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pneumobacille ne donnèrent que des résultats négatifs.

Nous avons dit que la péripneumonie est exclusivement une maladie des bovidés. En effet la sérosité péripneumonique la plus active, injectée en quantité considérable, au cobaye, au lapin, etc., ne les rend pas malades. Il n’en était pas de même des cultures obtenues par les auteurs dont nous venons de parler ; inoculées aux animaux de Jaboratoire à doses suffisantes, elles déterminaient des accidents locaux et causaient parfois la mort.

Pour expliquer cette différence d'action entre le virus naturel de la sérosité et le virus cultivé, ils invoquuient que le microbe est plus abondant et plus virulent dans les cultures; mais, chose surprenante, ces cultures actives sur les petits animaux d'expériences ne produisaient chez les vaches qu’une lésion locale passagère bien différente de l’œdème envahissant qui suit l’introduction sous la peau d’une trace de sérosité naturelle. Une autre circonstance aurait dù avertir que les cultures n’étaient point celles du vrai microbe péripneumonique, c’est l’absence d’incubation ; chez les vaches, la tuméfaction locale se montrait quelques heures après l’inoculation du liquide de culture, tandis qu’il ne survient jamais qu'après une incubation de 6 à 20 jours à la suite de l’inoculation de la sérosité péripneumonique.

Continuant les recherches sur la péripneumonie commencées par Pasteur, MM. Nocard et Roux poursuivirent les essais de culture, mais leurs tentatives restèrent infructueuses.

Lorsqu’en 1896, dans leur mémoire sur la toxine et l’antitoxine cholérique, MM. Metchnikoff, Roux et Salimbeni (1) eurent donné une nouvelle méthode de culture

(4) Mercuxixorr, Roux et SazimBenr. Toxine et antitoxine cholérique. Annales de l'Institut Pasteur, 1896.

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in vivo, MM. Nocard et Roux avec leurs collaborateurs MM. Borrel, Salimbeni et Dujardin-Beaumetz appliquèrent ce procédé à la péripneumonie (1).

Cette méthode consiste dans l’emploi de petites ampoules de collodion contenant du bouillon ensemencé avec le microbe dont on poursuit l'étude, et introduites dans la cavité péritonéale d’un animal.

Ces sacs peuvent être stérilisables par la chaleur sans perdre de leur souplesse, et l’osmose se fait parfaitement à travers leur membrane. Les humeurs de l’animal traversent la paroi de collodion qui forme une barrière infranchissable pour les phagocytes; les microbes ensemencés y pullulent en grande abondance et y sécrètent, à l’abrides leucocytes, les produits toxiques qui, par dialyse, se répandent dans l’organisme animal.

Ce procédé très ingénieux permet de cultiver et de conserver les microbes les plus fragiles qui peuvent ainsi se multiplier dansles humeurs d’un animal réfractaire,

Les petits sacs sont introduits dans le péritoine après laparotomie et les animaux supportent très bien la présence de ces corps étrangers dans leur cavité péritonéale.

Après un certain laps de temps, l'animal est sacrifié et, à l’autopsie, on trouve l’ampoule de collodion logée dans quelque coin de la cavité péritonéale, entourée d’une gangue fibrineuse dont on l'énuclée facilement.

On n’a qu’à puiser au moyen d’une pipette dans ce sac pour étudier la culture qui s’y est développée.

Pour remplacer le collodion, M. Metchnikoff recommande l'emploi de la très fine membrane tubulaire qui tapisse la cavité du roseau (Phragmitis communis). Gette membrane celluleuse, mince et fort résistante, est très per-

(1) Annales de l'Institut Pasteur, 1898.

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méable aux liquides et permet ainsi une dialyse rapide.

C’est grâce à ce procédé de culture #2 vivo que MM. Nocard et Roux ont réussi à cultiver le microbe de la péripneumonie, et nous rappellerons succinctement leurs expériences à ce sujet.

Des sacs de collodion ou de roseau furent remplis de bouillon ensemencé avec une trace de sérosité péripneumonique recueillie purement et insérés dans la cavité péritonéale d’un lapin.

Deux semaines après, l'animal est sacrifié. Le liquide retiré du sac est albumineux, opalescent et contient en suspension une quantité de très petits points réfringents mobiles et d’une ténuité telle qu'il est impossible de déterminer leur forme même aux plus forts grossissements.

Un sac témoin non ensemencé et placé comme le précédent dans le péritoine renferme un liquide albumineux absolument limpide. |

Le liquide dans lequel a poussé le microbe de la péripneumonie est opalescent, c’est le seul signe qui indique sa culture. Et encore est-il si peu marqué qu’il eût certainement échappé si l’on n'avait eu soin de mettre dans le péritoine des animaux des sacs témoins non ensemencés. C’est par comparaison que le bouillon ensemencé paraissait un peu opalin.

Une génisse inoculée avec quelques gouttes de ce liquide louche est prise d’un engorgement rapidement envahissant; l'infiltration œdémateuse énorme est identique à celle que l’on observe à la suite de l’inoculation de quelques gouttes de sérosité pulmonaire.

Dans cette première expérience, on aurait pu croire qu'ilne s'agissait là que d’une simple dilution de virus sans mulliplication de l’agent spécifique. Mais une série d’ensemencements successifs de sac à sac et en même

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temps d’inoculations à chaque passage levèrent tous les doutes à cet égard.

Dans les sacs, on retrouvait le même liquide légèrement trouble renfermant ces petits points mobiles et réfringents. La vache inoculée avec le deuxième passage présenta un engorgement considérable au point d’inoculation : l’æœdème, traité par des injections iodées, disparut et l’animal résista à cette atteinte.

La vache inoculée avec le contenu d’un troisième sac présenta une large tuméfaction et résista.

Si les œdèmes constatés étaient véritablement dus à une culture de péripneumonie, ces animaux devaient avoir acquis l’immunilé. C’est ce que l’expérience démontra. En effet, ils résistèrent à l’inoculation en région défendue de sérosilé péripneumonique, alors qu’une vache témoin succombait avec un œdème considérable.

Cette opalescence particulière du bowullon retiré des sacs de collodion était donc l'indice d’une culture de l’agent spécifique de la péripneumonie, puisque quelques gouttes de ce liquide produisaient un œdème caractéristique quelquefois mortel et donnait l’immunité aux animaux ayant résisté.

A cette époque, MM. Nocard et Roux nous associèrent à leurs travaux sur la péripneumonie et sa culture en milieux artificiels.

Une seule fois, un tube de bouillon peptonisé ensemencé avec quelques gouttes de sérosité présenta une culture analogue à celle des sacs. Après 72 heures d’étuve, le bouillon devint opalescent et contenait des petits points extrèmement fins et mobiles. 11 fut impossible d'obtenir un deuxième repiquage. Mais cette première culture permettait de penser qu’il était possible de cultiver ce microbe en dehors de l’organisme.

Après de longues recherches, on parvint à trouver un milieu nutritif favorable à la pullulation du microbe de la péripneumonie. Dans le chapitre ‘suivant, nous étudierons en détail les conditions et les caractères de la culture de cet infiniment petit, presque invisible pour les yeux de l’homme.