CHAPITRE VI

EXPÉRIMENTATION SUR LES ANIMAUX

Nous pouvons résumer maintenant la façon de procéder méthodiquement lorsqu'on veut étudier une maladie qu'on suppose produite par des bactéries.

Il importe d'abord de connaître l'histoire, les causes et la marche de cette maladie, de savoir si elle est contagieuse, infectieuse, épidémique. Si cette étiologie,si les symptômes généraux, la fièvre, la dépression des forces, etc., font penser à une maladie d'origine bactérienne, il est nécessaire :

1° D'étudier les tissus, les sécrétions et excrétions, les organes, surtout les organes atteints par la maladie, pour savoir s'il s'y trouve des bactéries.On emploie dans ce but toutes les méthodes de dessiccation des liquides sur les lamelles, de coloration, de préparation de coupes également colorées, d'examen au microscope avec les lentilles à immersion et l'éclairage Abbé que nous avons décrites précédemment ici (voy. chapitre III, page 6t et suivantes). Les micro-organismes de certaines maladies devront être aussi cherchés dans les eaux et dans le sol. On apprécie le siège des microorganismes et les lésions des tissus qui en sont la conséquence.

2» Après cette première constatation, lorsqu'on s'est assuré de la présence et de la constance des micro-organismes dans une maladie, on doit s'efforcer de les isoler, de faire des cultures à l'état de pureté du microbe ou des microbes qui existent dans les tissus. Les méthodes de culture et d'isolement ont été exposées dans le chapitre IV.

3° Lorsqu'un ou plusieurs micro-organismes auront ainsi été obtenus à l'état de culture pure plusieurs fois répétée et en assez grande quantité, on tentera de reproduire chez les animaux ou chez l'homme, si cela se peu(, la maladie qu'on a en vue. Le but de ces recherches, qui sont nécessaires pour établir la contagiosité, l'infectuosité d'une espèce bactérienne donnée, et pour découvrir les moyens prophylactiques ou thérapeutiques applicables à l'homme, justifie amplement de pareilles expériences sur les animaux. En règle générale, il faut choisir l'animal même où telle maladie donnée se produit spontanément, ou les animaux qui en sont les plus voisins. C'est ainsi que le charbon sera inoculé tout d'abord aux moutons, à la race bovine, chez qui il s'observe spontanément, puis aux animaux de laboratoire, au cobaye, au lapin, etc. C'est ainsi que Fehieisen a

EXPÉRIMENTATION SUR LES ANIMAUX

démontré la réalité du rôle du streptococcus de l'érysipùle en inoculant à l'homme des cultures pures. Ces inoculations ont mis hors de doute que l'érysipèle était hien une maladie parasitaire.

4" Dans les produits de culture pure des bacilles de certaines maladies, on cherchera les produits chimiques isolables, les ptomaïnes qui pourront dans certains cas reproduire les symptômes généraux de la maladie.

5» On cherchera le vaccin d'un virus après avoir déterminé quelles sont ses bactéries parasites (voy. le chapitre suivant) . Tel est le cycle des opérations qui doit être parcouru pour aboutir à la démonstration complète; telle est la marche logique suivie par Pasteur et Koch et que ce dernier a très bien formulée (1). Mais cette excellente méthode n'est pas toujours applicable. On peut chercher inutilement les bactéries d'une maladie virulente, comme par exemple celles de la rage, sans y réussir absolument. Cela n'empêche pas d'en découvrir le vaccin comme Pasteur l'a fait pour la rage. De plus il est des maladies de l'espèce humaine qui jusqu'ici n'ont pas d'analogues chez les animaux, comme la scarlatine, la rougeole, la syphilis et la fièvre typhoïde. Il manque alors un élément du problème pour que la certitude soit absolue.

Notre but est d'indiquer, dans ce chapitre, les précautions spéciales qu'on doit prendre dans l'expérimentation sur les animaux. Nous renvoyons aux traités de physiologie pour ce qui concerne la technique générale de l'expérimentation, les anesthésiques, le mode de fixation et d'immobilisation des animaux, les appareils et instruments appropriés (2). L'expérimentation varie suivant les maladies ou virus que l'on veut transmettre, suivant les organes où l'on doit opérer et suivant les animaux.

Lorsqu'on veut soumettre un animal à des inhalations toxiques ou virulentes, on le place dans une boîle en bois dont l'air est rempli de particules aqueuses tamisées par un appareil a pulvérisation. On peut faire fonctionner cet appareil pendant un temps plus ou moins long, une heure par exemple ou davantage. Dans le vase de l'appareil on met un mélange d'une culture pure avec de l'eau.

D'après Verragut, on mêle 10 grammes de crachats tuberculeux à 50 grammes d'eau. On filtre et on pulvérise.

Pour introduire dans l'estomac des cultures de bactéries, il est bon d'employer, pour les grands animaux, tels que la vache ou le mouton, la méthode de Koch, Gaffly, etc. On place dans un fragment excavé d'une

(1) L'Inoculation préventive du charbon, réplique au discours prononcé à Genève par M. Pasteur, 1883.

(2) Voir à ce sujet les leçons de Claude Bernard ; — Beaunis, Nouveaux éléments de pliysiologie liumaine;— Burdon Sanderson, Foster et Lauder Bruiiton, Manuel du laboratoire traduit de l'anglais par Moquin-Tandon, 188').

EXPÉRIMENTATION SUR LES ANIMAUX

pomme de terre la culture à faire avaler et on met ce morceau de pomme de terre k la base de la langue de l'animal.

Tous les instruments dont on se sert (scalpels, aiguilles, pinces, etc.) auront été stérilisés au préalable comme il a été dit plus haut. Les seringues de Pravaz à canule tranchante seront construites de façon à ce qu'on puisse les démonter, les laver et les placer pendant un certain temps dans l'eau bouillante ou dans le chauffoir à 150° après chaque opération. On emploie à cet effet des rondelles de caoutchouc durci ou une cordelette d'amiante au lieu des rondelles de cuir qui ne supportent pas l'ébullition.

La température à laquelle germent les micro-organismes est, d'une façon générale, supérieure à celle de l'atmosphère, et par suite, des animaux a sang froid. Aussi ne se sert-on pas aussi souvent de la grenouille que des petits mammifères. Cependant on l'emploie aussi, et même on peut réchauffer pour favoriser le développement de certaines bactéries comme le charbon (Gibier). L'injection des virus se fait le plus souvent dans la grenouille par le sac Ij'mphatique dorsal ; on soulève légèrement la peau du dos avec une pince fine, et on fait entrer la canule tranchante de la seringue de Pravaz avec laquelle on pousse une quantité déterminée du liquide à étudier. Pour certaines maladies, il suffit de piquer la peau et de faire pénétrer dans le sac lymphatique l'extrémité d'une aiguille trempée dans le liquide à examiner pour obtenir le même résultat.

Au lieu du sac lymphatique dorsal on peut injecter, chez la grenouille, le tissu cellulaire lâche et lacunaire qui double presque partout la peau, sur les cuisses, sur l'abdomen ; ou bien on pénètre directement dans la cavité du péritoine, ce qui est très facile sans léser les organes qui y sont contenus, pourvu qu'on ait la précaution de prendre entre les doigts et de soulever la paroi de façon à faire pénétrer la canule à travers le pli ainsi produit ou un peu au-dessous de lui. Il est facile aussi de faire chez la grenouille une injection dans le tronc artériel. Pour cela, on curarise la grenouille en inoculant une goutte de solution de curare à i pour 100, puis on immobilise les pattes de la grenouille sur un liège avec des épingles; on sectionne le sternum avec des ciseaux, on ouvre le péricarde, on saisit avec des pinces fines la pointe du cœur qu'on tire un peu par en i)as de façon à découvrir le tronc artériel, et on y fait pénétrer la pointe d'une fine canule de la seringue de Pravaz.

Parmi les petits mammifères, la souris est l'un des plus sensibles à l'action des virus. On peut immobiliser la souris en fixant ses pattes sur un liège percé de trous ou sur une planchette, mais il est plus simple, si l'on veut faire une injection sous-cutanée, de la prendre par la queue et de la placer la tête en bas dans un bocal en verre. La tûte et le corps sont dans

COIINII, ET DADES. — 2* CCl. 12

178 EXPÉRIMENTATION SUR LES ANIMAUX

le bocal tandis qu'on lient la queue de la main gauche sur le bord du bocal. La souris ne peut se retourner parce que ses pattes glissent sur le verre. On coupe les poils de la base de la queue ou du dos, on lave la peau avec une solution de sublimé, ou bien on cautérise superficiellement l'épiderme avec une baguette de verre chauffée au rouge, puis on fait l'injection dans le tissu cellulaire sous-cutané avec la seringue de Pravaz. Pour la septicémie des souris de Koch, il suffit de faire une piqûre avec une aiguille trempée dans le liquide septique.

Si l'on veut faire une inoculation à la nuque ou à l'oreille d'une souris, on prend dans la main gauche la queue de l'animal et, avec une pince à branche recourbée tenue entre les doigts de la même main, on saisit la nuque. L'animal étant ainsi immobilisé, on opère la piqûre avec la main droite.

Pour immobiliser les gros rats, il faut les prendre sur le dos, sous les aisselles, avec les deux branches d'une longue pince à branches ; on les enlève ainsi et on met dans leur bouche un mors, le mors de Ranvier par exemple, qu'on fixe par une ficelle dans le trou d'une planchette; les pattes sont attachées sur la planchette et le rat est tout à fait immobilisé pour les opérations longues ou complexes. Mais pour les injections simples à la base de la queue, il suffira le plus souvent d'agir comme pour la souris, de les placer dans un grand bocal. Pendant qu'on tient leur queue de la main gauche, il faut recouvrir le bocal d'un couvercle assez lourd pour qu'ils ne puissent pas se retourner, après quoi on fait les opérations préliminaires de lavage de la peau ou de cautérisation, puis l'injection avec la main droite.

Les mêmes opérations se font avec plus de facilité encore chez le lapin et le cobaye, qu'un aide tient dans ses mains et présente à l'opérateur ou que ce dernier tient lui-même sur ses genoux ou sur une table. Il n'est pas nécessaire d'endormir les animaux pour les petites opérations qu'on leur fait subir. L'injection se fait le plus souvent sous la peau du dos ou à la base de la cuisse. Il faut toujours avoir soin de couper les poils, de laver la surface de la peau avec la solution de sublimé, ou de la brûler superficiellement dans le point à injecter. On insère souvent dans le tissu conjonctif sous-cutané de petits fragments de tissu affecté. Il faut alors, après avoir pris les précautions précédentes, faire une ponction de la peau avec un bistouri, agrandir le trou en creusant avec l'extrémité d'un stylet le tissu conjonctif, puis on insère le fragment à grefi'er avec une pince fine, pn l'entrant profondément ; on pratique ces grefi'es dans le tissu conjonctif de la peau du dos ou des aisselles.

r^Pôut injecter dans le péritoine sans crainte de léser les organes, un aidé tient l'animal en le courbant de manière à mettre les muscles de l'ab-

KXPÉHIMENTATION SUR LES ANIMAUX

doinen on flexion ; on saisit entre le pouce et l'index de la main gauche la peau et les plans musculaires do l'abdomen à sa partie médiane et on maintient solidement ce pli épais qui est formé seulement par la paroi abdominale. On fait pénétrer la canule de la seringue à la base du pli de façon à ce que celle-ci, ayant traversé toute la paroi de la moitié du pli, vienne loucher par son extrémité la seconde partie du pli; on lâche alors la paroi qu'on tenait de la main gauche et la canule est libre dans le péritoine.

L'insertion de fragments dans la chambre antérieure de l'œil, l'injection du liquide dans cette même cavité ou dans la cornée, ont pour avantage de permettre l'observation jour par jour de tout ce qui se passe après Topération. Aussi est-il excellent de choisir l'œil du lapin pour ces inoculations, suivant le procédé de Golsielier et de Cohnheim. 11 faut d'abord immobiliser le globe oculaire avec un fixateur introduit sous les paupières. On emploie à cet efl'et une pince dont les deux branches, introduites sous les paupières, s'écartent et les fixent en môme temps que le bulbe oculaire. On fait une incision de la cornée tout près de la circonférence de l'iris comme pour une iridectomie. L'ouverture faite, on y introduit avec une pince fine le petit fragment de tissu à inoculer. On peut de même profiter de l'immobilisation pour injecter avec une canule tranchante et la seringue de Pravaz. Après l'opération, on peut coudre l'oreille du lapin sur les paupières, de façon à éviter les traumalismes et toute inflammation consécutive à l'opération.

Nous avons souvent injecté directement des liquides infectieux dans le sang des veines de l'oreille du lapin. Le procédé est des plus simples. Un aide tenant le lapin, on prend l'oreille gauche, on cherche la grosse veine de la base de l'oreille près de la peau du front, on coupe les poils, on lave la peau; on coupe un très petit pli de la peau avec des ciseaux courbés; la veine fait alors une saillie très manifeste et elle est rectiligne en cet endroit, ce qui est une très bonne condition. On y fait entrer la canule <l'une seringue de Pravaz de façon à ce que cette canule soit bien exactement dans le sens du vaisseau et qu'après son. introduction elle s'y meuve facilement. L'injection se fait si bien, lorsque l'opération a réussi, qu'on injecte ainsi plusieurs centimètres cubes de liquide avec la plus grande facilité. Si on a piqué à côté de la veine, il se fait simplement un œdème du (issu cellulaire.

On a souvent bien d'autres petites opérations à faire chez les lapins. Ainsi, pendant que nous injections des hquides remplis de bactéries dans les veines de l'oreille, nous pratiquions le cathélérisme de la vessie pour apprécier le moment de l'apparition des bactéries dans l'urine vésicale. Pour ce cathélérisme, on se sert d'une très fine bougie en celluloïdine,

180 EXPÉRIMENTATION SUR LES ANIMAUX

qu'on a soin de passer dans l'eau bouillante et de graisser avec de l'huile phéniquée au moment de s'en servir. On doit aussi parfois faire la ligature de l'urèthre, ce qui se fait en masse avec un fil élastique, pratiquer la trachéotomie du lapin, le cathétérisme œsophagien pour introduire des substances toxiques ou autres, faire des injections dans le gros intestin par l'anuSj dans l'intestin grêle en ouvrant l'abdomen, des inoculations dans les articulations, etc. : toutes opérations en général faciles et pour lesquelles il faut toujours s'entourer des précautions les plus rigoureuses de l'antisepsie. Les cobayes sont encore plus faciles à fixer. On peut les hypnotiser en recouvrant la figure pendant une minute avec un tablier pendant qu'on les tient immobiles. Ils restent alors comme anesthésiés. S'ils se réveillent on recommence de la même façon.

Lorsqu'on doit examiner le sang du cœur des grenouilles ou des mammifères atteints de maladies infectieuses expérimentales, on commencera par détacher ou soulever le sternum; on sectionnera le péricarde, puis on introduira dans l'oreillette ou le ventricule droit une pipette effilée et stérilisée ou la canule d'une seringue de Pravaz également stérilisée.

Presque toujours, pour les opérations sur les chiens, on sera obligé de les anesthésier par le chloroforme ou par la morphine, de les museler et de les attacher sur la table à opérations. Nous employons moins souvent le chien que les autres animaux. Mais il est une affection virulente où ils sont nécessaires, la rage, dans laquelle Pasteur inocule toujours, soit le liquide virulent, soit le vaccin, dans le cerveau, après avoir pratiqué la trépanation.

Les singes, qui se rapprochent le plus de l'homme, ont paru indiqués pour l'inoculation des maladies virulentes exclusivement propres h l'homme, telles que la syphilis et la fièvre typhoïde. Pasteur emploie aussi le singe, comme nous le verrons bientôt, pour atténuer le virus de la rage. Les singes offrent aussi la plus grande disposition à la tuberculose spontanée, ce qui en fait de mauvais animaux de contrôle pour l'étude de cette maladie.

Les oiseaux, le pigeon, la poule, sont souvent employés par les expérimentateurs. Les poules sont des animaux très commodes, non seulement pour le choléra des poules, mais aussi pour beaucoup de maladies infectieuses. Leur péritoine est très peu 'susceptible d'inflammation; aussi sont-elles indiquées pour les opérations qui se pratiquent dans le ventre.

Indépendamment des expériences simples dont nous venons de parler, il en est de plus complexes, dans lesquelles on met les animaux dans certaines conditions déterminées avant de procéder à l'inoculation d'une maladie infectieuse.

C'est ainsi que, pour étudier l'action des bacilles en virgule, Koch avait

EXPÉRIMENTATION SUR LES ANIMAUX

commencé par donner une entérite calarrhale aux animaux. Il n'a pas réussi par ce moyen mais par un autre plus complexe qui consiste à donner de l'extrait alcoolique d'opium, à neutraliser le suc gastrique et enfin à introduire dans l'estomac, avec une sonde, un liquide contenant des bacilles virgules.

C'est ainsi que pour bien localiser l'action des micro-organismes sur le rein, on pourra donner à des lapins une néphrite parenchymateuse avec la cantharidine, ou une néphrite interstitielle par une intoxication saturnine prolongée. Chauveaua produit primitivement une nécrose du testicule par le bislournage avant d'injecter dans le tissu conjonctif ou les veines du cheval le vibrion septique. On arrive au même résultat par la ligature des vaisseaux nourriciers d'un organe. De même les fractures, les contusions d'un os déterminées au préalable chez des lapins ou des chiens, servent 5. localiser l'aclion du micro-organisme de l'ostéo-myélite, et à donner des suppurations osseuses et péri-osseuses semblables à celles qu'on observe chez l'homme.

Les exemples de ces procédés complexes d'expérimentation sont très communs.

Ainsi nous avons injecté de la matière tuberculeuse diluée à un lapin chez qui le nerf sciatique avait été coupé. La tuberculose se localisa dans l'articulatiou du genou du côté de la section du nerf, et nous observâmes une véritable tumeur blanche fongueuse et suppurative de nature tuberculeuse.

De même la section d'un nerf pneumogastrique sera un adjuvant pour la localisation des pneumonies.

Après qu'on a observé les symptômes des maladies déterminées chez les animaux, ceux-ci meurent spontanément ou sont sacrifiés. On les tue en les mettant sous une cloche contenant du chloroforme.

Avant l'autopsie, on lave et on mouille avec une solution de sublimé à 1 pour 1000 la surface de la peau, on étend l'animal sur une plaque en bois, à bords un peu relevés, en fixant les pattes avec de grandes épingles ou avec des ficelles attachées à des crochets aux quatre extrémités de la plaque, on l'ouvre avec des instruments stérilisés, et on recueille le sang et les liquides comme cela a été dit précédemment.