Sécher à l’étuve à 50-60°.

Mettre des dilutions convenables de Pénicilline-étalon et de Pénicilline à examiner dans chacun des trous. |

Placer à l’étuve à 37°. Contrôler à partir de la douzième heure et déterminer la dose minima d’Antibiotique nécessaire pour empêcher les colonies de se développer.

Choix de la bactérie-test :

Nous pouvons répéter cé qui a été dit pour la précédente méthode et employer soit le Bacillus subtilis, soit le Staphylocoque doré.

Choïx du milieu de culture:

Nous pouvons prendre indifféremment soit le milieu gélosé ordinaire, soit le milieu à l’'Autolysat de levure, les deux convenant parfaitement bien.

Technique:

Préparer une boîte de PÉrRi stérile et couler le milieu choisi préalablement liquéfié à 100°, refroidi à 40-45° et ensemencé à l’aide d’une émulsion dans le Sérum physiologique de la Bactérie envisagée.

Préparer un disque de papier de cellophane dont le diamètre est égal ou légèrement inférieur au diamètre intérieur de la boîte de PÉrRI. À l’aide d’une perceuse faire dans ce papier 8 trous identiques de 1 em. de diamètre et placer

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quelques minutes dans l’eau bouillante pour le ramollir. Retirer et appliquer aseptiquement le papier sur le milieu ensemencé.

Sécher à l’étuve à 50-60°. Dans ces conditions, les bactéries ne se développent pas.

Préparer 3 dilutions de Pénicilline-étalon de 05, 1 et 2 U.I. par cc. Faire également 3 dilutions de l’Antibiotique à examiner en le supposant sensiblement identique à la Pénicilline-étalon.

Dans les 8 trous on mettra successivement:

Dans le trou 1: 0,03 cc. d’eau distillée stérile. > MDN MIS NTIEN:

1 et 5 sont les deux témoins.

: 0,03 cc. de solution de Pénicilline-étalon à 0,5 U../cc.

: 0,03 cc. de solution de Pénicilline-étalon à 1OUT/ceE.

: 0,03 cc. de solution de Pénicilline-étalon à A U:.l cc.

: 0,03 cc. de solution d’Antibiotique à examiner supposée à 0,5 U.I./cc.

: 0,03 cc. de solution d’Antibiotique à examiner supposée à 1 U../cc.

: 0,03 cc. de solution d’Antibiotique à examiner supposée à 2 U./cc.

Porter à l’étuve à 37° et contrôler à partir de la douzième heure le développement des colonies. En 1 et 5 les colonies doivent se développer. Dans les autres trous le développement sera plus ou moins intense suivant la quantité d’Antibiotique introduite. Déterminer pour la Pénicilline-étalon et l’Antibiotique à examiner la dose minima nécessaire pour empêcher le développement des germes et faire leur rapport.

COETOR CNRS SR CO 0